山银花茎叶化学成分及其抗炎活性研究

蒋小华，韦玉璐，白 军，颜小捷，李典鹏，卢凤来∗

（1.广西植物功能物质与资源持续利用重点实验，广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，广西 桂林 541006； 2.桂林华艺生物科技有限公司，广西 桂林 541805）

山银花为忍冬科植物华南忍冬LoniceraconfusaDC.的干燥花蕾，主产于广西、广东、江西、海南、湖南等省区，为华南地区“金银花” 中药材的主要品种，具有清热解毒、疏散风热的功效，被用作解毒剂和清热药，其藤和叶也入药［1-2］。山银花作为历史悠久的传统中草药，许多学者对其进行化学成分、药理活性等方面的研究，结果表明，化学成分主要为环烯醚萜苷类、黄酮类、咖啡酸衍生物、三萜及三萜皂苷类、甾醇类、挥发油等［3-8］，具有抗菌［9］、抗炎［9-11］、抗氧化［10］、保肝［12］、保护血管、免疫调节［13-16］等作用，但对单体化合物的活性研究较少。为了来年花开得更好，山银花种植过程中需要进行整形修剪，修剪下大量茎叶常常被丢弃，造成极大的资源浪费。目前山银花的应用和研究都集中在山银花的花蕾上，而对茎叶的研究较少［17］。本实验以山银花茎叶80%甲醇提取物为研究对象，进行化学成分研究及单体化合物体外抗炎活性评价，以期为山银花综合开发利用提供依据。结果从山银花茎叶分离得到13 个化合物，主要为环烯醚萜苷类、黄酮类等，极大丰富了山银花的化学多样性。化合物1 首次从忍冬属植物中分离得到，化合物3、5、7、9、11、12 首次从山银花茎叶中发现，化合物2～8，11～13 具有一定的抗炎活性。

1 材料

Avance 500 MHz 核磁共振波谱仪 （德国Bruker 公司）； TBE-300C 高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司）； Agilent1200 高效液相色谱仪、Agilent Zorbax SB-C18 色谱柱（美国Agilent公司）； LCMS-IT-TOF 液相色谱质谱联用仪、LC-2030C 高效液相色谱仪（日本岛津公司）； 硅胶薄层板 F254（ 德国 Mercd KGaA 公司）； Diaion HP20SS （ 日本 Mitsubishi Chemical 公司）；Sephadex LH-20 （瑞典GE 公司）； Spark 多功能酶标仪（瑞士Tecan 公司）； 311 型二氧化碳培养箱（美国Thermo Fisher Scientific 公司）； XDS-100 倒置显微镜（上海光学仪器厂）。

小鼠巨噬细胞RAW264.7 （中国科学院上海细胞库）； 胎牛血清（赛业生物科技有限公司）； 高糖培养基（美国Gibco 公司）； CCK-8 试剂盒（美国MedChemExpress 公司）； 脂多糖、吲哚美辛（美国Sigma Aldrich 公司）； 一氧化氮检测试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）。乙腈、甲醇（色谱纯，美国Thermo Fisher Scientific 公司）； CD3OD、DMSO （美国Cambridge Isotope Laboratories 公司）；其他试剂为分析纯； 水为超纯水。

山银花茎叶采于广西桂林市资源县，经广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所卢凤来副研究员鉴定为忍冬科植物山银花LoniceraconfusaDC.的茎叶。凭证标本（编号LC202109-1） 保存于广西植物功能物质与资源持续利用重点实验室。

2 提取与分离

取干燥山银花茎叶5.0 kg，粉碎，过80 目筛，用10 倍量80%甲醇加热回流提取3 次，每次3 h，过滤，合并提取液，将提取液浓缩得浸膏202.0 g。浸膏150 g 经HP20SS 大孔树脂柱色谱分离，以甲醇-水（0 ∶1 ～1 ∶0） 梯度洗脱，经薄层色谱（TLC） 检测合并得到Fr.A ～Fr.L。Fr.D （6.0 g）经Sephadex LH-20 柱层析纯化，以20% 甲醇等度洗脱，经TLC 检测合并得到Fr.D-1 ～Fr.D-5。Fr.D-2、Fr.D-4 经Agilent 1200 半制备型HPLC 纯化，以甲醇（A） -水（B） 梯度洗脱（0 ～30 min，10% ～40% A； 30～50 min，40% ～80% A； 体积流量3 mL/min），得到化合物1 （15.0 mg）、2 （23.0 mg）、3 （64.0 mg）、4 （36.0 mg）、5 （43.0 mg）。Fr.F 经高速逆流色谱纯化，以二氯甲烷-甲醇-水（10 ∶7 ∶3） 为溶剂，上相为固定相，得到Fr.F-1～Fr.F-9。Fr.F-7、Fr.F-8 分别经半制备HPLC 纯化，以甲醇（A） -水（B） 梯度洗脱（0 ～30 min，10% ～30%A； 30～50 min，30% ～50%A； 体积流量3 mL/min） 得到化合物6 （105.0 mg）、8 （299.0 mg）。Fr.I （7.3 g） 经Sephadex LH-20 柱层析纯化，以甲醇洗脱，得到Fr.I-1～Fr.I-6。Fr.I-5 析出沉淀，经20%、100% 甲醇洗涤沉淀得化合物7（126 mg）。Fr.I-4 再经Sephadex LH-20 凝胶柱层析纯化，以50%甲醇洗脱，得到Fr.I-4-1 ～Fr.I-4-7。Fr.I-4-4、Fr.I-4-5、Fr.I-4-7 经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱纯化，以甲醇-水（1 ∶1 ～1 ∶0） 梯度洗脱，再经重结晶及半制备HPLC 纯化，以甲醇（A） -水（B） 梯度洗脱（0 ～30 min，10% ～30%A； 30 ～50 min，30% ～50% A），得到化合物9（6.0 mg）、10 （9.0 mg）、11 （13.0 mg）、12（15.0 mg）、13 （30.0 mg）。

3 结构鉴定

化合物1： 白色固体，分子式C19H28O11，HRESI-MSm/z： 431.155 9 ［M - H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：4.39 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1″），4.44 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.68 （1H，d，J＝11.8 Hz，H-7b），4.95 （1H，d，J＝11.8 Hz，H-7a），7.29 （1H，m，H-4），7.35 （2H，t，J＝7.4 Hz，H-3，5），7.45 （2H，d，J＝7.1 Hz，H-2，6）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 62.8 （C-6″），69.8 （C-6′），71.6 （C-4′），71.6 （C-4″），72.0 （C-7），75.1 （C-2′），75.1 （C-2″），77.2 （C-3′），77.9（C-3″），78.0 （C-5′），78.1 （C-5″），103.4 （C-1′），104.9 （C-1″），128.7 （C-4），129.2 （C-3，5），129.3 （C-2，6），139.1 （C-1）。以上数据与文献［18］ 报道基本一致，故鉴定为苄醇-O-β-D-吡喃葡萄糖- （1→6） -β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2： 褐色油状物，分子式C16H22O9，HR-ESI-MSm/z： 359.124 6 ［M ＋H］＋。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：1.72 （1H，m，H-6b），1.80（1H，m，H-6a），3.18 （1H，m，H-5），4.40 （1H，td，J＝11.8，2.5 Hz，H-7b），4.48 （1H，ddd，J＝11.0，4.2，2.1 Hz，H-7a），4.71 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.30 （1H，dd，J＝10.3，1.8 Hz，H-10b），5.34 （1H，m，H-10a），5.57 （1H，dd，J＝13.5，5.9 Hz，H-8），5.59 （1H，dd，J＝13.6，5.9 Hz，H-1），7.62 （1H，d，J＝2.5 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 25.9 （C-6），28.4（C-5），43.8 （C-9），62.7 （C-6′），69.7 （C-7），71.5 （C-4′），74.7 （C-2′），77.9 （C-3′），78.4 （C-5′），98.0 （C-1），99.7 （C-1′），106.0 （C-4），120.8 （C-10），133.3 （C-8），153.9 （C-3），168.5（C-11）。以上数据与文献 ［19-21］ 报道基本一致，故鉴定为獐牙菜苷。

化合物3： 白色粉末，分子式C17H24O10，HRESI-MSm/z： 389.144 3 ［M ＋H］＋。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ： 1.74 （1H，td，J＝13.7，2.9 Hz，H-6a），1.89 （1H，ddd，J＝13.6，4.9，1.3 Hz，H-6b），3.54 （3H，s，COOCH3），3.90 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6′a），3.92 （1H，d，J＝1.9 Hz，H-6′b），4.71 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.29 （1H，d，J＝1.9 Hz，H-10a），5.31 （1H，d，J＝1.9 Hz，H-10b），5.34 （1H，d，J＝1.5 Hz，H-7），5.54 （1H，dd，J＝13.6，6.3 Hz，H-8），5.58 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-1），7.64 （1H，d，J＝2.4 Hz，H-3）；13CNMR （125 MHz，CD3OD）δ：22.9 （C-5），30.2 （C-6），43.6 （C-9），57.0 （-OCH3），62.7 （C-6′），71.5 （C-4′），74.6 （C-2′），78.1 （C-3′），78.4 （C-5′），98.6 （C-1），100.3 （C-1′），103.3 （C-7），105.4 （C-4），121.0 （C-10），133.4 （C-8），154.5（C-3），167.4 （C-11）。以上数据与文献［20-22］报道基本一致，故鉴定为表断马钱子苷半缩醛内酯。

化合物4： 白色粉末，分子式C17H24O10，HRESI-MSm/z： 389.155 8 ［M ＋H］＋。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：1.50 （1H，qd，J＝13.5，9.2 Hz，H-6b），2.02 （1H，ddd，J＝13.2，4.1，2.6 Hz，H-6a），2.70 （1H，m，H-9），3.58 （3H，s，-OCH3），5.30 （1H，m，H-10b），4.70 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-7），5.35 （1H，m，H-10a），5.52 （1H，m，H-8），5.58 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-1），7.62 （1H，d，J＝2.4 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 25.2 （C-5），31.6 （C-6），43.7 （C-9），57.1 （-OCH3），62.7 （C-6′），71.5 （C-4′），74.7 （C-2′），77.9 （C-3′），78.3 （C-5′），97.9 （C-1），99.7 （C-1′），105.1 （C-7），105.4 （C-4），121.1 （C-10），133.0 （C-8），154.1 （C-3），167.6 （C-11）。以上数据与文献［20-21］ 报道基本一致，故鉴定为马钱子苷半缩醛内酯。

化合物5： 白色粉末，分子式C16H22O11，HRESI-MSm/z： 389.106 9 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：2.26 （1H，dd，J＝16.7，9.6 Hz，H-6b），2.85 （1H，ddd，J＝9.5，5.6，3.9 Hz，H-9），3.08 （1H，dd，J＝16.7，4.5 Hz，H-6a），3.23（1H，dt，J＝14.6，7.3 Hz，H-5），4.68 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.25 （1H，m，H-10b），5.29（1H，d，J＝1.1 Hz，H-10a），5.49 （1H，d，J＝3.8 Hz，H-1），5.66 （1H，dt，J＝17.2，10.0 Hz，H-8），7.51 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 28.4 （C-5），34.9 （C-6），45.3（C-9），62.7 （C-6′），71.5 （C-4′），74.6 （C-2′），78.0 （C-5′），78.4 （C-3′），97.5 （C-1），99.9 （C-1′），110.2 （C-4），120.5 （C-10），134.6 （C-8），153.6 （C-3），170.2 （C-11），176.3 （C-7）。以上数据与文献［19］ 报道基本一致，故鉴定为裂环马钱苷。

化合物6： 白色固体，分子式C17H24O11，HRESI-MSm/z： 403.123 0 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：2.26 （1H，dd，J＝16.6，9.0 Hz，H-6b），2.81 （1H，m，H-9），2.93 （1H，dd，J＝16.5，5.0 Hz，H-6a），3.68 （3H，s，-OCH3），4.65（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.48 （1H，d，J＝3.9 Hz，H-1），5.63 （1H，dt，J＝17.2，10.0 Hz，H-8），7.47 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 28.6 （C-5），35.1 （C-6），45.3（C-9），51.6 （-OCH3），62.7 （C-6′），71.5 （C-4′），74.6 （C-2′），78.0 （C-3′），78.4 （C-5′），97.6 （C-1），99.9 （C-1′），110.1 （C-4），120.5（C-10），134.5 （C-8），153.6 （C-3），168.9 （C-11），176.3 （C-7）。以上数据与文献［19］ 报道基本一致，故鉴定为断氧化马钱苷。

化合物7： 淡黄色粉末，分子式C19H30O11，HR-ESI-MSm/z： 433.134 3 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ： 1.64 （1H，ddd，J＝13.9，8.0，4.6 Hz，H-6a），2.07 （1H，dt，J＝13.6，6.6 Hz，H-6b），2.67 （1H，td，J＝9.3，4.7 Hz，H-9），2.91（1H，dd，J＝12.9，6.2 Hz，H-5），3.28 （3H，s，-OCH3），3.30 （3H，s，-OCH3），3.66 （1H，dt，J＝15.1，7.6 Hz，H-6′a），3.70 （3H，s，COOCH3），3.90 （1H，dd，J＝11.9，1.8 Hz，H-6′b），4.49（1H，dd，J＝7.0，4.6 Hz，H-7），4.67 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），5.27 （1H，d，J＝10.5 Hz，H-10a），5.32 （1H，d，J＝17.3 Hz，H-10b），5.50（1H，t，J＝5.8 Hz，H-1），5.73 （1H，ddd，J＝17.4，10.3，8.9 Hz，H-8），7.43 （1H，t，J＝1.8 Hz，H-3）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 29.4（C-5），33.3 （C-6），45.3 （C-9），51.7 （11-OCH3），52.6 （-OCH3），53.9 （-OCH3），62.8 （C-6′），71.6 （C-4′），74.6 （C-2′），78.0 （C-3′），78.4 （C-5′），97.8 （C-1），100.1 （C-1′），104.5（C-7），111.7 （C-4），119.8 （C-10），135.8 （C-8），153.2 （C-3），169.2 （C-11）。以上数据与文献［22］ 报道基本一致，故鉴定为裂马钱素二甲基乙缩醛。

化合物8： 淡黄色粉末，分子式C17H20O9，HR-ESI-MSm/z： 367.101 4 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，CD3OD）δ：2.01 （1H，dd，J＝13.5，7.0 Hz，H-6′b），2.18 （3H，m，H-4′，6′a），3.69 （3H，s，-OCH3），3.73 （1H，dd，J＝7.4，3.1 Hz，H-3′），4.13 （1H，dt，J＝6.8，3.3 Hz，H-2′），5.27 （1H，m，H-1′），6.22 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-α），6.95（1H，dd，J＝8.2，1.9 Hz，H-6），6.78 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），7.04 （1H，d，J＝1.9 Hz，H-2），7.53 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-β）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD）δ： 38.1 （C-4′，6′），53.0 （C-7′OCH3），70.3 （C-3′），72.1 （C-1′），72.6 （C-2′），75.8 （C-5′），115.1 （C-2），115.1 （C-β），116.6（C-5），123.0 （C-6），127.7 （C-1），146.9 （C-3），147.2 （C-α），149.7 （C-4），168.3 （C-γ），175.4（C-7′）。以上数据与文献 ［23］ 报道基本一致，故鉴定为绿原酸甲酯。

化合物9： 淡黄色粉末，分子式C21H20O10，HR-ESI-MSm/z： 431.095 4 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO）δ： 5.06 （1H，d，J＝7.4 Hz，H-1″），6.44 （1H，s，H-3），6.84 （2H，d，J＝11.9 Hz，H-6，8），6.91 （2H，t，J＝5.8 Hz，H-2′，6′），7.93（2H，t，J＝9.3 Hz，H-3′，5′），12.99 （1H，s，H-5OH）；13C-NMR （125 MHz，DMSO）δ： 60.6 （C-6″），69.6 （C-4″），73.1 （C-2″），76.4 （C-3″），77.2 （C-5″），94.8 （C-8），99.5 （C-6），99.9 （C-1″），102.9 （C-3），105.3 （C-10），116.1 （C-3′，6′），128.6 （C-2′，5′），156.8 （C-4′），161.1 （C-2，9），162.9 （C-5），164.3 （C-7），181.9 （C-4）。以上数据与文献［24］ 报道基本一致，故鉴定为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物10： 淡黄色粉末，分子式C21H20O11，HR-ESI-MSm/z： 447.090 6 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 5.41 （1H，d，J＝4.7 Hz，H-1″），6.46 （1H，t，J＝3.9 Hz，H-6），6.76 （1H，s，H-3），6.80 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.92 （1H，t，J＝7.4 Hz，H-5′），7.43 （1H，d，J＝2.2 Hz，H-2′），7.46 （1H，dd，J＝8.3，2.3 Hz，H-6′），9.41（1H，s，H-4′OH），10.00 （1H，s，H-3′OH），12.99 （1H，s，H-5OH）；13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6）δ： 60.6 （C-6″），69.6 （C-4″），73.1 （C-2″），76.4 （C-3″），77.2 （C-5″），94.7 （C-8），99.5（C-6），99.9 （C-1″），103.2 （C-3），105.3 （C-10），113.6 （C-2′），115.9 （C-5′），119.2 （C-6′），121.4（C-1′），145.8 （C-3′），149.9 （C-4′），156.9 （C-9），161.1 （C-5），162.9 （C-7），164.5 （C-2），181.9 （C-4）。以上数据与文献［21-24］ 报道基本一致，故鉴定为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物11： 淡黄色粉末，分子式C27H30O14，HR-ESI-MSm/z： 577.150 1 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 5.24 （1H，d，J＝7.2 Hz，H-1‴），5.35 （1H，d，J＝ 6.0 Hz，H-1″），6.80（1H，s，H-6），6.38 （1H，s，H-3），6.87 （1H，s，H-8），6.94 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′，5′），7.94（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2′，6′），12.99 （1H，s，H-5OH）；13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6）δ： 18.0 （C-6‴），60.5 （C-6″），68.3 （C-5‴），69.7 （C-4″），70.4 （C-2‴），70.5 （C-3‴），71.9 （C-4‴），76.3（C-3″），77.0 （C-2″），77.2 （C-5″），94.5 （C-8），97.8 （C-1″），99.3 （C-6），100.4 （C-1‴），103.0（C-3），105.4 （C-10），116.1 （C-3′，5′），120.6（C-1′），128.6 （C-2′，6′），157.0 （C-9），161.1（C-5），161.8 （C-4′），162.5 （C-7），164.3 （C-2），181.9 （C-4）。以上数据与文献［25］ 报道基本一致，故鉴定为野漆树苷。

化合物12： 淡黄色粉末，分子式为C26H28O15，HR-ESI-MSm/z： 579.129 1 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 3.96 （1H，d，J＝9.8 Hz，H-6″），4.19 （1H，d，J＝6.2 Hz，H-1″），5.10 （1H，d，J＝7.4 Hz，H-1″），6.92 （1H，d，J＝8.4 Hz，H-5′），7.45 （1H，d，J＝2.1 Hz，H- 2′），6.46 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.75 （1H，s，H-3），6.80（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），7.49 （1H，dd，J＝8.4，2.1 Hz，H-6′），13.02 （1H，s，H-OH）；13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ： 64.5 （C-5‴），67.1 （C-4‴），67.6 （C-6″），69.4 （C-4″），70.5 （C-3‴），72.4 （C-2‴），73.1 （C-2″），75.6 （C-3″），76.1 （C-5″），94.7 （C-8），99.6 （C-6），99.9 （C-1″），103.1（C-1‴），103.1 （C-3），105.4 （C-10），113.5 （C-2′），116.0 （C-5′），119.3 （C-6′），121.2 （C-1′），145.8 （C-3′），150.0 （C-4′），157.0 （C-8），161.1（C-5），162.8 （C-7），164.5 （C-2），181.8 （C-4）。以上数据与文献［21］ 报道基本一致，故鉴定为木犀草素-7-O-α-L-吡喃阿拉伯糖（1→6） -β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物13： 黄色粉末，分子式C27H30O15，HR-ESI-MSm/z： 593.151 2 ［M-H］－。1H-NMR （500 MHz，DMSO-d6）δ： 1.21 （3H，d，J＝6.2 Hz，H-6‴），5.14 （1H，d，J＝1.0 Hz，H-1‴），5.26 （1H，d，J＝7.3 Hz，H-1″），6.38 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-6），6.75 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-8），6.76 （1H，s，H-3），6.91 （1H，d，J＝8.3 Hz，H-3′），7.41 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），7.44 （1H，dd，J＝8.4，2.2 Hz，H-6′），13.02 （1H，s，H-OH）；13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6）δ： 18.1 （C-6‴），60.5 （C-6″），68.3 （C-5‴），69.7 （C-4″），70.4 （C-2‴），70.5（C-3‴），71.9 （C-4‴），76.3 （C-5″），77.0 （C-3″），77.2 （C-2″），94.4 （C-8），97.8 （C-6），99.3 （C-1″），100.5 （C-1‴），103.2 （C-3），105.4 （C-10），113.4 （C-2′），116.0 （C-5′），119.2 （C-6′），121.2（C-1′），145.8 （C-3′），150.2 （C-4′），157.0 （C-9），161.2 （C-5），162.5 （C-7），164.5 （C-2），181.8 （C-4）。以上数据与文献［21］ 报道基本一致，故鉴定为忍冬苷。

4 抗炎活性筛选

参照文献［26-29］ 报道，利用脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7 巨噬细胞炎症模型对各化合物抑制NO 生成作用进行测定，评价其抗炎活性。结果发现阳性药吲哚美辛及化合物2～8，11～13 在浓度为80 μmol/L 时，细胞存活率均大于90%，较空白对照组无明显差异，表明吲哚美辛和化合物2～8，11～13 在该浓度值下无明显细胞毒性。与LPS 组相比，各化合物在20、40、80 μmol/L 浓度下，均表现出不同程度的NO 抑制活性（图1），且呈现剂量依赖性。各化合物的抑制率在（25.15±3.83）% ～（62.89±0.55）%范围内，而吲哚美辛的抑制率分别为（41.79±1.59）%、（51.19±1.94）%。

图1 化合物2～8，11～13 对NO 水平的影响Fig.1 Effects of compounds 2－8，11－13 on the level of NO

5 讨论与结论

本实验从山银花茎叶80% 甲醇提取物中共分离鉴定出13 个化合物，包括6 个环烯醚萜苷类（化合物2～7）、5 个黄酮类（化合物9～13），2 个其他类（化合物1、8）。獐牙菜苷（2）、表断马钱子苷半缩醛内酯（3） 和马钱子苷半缩醛内酯（4） 等化合物在C-7 和C-11 之间以环氧的形式连接； 而裂环马钱苷（5） 和断氧化马钱苷（6） 在C-7 位以羧酸的形式存在。裂马钱素二甲基乙缩醛（7） 化合物的C-7 位被2 个甲氧基取代［30］。其中，化合物1 首次从忍冬属植物中分离得到； 化合物3、5、7、9、11～12 首次从山银花茎叶中发现。

炎症是机体对抗各种损伤性刺激所产生的一种防御反应，作为临床常见的病理过程，与关节炎、精神病、心脑血管病、肿瘤等诸多疾病的发生密切相关［31］。金银花主要抗炎指标成分除绿原酸和木犀草苷外，还有环烯醚萜类［30］。体外抗炎活性实验表明，化合物2 ～8，11 ～13 具有一定的抗炎活性，结合化合物结构类型，发现山银花中主要抗炎成分为裂环环烯醚萜苷类、黄酮类和绿原酸类化合物，此结果与文献报道一致。现代药理研究发现，已分离鉴定的环烯醚萜类化合物具有广泛的抗炎活性，并可通过多个靶点起到良好的抗炎效果。文献报道马钱苷可通过NF-κB 依赖性炎症途径使NFκB 失活，进而减弱神经炎症反应［32］； 獐牙菜苦苷具有抗肝损伤和抗炎作用，对caspase-3 具有抑制作用，部分是通过Nrf2/HO-1 途径实现的，还可通过调节NF-κB/IκB 信号通路传导抑制关节炎［33］。此类化合物的深入研究将对传统中医药在抗炎方面研发具有长远的意义。

综上所述，本实验结果丰富了山银花茎叶的化学物质基础，可为该药材化学成分研究、生物活性筛选以及综合开发利用提供理论依据。