PCOS患者血清miR-206表达及其与下丘脑-垂体-性腺轴内分泌的关系分析
2024-03-07戎小焕胥世凡
戎小焕,胥世凡
(许昌市人民医院,1.内分泌代谢科;2.内骨外一科,河南 许昌 461000)
多囊卵巢综合征(PCOS)是影响育龄期女性生殖健康的常见疾病之一,主要由内分泌系统紊乱与代谢紊乱引发,导致患者出现月经不调、闭经甚至或不孕等[1]。下丘脑-垂体-性腺轴对生殖发挥着重要的调控作用,通过调节促性腺素释放激素、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)的分泌,影响卵泡发育、雌激素释放与排卵等,最终影响女性月经周期与生育,下丘脑-垂体-性腺轴内分泌功能失调是PCOS 发病的重要病理机制[2]。胰岛素抵抗是影响PCOS 发病的另一公认的生理病理特征,可促进PCOS 患者病情进展[3]。近年来,微小核糖核酸(miRNA)在临床多种疾病诊治中的作用逐渐被探索与发现,且已有研究[4-5]表明miRNA 与胰岛素抵抗、PCOS 发病存在密切关系。微小核糖核酸-206(miR-206)为miRNA 家族重要成员,有研究[6]表明,miR-206 可通过促进胰岛素受体的磷酸化而促进胰岛素信号传导,抑制葡萄糖生成;另有研究[7]报道,miR-206 可能通过调节卵巢颗粒细胞生存与凋亡而在PCOS 中起着重要作用。但关于PCOS 患者血清miR-206 表达与下丘脑-垂体-性腺轴内分泌的关系尚需进一步深入探索、揭示,鉴于此,本研究旨在通过探讨二者间的关系,以为临床治疗提供新思路,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取许昌市人民医院2020 年3 月至2022 年12 月收治的148 例PCOS 患者设为研究组,另同期选取年龄、体质量指数与之相匹配的133 例月经正常的健康体检未孕女性设为对照组。纳入标准:①研究组均符合相关指南[8]中PCOS 诊断标准,且为初诊患者;②对照组月经正常;③年龄20~40 岁;④受试者均知情同意。排除标准:①伴有垂体瘤、腺垂体功能减退、甲状腺/甲状旁腺疾病、库欣综合症、先天性肾上腺皮质增生、性腺发育不全、醛固酮增多症、高泌乳素血症、卵巢早衰等其他内分泌疾病;②伴有心肝肾等脏器严重疾病;③伴有肿瘤疾病;④伴有自身免疫性疾病;⑤近6 个月内使用过激素类药物治疗;⑥伴有感染性疾病;⑦有酗酒、药物滥用史;⑧妊娠期、哺乳期女性。
本研究已获得医院伦理委员会审批,受试者均签署知情同意书。
1.2 方法
1.2.1 血清miR-206 表达检测 月经规律者于月经第5 天,月经无规律或闭经者于B 超检查未发现优势卵泡时,采集受试者晨起空腹肘静脉5 mL,离心10 min(3 000 r/min、半径10 cm),提取血清,放于-20℃冰箱保存待检。采用Trizol 法[爱必信(上海)生物科技有限公司]提取所有受试者血清总RNA,以紫外分光光度计鉴定其纯度、完整性,使用miRNeasy 提取分离试剂盒(Qiagen 公司)提取miRNA。采用 miRNA Reverse Transcription Kit 反转录试剂盒(上海慧颖生物科技有限公司)逆转录合成cDNA,按照SYBR PrimeScript RT-PCR Kit 试剂盒(上海易汇生物科技有限公司)说明书进行实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)操作,miR-206 引物序列:上游5'-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3',下游5'-TGCTTGGAATGTAAGGAAG-3';内参U6 引物序列:上游5' -GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3',下游5'-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT。反应总体积25 μL,其中cDNA 为1.0 μL,SYBR Primix Ex Taq TM 为10 μL,Primer 为0.8 μL,RNase H2O为13.2 μL。反应条件:95℃预变性5 min,95℃变性15 s,60℃ 30 s,72℃延伸10 s,总共40 个循环。以2-ΔΔct计算miR-206 表达。
1.2.2 血清性激素水平检测 采用化学发光免疫分析法检测血清FSH、LH、雌二醇(E2)、睾酮(T)、泌乳素(PRL)、孕酮(P)水平,全自动化学发光免疫分析仪购自北京贝尔生物工程股份有限公司,相关试剂盒购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司。
1.3 观察指标
①研究组、对照组血清miR-206 表达。②研究组、对照组血清FSH、LH、E2、T、PRL、P 水平。③分析PCOS 患者血清表达与FSH、LH、E2、T、PRL、P 的关系。
1.4 统计学方法
采用SPSS 24.0 软件进行统计学分析。经正态性检验,年龄、体质量指数、血压、血清各指标等计量资料均符合正态分布,以均数±标准差()表示,采用t检验;计数资料如生育史以百分率(%)表示,采用χ2检验;血清miR-206表达与性激素水平的关系采用Pearson 相关系数分析。P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组一般资料比较
研究组年龄、体质量指数、血压、有生育史情况与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),见表1。
表1 两组一般资料比较
2.2 两组血清miR-206 表达比较
研究组血清miR-206 表达平均为0.38±0.07,对照组平均为0.95±0.12,研究组血清miR-206 表达明显低于对照组,差异有统计学意义(t=49.220,P<0.001)。
2.3 两组血清性激素水平比较
研究组血清FSH、P 水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),血清LH、E2、T、PRL 水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。
表2 两组血清性激素水平比较()
表2 两组血清性激素水平比较()
2.4 PCOS 患者血清miR-206 表达与性激素水平的关系
经Pearson 相关系数分析,PCOS 患者血清miR-206 表达与LH、E2、T、PRL 水平均呈负相关性(r=-0.546、r=-0.501、r=-0.533、r=-0.485,P<0.001、P<0.001、P<0.001、P=0.001),与FSH、P 水平均呈正相关性(r=0.493、r=0.528,P=0.001、P<0.001),见图1。
图1 PCOS 患者血清miR-206 表达与性激素水平的关系散点图
续图1 PCOS 患者血清miR-206 表达与性激素水平的关系散点图
3 讨论
PCOS 是内分泌科常见病,发生与遗传、环境等因素有关,调查显示,我国育龄期妇女PCOS 患病率可高达10%[9],并呈逐渐上升趋势。PCOS 对女性身心健康可造成严重损害,及早对患者病情进行准确评估、为其制定合适的个体化治疗方案,对促进其预后改善意义重大。调节内分泌激素水平、降低胰岛素抵抗等是临床治疗PCOS 患者的重要干预途径,而探寻影响内分泌或胰岛素抵抗等的相关因素、寻找相关分子靶点对指导临床治疗具有积极意义。
miRNA 属于非编码单链RNA,在胚胎发育、调节细胞增殖/分化/凋亡、调控免疫功能等生物过程中具有举足轻重的作用,其在血清中稳定、易于检测,目前已被证实可作为多种疾病诊断的特异性生物标志物与治疗靶点[10-12]。miR206 位于人类染色体6p12.2 上,参与机体多种重要生理学过程。miR-206 可通过调节胰岛素信号传导、葡萄糖激酶活性,抑制葡萄糖转运蛋白表达,减少葡萄糖产生[13],同时其可调节人类卵巢颗粒细胞增殖与凋亡[14]。本研究中显示,研究组血清miR-206表达较对照组明显降低,提示PCOS 患者血清miR-206 表达明显下降。分析原因可能为,当血清miR-206 表达明显下降时,则其调节胰岛素信号传导、卵巢颗粒细胞增殖与凋亡的作用减弱,引起颗粒细胞功能失调,对卵巢激素分泌和卵泡发育等产生影响,从而参与PCOS 的发病过程。白爱红等[15]研究指出,PCOS 患者血清miR-206 表达明显低于月经规律健康女性,本研究结果与此相一致,共同表明血清miR-206 低表达可能参与了PCOS 发生发展。
另本研究中,研究组血清FSH、P 水平均明显低于对照组,而血清LH、E2、T、PRL 水平均明显高于对照组,提示PCOS 患者存在下丘脑-垂体-性腺轴内分泌紊乱。高雄激素血症是PCOS 患者重要临床特征之一,血清T 水平明显升高,其可正反馈作用于下丘脑-垂体,诱导LH 分泌过多,FSH 处于正常状态或分泌减少;而持续高水平LH又可促使卵泡膜细胞、间质细胞增生,进而导致雄激素合成增多,过多的雄激素通过芳香化作用可转化生成雌激素,导致E2水平升高,且高水平雄激素可持续刺激垂体而促使PRL 分泌增多。此外,胰岛素抵抗是PCOS 患者另一常见特征,此可引起雄激素水平升高、P 水平降低等。黄立等[16]研究报道,PCOS 患者血清T、E2、LH 水平明显高于健康体检妇女,本研究结果与此相符合。本研究还发现,PCOS 患者血清miR-206 表达与LH、E2、T、PRL 水平均呈负相关性,而与FSH、P 水平均呈正相关性。研究[17]表明,miRNA 参与了PCOS 中胰岛素抵抗的病理生理学过程。另有研究[18]报道,血清miRNA 表达与E2、P 等性激素水平具有一定的相关性。覃舒婷等[19]研究指出,血清miR-206 表达与雌激素受体表达呈负相关。miR-206 对人卵巢颗粒细胞增殖与凋亡具有一定的调节作用,其低表达可促进PCOS 发生发展[20],同时其表达上调对促进胰岛素信号改善具有一定作用[21],因此,血清miR-206 表达有可能通过上述路径而对PCOS 患者下丘脑-垂体-性腺轴内分泌相关指标产生调节作用,影响LH、E2、T、PRL、FSH、P 分泌与释放。
综上所述,PCOS 患者血清miR-206 表达明显下降,且与LH、E2、T、PRL、FSH、P 水平存在一定关系,临床中可通过干扰miR 表达调节下丘脑-垂体-性腺轴内分泌状态与功能,此为PCOS治疗方案的研究提供了新思路。但本研究具有一定的局限性,miR-206 参与PCOS 发生与发展的具体机制尚不明确,后续需进一步深入探索分析。