长链非编码RNA表达与肺腺癌血管内皮功能的关系及对病情进展的影响研究

张召迪，张良

（南阳医学高等专科学校附属中医院 肿瘤科，河南 南阳 473000 ）

肺腺癌为非小细胞肺癌（NSCLC）常见病理类型之一，相关研究数据显示，临床约有40%～50% 的NSCLC 患者可诊断为肺腺癌［1］。手术切除、化学治疗、免疫治疗及肿瘤靶向治疗均为目前治疗肺腺癌的重要手段，上述治疗方法一定程度上降低患者病死风险，但对于肿瘤TNM 分期较高的晚期患者来说，即便经上述方法系统治疗后，其五年内生存率仍普遍较低［2］。除病理组织活检这一金标准外，临床会通过检测多种血清肿瘤标志物表达水平以诊断肺腺癌并评估患者病情，但不同肿瘤标志物在各类肿瘤、非肿瘤疾病中均可存在表达异常情况［3］。长链非编码RNA（lncRNA）为一种广泛存在于哺乳动物细胞中、长度＞200 nt 的非编码序列，可通过多种生物学功能参与细胞增殖、分化、转移及凋亡［4］。肺腺癌转移相关转录本1（MALAT1）为研究发现的首个定位于染色体11q13.1 的lncRNA，研究发现［5］，MALAT1 表达水平在肺腺癌病理组织中显著高于癌旁组织。另有研究表示［6］，抑制MALAT1 表达能通过靶向调控微小RNA-200a（miR-200a）而抑制肺癌A549 细胞增殖或转移，可作为治疗肺腺癌的全新靶点。本研究旨在分析MALAT1 这一lncRNA 与肺腺癌血管内皮功能的关系及对病情进展的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本文为回顾性研究，病例纳入南阳医学高等专科学校附属中医院2020 年5 月至2022 年10 月收治的123 例肺腺癌患者，根据MALAT1 表达情况不同，将入组患者分为A 组（低表达相，60例）、B 组（高表达相，63 例），两组患者的一般资料比较见表1。本次研究已获得单位伦理委员会批准（A0155）

纳入标准：①入组患者均符合NSCLC 诊断要点［7］，经病理检查确认为肺腺癌；②经评估预计生存周期均≥1 年；③均知悉此次研究试验目的及内容，同意获取并公开既往临床资料。

排除标准：①存在血液系统、免疫系统疾病者；②存在其他非病理性肺通气功能异常者；③临床资料缺失者。

1.2 方法

采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测入组患者肿瘤组织中的MALAT1 表达情况，依据受试者工作特征曲线（ROC）分析结果，将60 例MALAT1 低表达相患者列为A 组，将63 例MALAT1 高表达相患者列为B 组，收集并对比两组患者的一般资料、临床资料，经统计学单因素分析、Logistic 多因素回归分析归纳导致MALAT1表达异常的主要影响因素，经Spearman 相关性系数验证MALAT1 表达与肺腺癌患者血管内皮功能及病情进展的关联。

qPCR 检测方法：取外周静脉需为检测样本，经抗凝处理将血液样本送入离心机，按转速3 000 r/min、半径0.5 cm 分离血清后，经Trizol法提取血清样本中总RNA，并取5 μL 总RNA 加入至浓度为2%的琼脂糖凝胶中电泳检测RNA 纯度及完整度；将RNA 逆转录为cDNA 后，检测血清各miRNA 表达情况，在95℃环境下预变性10 min 后，参考引物序列计算各miRNA 的相关表达量。

1.3 观察指标

①比较两组患者的一般资料、临床资料：一般资料包括性别、年龄、病程、肿瘤直径最大值、肿瘤数目（单发肿瘤、多发肿瘤）等；临床资料包括肿瘤分化程度（低分化、中分化、高分化），肿瘤浸润深度（T1～T4）、肿瘤区域淋巴结受累情况（N0～N2）、肿瘤远处转移情况（M0、M1），血管内皮功能等，其中肿瘤浸润深度、区域淋巴结受累情况及转移情况参考肿瘤TNM 分期标准［8］；血管内皮功能检测指标主要包括血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍化生长因子B（PDGF-B）。②影响肺腺癌患者MALAT1 表达的因素分析［9］：由于自变量、因变量间存在非线性关系，本研究将MALAT1 表达情况设为自变量，其余单因素设为因变量，将存在一定差异的单因素纳入Logistic多因素回归分析，当P＜0.05 时认为该因素为导致MALAT1 表达异常的主要影响因素。③MALAT1表达与血管内皮功能及病情进展的相关性［10］：经Spearman 相关性系数验证MALAT1 表达与血管内皮功能及病情进展情况的相关性，当P＜0.05 时认为二者显著相关，r＜0 表示负相关，r＞0 表示正相关。

1.4 统计学方法

数据均采用软件SPSS 22.0 处理。计量资料以均数±标准差（）表示，比较用t检验；计数资料以百分率（%）表示，比较用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MALAT1 表达异常的统计学单因素分析

统计学单因素分析结果显示，两组患者的年龄、肿瘤直径最大值、肿瘤数目等一般资料以及肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度、区域淋巴结受累情况、远处转移情况、血管内皮功能等临床资料均差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 MALAT1 表达异常的统计学单因素分析 ［n(%)］

2.2 MALAT1 表达异常的Logistic 多因素回归分析

结合单因素分析分析结果，分别对P＜0.05 的单因素进行赋值，具体赋值情况，见表3。

Logistic 多因素回归分析结果显示，肿瘤直径最大值＞5 cm、多发肿瘤、低分化、肿瘤浸润T3～T4、区域淋巴结受累N1～N2、病灶远处转移M1、VEGF≥142 pg/mL、PDGF-B≥200 pg/mL 为导致MALAT1 表达异常的主要影响因素，见表4。

表4 MALAT1 表达异常的Logistic 多因素回归分析

2.3 MALAT1 表达与血管内皮功能及病情进展的相关性分析

经Spearman 相关性系数检验，MALAT1 表达与肿瘤分化程度负相关，与肿瘤浸润深度、淋巴结受累情况、远处转移情况、VEGF 表达、PDGF-B正相关，见表5。

表5 MALAT1 表达与血管内皮功能及病情进展的相关性分析

3 讨论

肺癌为一种十分常见的恶性肿瘤，也是导致人类发生癌症相关死亡的首要原因，根据肿瘤病灶的形态及分化程度不同，临床主要将其分为小细胞肺癌（SCLC）和NSCLC 两种类型，前者肿瘤生长速度快、病灶恶性程度高，后者病情进展缓慢且具有更多手术机会［11-12］。肺腺癌为NSCLC 常见病理类型，早期、中期肺腺癌经手术、化疗、免疫治疗或肿瘤靶向治疗后大多可获得良好预后，但晚期患者经上述方法治疗后五年内病死风险仍较高［13］。近年有研究指出［14］，lncRNA 在多种实体肿瘤的发生及及病情进展中均有重要作用，可参与调节肿瘤细胞的多种生物学行为及血管生成。MALAT1 为最早发现于NSCLC 的lncRNA 家族成员之一，已有的研究证实［15］，MALAT1 在肺腺癌等NSCLC 癌症组织中的表达水平较癌旁组织明显更高。

MALAT1 在多种恶性肿瘤中均呈高水平表达，相关文献指出［16］，MALAT1 能通过海绵miR-200a-3p 而靶向作用于程序性死亡配体1 并促使肺腺癌细胞增殖或转移，与肺腺癌患者病情进展有密切联系。俞岑明等［17］研究结果显示，MALAT1 呈高表达相的为导致NSCLC 腺癌患者病情进展、病灶转移的危险因素。而本研究结果显示，肿瘤直径最大值＞5 cm、多发肿瘤、低分化、肿瘤浸润T3～T4、区域淋巴结受累N1～N2、病灶远处转移M1、VEGF≥142 pg/mL、PDGF-B≥200 pg/mL 均为导致MALAT1 表达异常的主要影响因素，除进一步明确MALAT1 表达与肺腺癌患者病情进展的管理外，本研究结果还提示MALAT1 高表达导致肺腺癌患者病情进展或许与血管内皮功能亢进、新生血管生成密切相关。研究指出［18］，肿瘤的发生、发展过程可涉及细胞增殖、侵袭或转移、上皮间质转化以及新生血管生成等多种生理过程，其中新生血管生成为肿瘤发生或进展的主要机制。研究指出［19］，MALAT1 为一种可与miRNA 发挥相互作用的竞争性内源性RNA，可通过海绵效应进行互补配对后而抑制miRNA 表达，并对肿瘤靶基因产生负向调控作用。SHYU 等［20］研究指出，MALAT1 可通过抑制miR92 并抵消miR-92a 而下调Kruppel 样转录因子表达，以抑制血管内皮细胞功能。VEGF 及其受体表达水平与肿瘤患者的病灶侵袭能力及预后均有密切关联。当VEGF 与其受体相结合后即可介导细胞表面受体多种信号转到并诱发多种级联反应，高水平VEGF 可促使细胞增殖并加快新生血管生成及肿瘤侵袭速度，其表达水平与PDGF-B 正相关［21］。另有学者通过缺氧复氧诱导血管内皮损伤的实验中指出［22］，MALAT1 还可通过与miR-320a 相互作用而对血管生成产生一定调节作用。上述研究均证实了MALAT1 表达与血管内皮功能间的关联。本研究经Spearman 相关性系数检验得知，MALAT1 表达与肿瘤分化程度负相关，与肿瘤浸润深度、淋巴结受累情况、远处转移情况、VEGF 表达、PDGF-B正相关。

综上所述，MALAT1 为一种可参与肺腺癌患者病情进展的lncRNA，其影响机制考虑与上调VEGF、PDGF-B 表达并导致血管内皮细胞损伤、促使新生血管生成相关。