兴安杜鹃3种主要成分的HPLC测定及其对大鼠气管平滑肌的舒张作用

张颖慧 王晨蔚 周苑婷 陈思淼 张怡然 孙宇婷 张琳

摘要 ［目的］建立同時测定兴安杜鹃中金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素含量的高效液相色谱法（HPLC），并探讨兴安杜鹃提取物及3种主要成分对大鼠气管平滑肌舒张作用的影响及其作用机制。［方法］采用HPLC法测定兴安杜鹃中金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素的含量并进行方法学考察。采用离体气管灌流法取大鼠气管环，将气管环固定于麦氏浴皿中，使用扑尔敏、吲哚美辛、格列苯脲、左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）、硝苯地平和普萘洛尔进行预孵育，待气管环张力稳定后，加入60 mmol/L KCl溶液收缩气管环，进行兴安杜鹃对气管环的舒张试验，观察大鼠气管平滑肌张力变化。［结果］兴安杜鹃中3种主要成分HPLC测定方法考察结果显示，3种成分均在2～80 μg/mL线性关系良好，平均回收率分别为金丝桃苷100.3%（RSD=2.63%）、槲皮素102.7%（RSD=2.89%）、杜鹃素102.1%（RSD=2.36%）。在吲哚美辛、格列本脲和普萘洛尔孵育组织中，兴安杜鹃提取物及3种单体成分的舒张作用与未孵育组相比没有显著差异；在扑尔敏、L-NAME和硝苯地平孵育的组织中，兴安杜鹃及金丝桃苷与未孵育的组织相比有显著差异，舒张作用有所降低。这种现象可能是通过抑制组胺H1受体、一氧化氮合酶途径和钙离子通道介导的钙离子内流实现的。［结论］该试验建立的方法简单、准确，能快速测定兴安杜鹃中金丝桃苷、槲皮素和杜鹃素的含量，为其质量评价和控制提供了有效的分析手段；并且这3种成分与兴安杜鹃舒张气管的作用有关，可作为支气管扩张剂开发的理论依据。

关键词 兴安杜鹃；HPLC；金丝桃苷；槲皮素；杜鹃素；含量测定；气管平滑肌；舒张作用

中图分类号 R285  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2024）03-0163-08

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.03.040

HPLC Determination of Three Main Components of Rhododendron dauricum L. and Their Relaxing Effects on Rat Tracheal Smooth Muscle

Abstract ［Objective］To establish a method for the simultaneous determination of hyperin， quercetin and farrerol in Rhododendron dauricum by HPLC， and to discuss the effects of Rhododendron dauricum extract and its three main components on the relaxation of rat tracheal smooth muscle and the mechanism. ［Method］ The contents of hypericin， quercetin and farrerol in Rhododendron dauricum were determined by HPLC and the methodology was investigated. Rat tracheal rings were obtained by in vivo air tube perfusion method， and fixed in a Mack’s bath. The tracheal rings were pre-incubated with chlorphenamine， indometacin， glibenclamide， L-nitroarginine methyl ester （L-NAME）， nifedipine and propranolol. After the tension of the tracheal ring stabilized， 60 mmol/L KCl solution was added to shrink the tracheal ring. The relaxation experiment of tracheal ring by Rhododendron dauricum was conducted to observe the changes of tracheal smooth muscle tension in rats.［Result］The investigation results of the HPLC determination method for three main components in Rhododendron dauricum showed that the linear relationship between the three components was good in the range of 2-80 μg/mL. The average recovery rates were 100.3% （RSD=2.63%） of hypericin， 102.7% （RSD=2.89%） of quercetin and 102.1% （RSD=2.36%） of farrerol. The diastolic effects of the extract and the three main components of Rhododendron dauricum in the incubated tissue of indometacin， glibenclamide and propranolol were not significantly different from those in the unincubated group. The diastolic effects of Rhododendron dauricum and hypericin in the tissues incubated with chlorphenamine， L-NAME and nifedipine were significantly different from those in the unincubated tissues. This phenomenon may be achieved through inhibition of histamine H1 receptors， nitric oxide synthase pathways， and calcium channel mediated calcium influx.［Conclusion］ The established method is simple， accurate， and can quickly determine the content of hypericin， quercetin and farrerol in Rhododendron dauricum， providing an effective analytical means for quality evaluation and control. In addition， these three components are related to the effect of diastolic trachea of Rhododendron dauricum L.， and can be used as a theoretical basis for the development of bronchodilators.

Key words Rhododendron dauricum;HPLC;Hypericin;Quercetin;Farrerol;Content determination;Tracheal smooth muscle;Relaxation

兴安杜鹃（Rhododendron dauricum L.）属杜鹃花科杜鹃花属，为国家二级重点保护植物，其主要有效成分包括黄酮类、挥发油类和有机酸类等［1-3］。研究发现，兴安杜鹃具有镇咳、祛痰的临床作用，常应用于急性、慢性支气管炎、支气管哮喘等病症的治疗［4］。我国研究人员发现兴安杜鹃提取物、金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素可以浓度依赖性舒张鼠胸主动脉［5-8］。支气管哮喘（bronchial asthma）简称哮喘，常以气道炎症反应为主要特征，气管平滑肌（tracheal smooth muscle，TSM）的收缩特性在哮喘发作中起重要作用［9］。兴安杜鹃在哮喘的临床治疗中应用较多［10-11］，但其作用机理仍不明确。为此，该研究建立兴安杜鹃3种主要成分含量测量方法，采用离体气管环灌流试验，考察兴安杜鹃提取物及3种主要成分对大鼠离体TSM张力的影响，并初步探讨兴安杜鹃舒张气管平滑肌的作用机制。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 仪器。

LC-20AT型高效液相色谱仪（Shimadzu公司）；H1650R型高速离心机（湘仪公司）；AB120型电子分析天平、DXY-6恒温加热水浴锅（SanLiang公司）；生物机能实验系统、ZH-HX-Z生物信号采集与分析系统、192203张力换能器（淮北正华生物仪器设备有限公司）；BT100蠕动泵（北京东南仪城）；麦氏浴皿（振华生物医药有限公司）；UP-400S超声波细胞破碎仪（上海熙扬仪器有限公司）。

1.1.2 药品与试剂。

兴安杜鹃叶购自北京同仁堂哈尔滨药房；扑尔敏、吲哚美辛（Indo）、格列苯脲（Gli）、左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）、硝苯地平、普萘洛尔、茶碱，均购自上海Macklinl公司；金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素，均购自成都Desite公司，纯度≥98%；甲醇，购自J&K Scientific；磷酸、甲基亚砜（DMSO）、氯化钾（KCl）、磷酸二氢钠（NaH2PO4）、氯化钠（NaCl）、碳酸氢钠（NaHCO3）、氯化钙（CaCl2）、氯化镁（MgCl2）、葡萄糖（Glucose），均购自天津市致远化学试剂有限公司。

1.1.3 实验动物。

清洁级SD雄性大鼠［12］ 60只，体重220～250 g，购自哈尔滨市双城区新兴镇见林养殖场，实验动物生产许可证号SCXK（黑）2019-001，饲养时光照周期为0.5 d明、0.5 d暗，期间自由饮水、进食。

1.2 试验方法

1.2.1 兴安杜鹃提取物的制备及其3种主要成分的含量测定。

1.2.1.1 兴安杜鹃样品溶液的制备。

取兴安杜鹃粉末（过60目筛）5 g，精密加入100%乙醇100 mL，采用超声细胞破碎提取法提取，重复2次，合并滤液。12 000 r/min离心10 min，取上清液进行HPLC检测。

1.2.1.2 标准品溶液的配制。

分别精确称取5 mg金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素标准品，置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，配制成质量浓度为1 mg/mL的对照品储备液，于4 ℃保存。

1.2.1.3 HPLC条件。

采用HPLC分析兴安杜鹃中的3种主要成分。液相色谱柱为Diamonsil反相C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相为甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～5 min，40%A；5～15 min，40%～50%A；15～20 min，50%～60%A；20～30 min，60%～65%A；30～40 min，65%A），在297和360 nm处同时检测，柱温30 ℃，进样量10 μL，流速为1.0 mL/min。

1.2.2 方法学考察。

1.2.2.1 线性关系考察。

将“1.2.1.2”中3种标准品溶液等比例混合，并用甲醇稀释为2、10、20、40、60、80 μg/mL，分别按“1.2.1.3”中HPLC条件测定（平行3次），以样品浓度和峰面积绘制标准曲线。

1.2.2.2 精密度试验。

将“1.2.1.2”中3种标准品溶液等比例混合，按照“1.2.1.3”中HPLC条件测定，单日内平行进样6组，得出3种主要成分峰面积的相对标准偏差（RSD）。

1.2.2.3 稳定性试验。

取室温放置的兴安杜鹃样品溶液，于48 h内不同时间进样，按照“1.2.1.3”中HPLC条件测定，得出3种主要成分峰面积的RSD。

1.2.2.4 重复性试验。

取6份“1.2.1.1”制备的兴安杜鹃样品溶液，按照“1.2.1.3”HPLC条件测定，得出3种主要成分峰面积的RSD。

1.2.2.5 加样回收率试验。

取3组已知兴安杜鹃含量的样品溶液，分别混入高、中、低浓度标准品溶液，按照“1.2.1.1”方法制备样品溶液，按照“1.2.1.3”中HPLC条件测定，得出3种主要成分的回收率及RSD。

1.2.2.6 样品含量测定。

将“1.2.1.1”制备的兴安杜鹃样品按照“1.2.1.3”中HPLC条件对3种主要有效成分进行测定，记录峰面积，计算兴安杜鹃样品中3种主要成分的含量。

52卷3期          张颖慧等 兴安杜鹃3种主要成分的HPLC测定及其对大鼠气管平滑肌的舒张作用

1.2.3 兴安杜鹃样品及其3种主要成分受试样品的制备。

采用超声细胞破碎提取法提取，提取液经减压浓缩及真空干燥制备成浸膏（1 g浸膏相当于2 g生药）。临用前，用克雷伯-亨斯雷特溶液（Kerbs-H）配制成浓度为10 mg/mL的受试样品，并在进行气管舒张试验时，麦氏浴皿中的终浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg/mL。

分别将金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素配制成0.46、0.30、0.30 mg/mL的受试药物母液，临用前，用Kerbs-H溶液稀释，使其在麦氏浴皿中的终浓度分别为0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.16 mg/mL。

1.2.4 气管舒张试验装置及条件。

将试验装置依次连接，如图1，麦氏浴皿中加入恒温Krebs-H溶液，打开氧气阀门持续通入氧气（气泡大小以不影响张力换能器为宜）。然后打开生物信号采集分析系统，设置张力为30 g，采样通道1，放大倍数100 mV，上限30 Hz，下限直流。预热仪器30 min。

1.2.5 大鼠气管环的制备［13］。

利用颈椎脱臼法处死大鼠，取出完整气管，将气管迅速放入充氧、预冷的Kerbs-H溶液（NaH2PO4 1.18 mmol/L、MgCl2 1.20 mmol/L、NaHCO3 24.80 mmol/L、CaCl2 2.52 mmol/L、KCl 4.70 mmol/L、NaCl 118.30 mmol/L、Glucose 11.10 mmol/L）中，裁制成长度3～4 mm的气管环，剪掉包覆其上的结缔组织和脂肪，备用。

1.2.6 大鼠气管环张力的测定。

通过2个铁钩将气管环固定在装有10 mL Kerbs-H溶液的麦氏浴皿中。Kerbs-H溶液温度控制在（37.0±0.5）℃，5%CO2～95%O2稳定充气。调节静息张力为1 g，平衡90 min，每15 min更换一次新鲜的Kerbs-H溶液。平衡结束后，用60 mmol/L KCl溶液刺激气管环，重复3次，使其发生最大幅度收缩，待气管环稳定30 min后，开始气管舒张试验。

1.2.7 兴安杜鹃对TSM的舒张作用。

1.2.7.1

兴安杜鹃提取物及其3种主要成分对KCl预收缩的气管环张力的影响。为了研究兴安杜鹃提取物及其3种主要成分对气管环平滑肌的舒张作用，首先用收缩剂60 mmol/L的KCl使气管环预收缩7 min，然后依次加入兴安杜鹃提取液、金丝桃苷、杜鹃素、槲皮素、茶碱和DMSO，其中茶碱和DMSO分别为阳性对照和阴性对照，试验浓度设计如表1所示，记录气管最大舒张值，并按以下公式计算舒张率：

1.2.7.2

扑尔敏对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。首先向浴皿中加入10-5 mol/L扑尔敏组胺H1受体拮抗剂，孵育30 min，当气管环张力维持常态时，加入60 mmol/L的KCl用于预收缩气管环，当气管环张力达到峰值时，再分别加入兴安杜鹃提取液、金丝桃苷、杜鹃素、槲皮素，设置对照组为未孵育的气管环，整体试验浓度设计如表2所示，并记录气管最大舒张值。

1.2.7.3 Indo对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

首先向浴皿中加入10-5 mol/L Indo环氧合酶抑制剂，孵育时间与加样方式同“1.2.7.2”，并记录气管最大舒张值。

1.2.7.4 Gli对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

首先向浴皿中加入10-5 mol/L Gli KATP 通道阻断剂，孵育时间与加样方式同“1.2.7.2”，并記录气管最大舒张值。

1.2.7.5 L-NAME对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

首先向浴皿中加入10-4 mol/L L-NAME一氧化氮合酶抑制剂，孵育时间与加样方式同“1.2.7.2”，并记录气管最大舒张值。

1.2.7.6 硝苯地平对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

首先向浴皿中加入10-5 mol/L硝苯地平钙通道阻滞剂，孵育时间与加样方式同“1.2.7.2”，并记录气管最大舒张值。

1.2.7.7 普萘洛尔对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

首先向浴皿中加入10-5 mol/L普萘洛尔β2肾上腺素受体阻滞剂，孵育时间与加样方式同“1.2.7.2”，并记录气管最大舒张值。

1.3 统计学处理

各项试验结果数据均以“±S”表示，采用Excel 2019软件进行统计分析，两样本进行t检验。

2 结果与分析

2.1 HPLC色谱分析

“1.2.1.3”HPLC条件下得到金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素的混合标准品与提取样品分析图谱如图2所示，金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素保留时间分别为18.05、26.48、36.06 min，标准品溶液与样品溶液目标峰的保留时间相吻合，灵敏度高，峰形符合标准。

2.2 方法学考察

2.2.1 线性关系考察。

根据“1.2.2.1”中线性关系考察方法，计算得出3种主要成分的回归方程及决定系数，见表3。

2.2.2 精密度试验。

根据“1.2.2.2”中精密度试验考察方法，求得各标准品峰面积的RSD。结果显示，金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素峰面积的RSD分别为1.23%、1.57%、0.96%，表明仪器精密度良好。

2.2.3 稳定性试验。

根据“1.2.2.3”中稳定性试验考察方法，求得样品中3种主要成分峰面积的RSD。结果显示，金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素峰面积的RSD分别为1.15%、1.33%、1.27%，表明供试品溶液中金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素在48 h内表现稳定。

2.2.4 重复性试验。

根据“1.2.2.4”中重复性试验考察方法，求得3种主要成分峰面积的RSD。结果显示，金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素峰面积的RSD分别为1.95%、1.13%、1.61%，表明该方法重复性良好。

2.2.5 加样回收率试验。

根据“1.2.2.5”中回收率试验考察方法，求得各兴安杜鹃样品中3种主要成分的平均回收率和RSD，结果见表4。

2.2.6 含量测定。

根据“1.2.1.3”中HPLC条件对3种主要成分含量进行测定，测得金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素含量分别为1.58、1.81、1.77 mg/g（图3）。

2.3 兴安杜鹃对TSM的舒张作用

2.3.1 兴安杜鹃提取物及其3种主要成分对KCl预收缩的气管环张力的影响。

大鼠气管环用收缩剂60 mmol/L的KCl预收缩7 min后，不同浓度的样品溶液、阳性对照液和空白对照液分别对预收缩的气管环进行舒张，舒张结果见表5。由表5可知，对于以KCl预收缩后的气管环，兴安杜鹃提取物包括其3种主要成分均有不同程度的舒张作用，并呈浓度依赖性关系，处理⑥、处理⑦和处理⑧各受试样品舒张率不低于93.4%，舒张作用与茶碱相当。

2.3.2 扑尔敏对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

大鼠气管环经扑尔敏预孵育和KCl预收缩后，不同浓度的样品溶液和空白对照液分别对预收缩的气管环进行舒张，舒张结果见表6。由表6可知，在预孵育的组织中，兴安杜鹃提取物包括其3种主要成分均有不同程度的舒张作用，并呈浓度依赖性关系，当样品溶液终浓度在0.10 mg/mL以上（处理⑥～⑧）时，槲皮素组和杜鹃素组与未孵育组无显著差异（P>0.05）；提取物组和金丝桃苷组与未孵育组均有显著差异（P<0.001）且舒张作用明显减弱，这说明兴安杜鹃舒张TSM可能受组胺H1受体影响，且发挥作用的活性成分可能是金丝桃苷。

2.3.3 Indo对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

大鼠气管环经Indo预孵育和KCl预收缩后，不同浓度的样品溶液和空白对照液分别对预收缩的气管环进行舒张，舒张结果见表7。由表7可知，在预孵育的组织中，兴安杜鹃提取物包括其3种主要成分均有不同程度的舒张作用，并呈浓度依赖性关系，与未孵育组相比，处理⑦和处理⑧各样品对TSM的舒张作用无显著差异（P>0.05）。这说明兴安杜鹃舒张TSM可能不受环氧合酶（COX）抑制剂影响。

2.3.4 Gli对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

大鼠气管环经Gli预孵育和KCl预收缩后，不同浓度的样品溶液和空白对照液分别对预收缩的气管环进行舒张，舒张结果见表8。由表8可知，在预孵育的组织中，兴安杜鹃提取物包括其3种主要成分均有不同程度的舒张作用，并呈浓度依赖性关系，与未孵育组相比，处理处理⑦和处理⑧各样品（除杜鹃素组处理⑦外）对TSM的舒张作用无显著差异（P>0.05）。这说明兴安杜鹃舒张TSM可能不受钾离子通道影響。

2.3.5 L-NAME对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

大鼠气管环经L-NAME预孵育和KCl预收缩后，不同浓度的样品溶液和空白对照液分别对预收缩的气管环进行舒张，舒张结果见表9。由表9可知，在预孵育的组织中，兴安杜鹃提取物包括其3种主要成分均有不同程度的舒张作用，并呈浓度依赖性关系。与未孵育组相比，各浓度提取物及金丝桃苷对TSM的舒张作用有显著差异（P<0.05）；当样品溶液终浓度在0.08 mg/mL以上时（处理⑤～⑧），槲皮素组（除处理⑥外）和杜鹃素组无显著差异（P>0.05）。这说明兴安杜鹃舒张TSM可能与一氧化氮合酶途径有关，且发挥作用的活性成分可能是金丝桃苷。

2.3.6 硝苯地平对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

大鼠气管环经硝苯地平预孵育和KCl预收缩后，不同浓度的样品溶液和空白对照液分别对预收缩的气管环进行舒张，舒张结果见表10。由表10可知，在预孵育的组织中，兴安杜鹃提取物包括其3种主要成分均有不同程度的舒张作用，并呈浓度依赖性关系。各浓度提取物及金丝桃苷对TSM的舒张作用显著低于未孵育组（P<0.001）；在样品溶液终浓度0.12 mg/mL以上（处理⑦、⑧）时，槲皮素组和杜鹃素组与未孵育组无显著差异（P>0.05）。这说明兴安杜鹃对TSM的舒张可能与钙离子内流有关，且发挥作用的活性成分可能是金丝桃苷。

2.3.7 普萘洛尔对兴安杜鹃舒张气管平滑肌的影响。

大鼠气管环经普萘洛尔预孵育和KCl预收缩后，不同浓度的样品溶液和空白对照液分别对预收缩的气管环进行舒张，舒张结果见表11。由表11可知，在预孵育的组织中，兴安杜鹃提取物包括其3种主要成分均有不同程度的舒张作用，并呈浓度依赖性关系。与未孵育组相比，在处理⑥中提取物及金丝桃苷的舒张作用显著高于未孵育组，处理⑦、处理⑧中提取物及3种主要成分与未孵育组没有显著差异（P>0.05），这说明兴安杜鹃舒张TSM可能不受β2受体影响。

3 结论与讨论

该研究设立了同时测定兴安杜鹃中金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素3种主要成分的双波长-梯度洗脱高效液相色谱方法。所设立的含量测定方法灵敏度高、专属性好，准确度和精密度均符合规范，测得金丝桃苷、槲皮素、杜鹃素含量分别为1.58、1.81、1.77 mg/g。

TSM与其细胞上的多种受体和离子通道以及复杂的受体机制有关［13］。有研究报道，组胺H1受体拮抗剂对组胺引起的血管扩张、平滑肌收缩、血压下降等表现出强烈的抑制作用［14］。兴安杜鹃各样品在扑尔敏孵育的大鼠气管环上有明显的浓度依赖性舒张作用，各浓度的兴安杜鹃提取物及金丝桃苷的舒张作用明显低于未孵育的组织，这表明兴安杜鹃可能对组胺H1受体产生抑制作用，推测兴安杜鹃发挥气管舒张作用的活性成分可能是金丝桃苷。环氧合酶（COX）抑制剂可以抑制气管内皮细胞释放前列环素（PGI2）引起平滑肌收缩［15］。兴安杜鹃各样品在Indo孵育的大鼠气管环上有明显的浓度依赖性舒张作用，当样品溶液终浓度在第6个浓度以上（处理⑦、⑧）时，各样品溶液的舒张作用与未孵育组无显著差异，表明兴安杜鹃可能不会通过COX通道诱导TSM舒张。钾离子通道阻断剂通过抑制细胞的ATP敏感钾通道使细胞膜去极化，触发肌细胞的收缩［16］。兴安杜鹃各样品在Gli孵育的大鼠气管环上有明显的浓度依赖性舒张作用，当样品溶液终浓度在第6个浓度以上（处理⑦、⑧）时，各样品溶液（除杜鹃素组处理⑦外）的舒张作用与未孵育组无显著差异，表明兴安杜鹃可能不会通过钾离子通道诱导TSM舒张。

一氧化氮合酶可通过cGMP升高，促使平滑肌舒张［17］。兴安杜鹃各样品在L-NAME孵育的大鼠气管环上有明显的浓度依赖性舒张作用，各浓度的兴安杜鹃提取物及金丝桃苷的舒张作用明显低于未孵育组，表明兴安杜鹃可能对NO的形成有增强作用，推测兴安杜鹃发挥气管舒张作用的活性成分可能是金丝桃苷。钙离子通道阻滞剂可通过降低钙离子（Ca2+）内流，使细胞内的Ca2+减少，从而引起平滑肌收缩［18-19］。兴安杜鹃各样品在硝苯地平孵育的大鼠气管环上有明显的浓度依赖性舒张作用，各浓度的兴安杜鹃提取物及金丝桃苷的舒张作用均显著低于未孵育组，表明兴安杜鹃对钙离子通道可能存在抑制作用，推测兴安杜鹃发挥气管舒张作用的活性成分可能是金丝桃苷。β2受体拮抗剂可引起血浆肾素活性降低、血管收缩、支气管痉挛［20］。兴安杜鹃各样品在普萘洛尔孵育的大鼠气管环上有明显的浓度依赖性舒张作用，当样品溶液终浓度在第6个浓度以上（处理⑦、⑧）时，各样品溶液的舒张作用与未孵育组无显著差异，表明兴安杜鹃可能不会通过β2受体诱导TSM舒张。

该研究结果表明，兴安杜鹃对由KCl收缩的未孵育的TSM具有明显的浓度依赖性的舒张作用。其中，在扑尔敏、L-NAME、硝苯地平预孵育组中，金丝桃苷对TSM的舒张作用显著低于未孵育组，推测兴安杜鹃发挥气管舒张作用的活性成分可能是金丝桃苷。并且这种强烈的舒张作用可能是通过抑制组胺H1受体、一氧化氮合酶途径和钙离子通道介导的钙离子内流来实现的。该研究可能存在以下局限性，兴安杜鹃对TSM舒张作用可能在磷酸二酯酶、毒蕈碱受体、糖皮质激素受体激活和可溶性鸟苷酸环化酶的刺激等方面起作用［21］，以上途径将是下一步的研究内容。

参考文献

［1］ 赵宝琴，高陆.满山红化学成分和药理学研究进展［J］.人参研究，2015，27（1）：42-44.

［2］ 胡栋宝，赵剑雄.中药满山红中4个黄酮类化合物结构及其抗氧化活性的理论研究［J］.中国中药杂志，2016，41（14）：2675-2679.

［3］ 李松，郑旭.止咳祛痰的满山红［J］.首都食品与医药，2017，24（19）：49.

［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京：中国医药科技出版社，2020：377.

［5］ 王晓燕，侯云龙.满山红水提物对大鼠离体胸主动脉的舒张作用与机制［J］.东北林业大学学报，2009，37（8）：64-66.

［6］ FAN Y F，CHEN Z W，GUO Y，et al.Cellular mechanisms underlying Hyperin-induced relaxation of rat basilar artery［J］.Fitoterapia，2011，82（4）：626-631.

［7］ 赵艳，陈柏年，王少华，等.槲皮素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用［J］.中国新药与临床杂志，2011，30（11）：857-861.

［8］ 秦小江，侯晓敏，李青山.杜鹃素对大鼠离体主动脉的舒张作用及机制［J］.中西医结合心脑血管病杂志，2012，10（4）：457-458.

［9］ AOI W，IWASA M，MARUNAKA Y.Metabolic functions of flavonoids：From human epidemiology to molecular mechanism［J］.Neuropeptides，2021，88：1-8.

［10］ 苏德龙，李桂红，广鸿雁.满山红软胶囊祛痰止咳作用研究［J］.生物技术世界，2012，10（8）：89-90.

［11］ 馬玉国，刘显清，王成库，等.芩暴红止咳颗粒剂主要药效学试研究［J］.中医药信息，1997，14（3）：41.

［12］ 王海静，赵卉，刘宇，等.牛磺酸对大鼠离体气管平滑肌舒张作用及机制的研究［J］.中国现代医生，2012，50（10）：11-13.

［13］ NAGHDI F，GHOLAMNEZHAD Z，BOSKABADY H，et al.Muscarinic receptors，nitric oxide formation and cyclooxygenase pathway involved in tracheal smooth muscle relaxant effect of hydro-ethanolic extract of Lavandula angustifolia flowers［J］.Biomedicine & pharmacotherapy，2018，102：1221-1228.

［14］ 吴云姣，杨花荣.抗组胺药在变应性鼻炎中的作用机制及应用进展［J］.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志，2021，27（6）：742-745.

［15］ JU Z R，LI M L，XU J D，et al.Recent development on COX-2 inhibitors as promising anti-inflammatory agents：The past 10 years［J］.Acta pharmaceutica sinica B，2022，12（6）：2790-2807.

［16］ DEMIREL S.Rosa damascena Miller essential oil relaxes rat trachea via Kv channels，KATP channels，and BKCa channels［J］.Prostaglandins & other lipid mediators，2022，163：1-6.

［17］ ZHANG T，LUO X J，SAI W B，et al.Non-selective cation channels mediate chloroquine-induced relaxation in precontracted mouse airway smooth muscle［J］.PLoS One，2014，9（7）：1-6.

［18］ WANG P，ZHAO W，SUN J，et al.Inflammatory mediators mediate airway smooth muscle contraction through a G protein-coupled receptor-transmembrane protein 16A-voltage-dependent Ca2+ channel axis and contribute to bronchial hyperresponsiveness in asthma［J］.Journal of allergy and clinical immunology，2018，141（4）：1259-1268.

［19］ 杨儒壮，张瑜，齐羲明.钙通道阻滞剂对牙龈组织细胞凋亡的影响及相关研究进展［J］.中国美容医学，2020，29（12）：190-193.

［20］ 陈军伟，徐仁斌，徐东燕.β2受体兴奋剂雾化吸入治疗支气管哮喘合并肺炎支原体感染患儿的效果［J］.中国妇幼保健，2021，36（9）：2063-2065.

［21］ NAGHDI F，SAADAT S，GHOLAMNEZHAD Z，et al.Muscarinic receptors blockade and nitric oxide production contribute in the relaxant effect of Berberis vulgaris extract on rat tracheal smooth muscle［J］.Revue Franaise d′ allergologie，2022，62（4）：391-400.