丽江山荆子链状化学成分研究

刘怡君，杨 丽，郎利娟，白惠荣，姜 北，肖朝江*

（1.云南省滇西抗病原植物资源筛选研究重点实验室，云南 大理 671000；2.大理大学药物研究所，云南 大理 671000；3.大理大学药学院，云南 大理 671000；4.毕节医学高等专科学校，贵州 毕节 551700）

丽江山荆子Malus rockiiRehd.系蔷薇科Rosaceae 苹果属Malus植物，属乔木，别名喜马拉雅山荆子，主要分布于我国云南、四川、西藏等地，生长于海拔2 400～3 800 m 的山谷杂木林中〔1〕。丽江山荆子果实可治疗肝病、腹泻、眼疾、月经不调等〔2〕。课题组前期研究发现根皮苷为丽江山荆子的主成分，其具有较好的体内外降脂活性，以及中等的体内抗疟和镇痛活性〔3〕；课题组还从丽江山荆子中分离得到2 个二苯并呋喃类化合物，二者在体外均具有显著的降脂活性〔4〕。

为进一步了解丽江山荆子的化学成分，本实验对丽江山荆子干燥枝叶95%乙醇提取物进行化学成分研究，从中分离鉴定了7 个链状化学成分，分别为反式植醇（1）、植物烯醛（2）、棕榈酸植酯（3）、1-十六烷酸甘油单酯（4）、9，12，13-三羟基-（10E，15Z）-十八碳二烯酸甲酯（5）、α-亚麻酸（6）、十八醇（7），所有化合物均为首次从丽江山荆子中分离得到，其中化合物1~6 为首次从苹果属植物中分离得到。化合物1~7的结构式见图1。

图1 化合物1~7的结构式

1 仪器与材料

AvanceⅢ-400 型核磁共振波谱仪（德国Bruker公司）；AL204 型万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；薄层色谱硅胶板GF254、柱层析硅胶（青岛海洋化工有限公司）；MCI gel CHP20∕P120（75~150 μm）、MCI gel CHP20P（37~75 μm）（日本三菱公司）；Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶（瑞典Amersham Bioscience 公司）；工业纯石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇，经重蒸后使用。

本实验所用植物样品于2018年6月采自云南省大理苍山，经大理大学药学院生药教研室张德全教授鉴定为丽江山荆子，植物标本（编号：20180611-2）存放于大理大学云南省滇西抗病原植物资源筛选研究重点实验室。

2 提取与分离

丽江山荆子干燥枝叶13.0 kg，粉碎后经95%乙醇冷浸提取4次，每次24 h，合并冷浸液，减压浓缩得总浸膏2.1 kg。总浸膏经硅胶柱色谱，氯仿-丙酮梯度洗脱（1：0→0：1），得8 个主要组分（Fr.A～Fr.H）。Fr.A（65.0 g）经反复硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯50：1→10：1，石油醚-丙酮100：1→10：1）和Sephadex LH-20凝胶柱色谱（氯仿-甲醇1：1）洗脱得到化合物1（208.0 mg）和化合物7（800.0 mg）。Fr.B（62.5 g）经反复硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯100：1→10：1，石油醚-丙酮1∶0→0∶1，纯氯仿）和Sephadex LH-20 凝胶柱色谱（氯仿-甲醇1∶1）洗脱得到化合物2（10.3 mg）、化合物3（11.8 mg）和化合物6（224.0 mg）。Fr.C（28.0 g）经反复硅胶柱色谱（氯仿-乙酸乙酯5：1，氯仿-丙酮100∶1）洗脱得到化合物4（65.0 mg）。Fr.E（40.0 g）经反复硅胶柱色谱（石油醚-丙酮10：1，氯仿-丙酮50：1→40：1）、Sephadex LH-20凝胶柱色谱（氯仿-甲醇1：1）和MCI柱色谱（70%甲醇）洗脱得到化合物5（10.5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：无色油状物。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.40（1H，t，J=7.0 Hz，H-2），4.14（2H，d，J=7.0 Hz，H-1），1.98（2H，t，J=7.4 Hz，H-4），1.66（3H，brs，H-20），0.87（6H，d，J=6.4 Hz，H-16，17），0.85（3H，d，J=6.1 Hz，H-18），0.84（3H，d，J=6.6 Hz，H-19）。以上波谱数据与文献〔5〕报道基本一致，故鉴定该化合物为反式植醇。

化合物2：黄色油状物。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：9.99（1H，d，J=8.2 Hz，H-1），5.88（1H，d，J=8.2 Hz，H-2），2.16（3H，s，H-20），0.86（6H，d，J=6.4 Hz，H-16，17），0.85（3H，d，J=6.6 Hz，H-18），0.84（3H，d，J=6.6 Hz，H-19）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：191.5（d，C-1），127.3（d，C-2），164.6（s，C-3），41.0（t，C-4），24.8（t，C-5），36.5（t，C-6），32.7（d，C-7），37.4（t，C-8），24.5（t，C-9），37.3（t，C-10），32.8（d，C-11），37.3（t，C-12），24.7（t，C-13），39.4（t，C-14），28.0（d，C-15），22.7（q，C-16），22.8（q，C-17），19.8（q，C-18），19.6（q，C-19），17.6（q，C-20）。以上波谱数据与文献〔6〕报道基本一致，故鉴定该化合物为植物烯醛。

化合物3：白色固体。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.33（1H，t，J=7.1 Hz，H-2），4.58（2H，d，J=7.1 Hz，H-1），2.29（2H，t，J=7.6 Hz，H-2'），2.00（2H，t，J=6.7 Hz，H-4），1.69（3H，brs，H-20），0.81~0.87（15H，overlap，H-16，17，18，19，16'）；13CNMR（100 MHz，CDCl3）δ：61.3（t，C-1），118.2（d，C-2），142.7（s，C-3），39.9（t，C-4），25.1（t，C-5），36.7（t，C-6），32.9（d，C-7），37.5（t，C-8），24.5（t，C-9），37.3（t，C-10），32.7（d，C-11），37.4（t，C-12），24.9（t，C-13），39.4（t，C-14），28.0（d，C-15），22.7（q，C-16），22.8（q，C-17），19.8（q，C-18），19.8（q，C-19），16.4（q，C-20），174.0（s，C-1'），34.5（t，C-2'），24.9（t，C-3'），29.2~29.8（t，C-4'~13'），32.0（t，C-14'），22.8（t，C-15'），14.2（q，C-16'）。以上波谱数据与文献〔7〕报道基本一致，故鉴定该化合物为棕榈酸植酯。

化合物4：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：4.18（1H，dd，J=11.6，4.8 Hz，H-1a），4.13（1H，dd，J=11.6，6.1 Hz，H-1b），3.92（1H，m，H-2），3.68（1H，dd，J=11.5，3.8 Hz，H-3a），3.58（1H，dd，J=11.5，5.9 Hz，H-3b），2.34（2H，t，J=7.6 Hz，H-2'），1.61（2H，m，H-3'），1.24（24H，brs，H-4'~15'），0.87（3H，t，J=6.8 Hz，H-16'）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：65.1（t，C-1），70.3（d，C-2），63.3（t，C-3），174.5（s，C-1'），34.2（t，C-2'），24.9（t，C-3'），29.2~29.7（t，C-4'~13'），32.0（t，C-14'），22.7（t，C-15'），14.2（q，C-16'）。以上波谱数据与文献〔8〕报道基本一致，故鉴定该化合物为1-十六烷酸甘油单酯。

化合物5：白色固体。1H-NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：5.61（2H，overlap，H-10，11），5.32（2H，overlap，H-15，16），3.93（1H，brs，H-9），3.80（2H，overlap，H-12，-OH），3.64（1H，s，-OH），3.57（1H，s，-OH），3.48（3H，s，-OCH3），3.30（1H，brs，H-13），2.20（1H，m，H-14a），2.17（2H，t，J=7.5 Hz，H-2），1.98（1H，m，H-14b），1.93（2H，m，H-17），1.46（2H，m，H-3），1.34（2H，m，H-8），1.19（8H，brs，H-4~7），0.81（3H，t，J=7.5 Hz，H-18）；13C-NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：174.1（s，C-1），34.2（t，C-2），25.6（t，C-3），29.7（t，C-4），30.0（t，C-5），30.2（t，C-6），26.1（t，C-7），38.3（t，C-8），72.0（d，C-9），136.5（d，C-10），130.4（d，C-11），75.3（d，C-12），75.3（d，C-13），31.3（t，C-14），126.6（d，C-15），133.3（d，C-16），21.2（t，C-17），14.5（q，C-18），51.4（q，-OCH3）。以上波谱数据与文献〔9〕报道基本一致，故鉴定该化合物为9，12，13-三羟基-（10E，15Z）-十八碳二烯酸甲酯。

化合物6：无色油状固体。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.35（6H，m，H-9，10，12，13，15，16），2.80（4H，m，H-11，14），2.34（2H，t，J=7.5 Hz，H-2），2.06（4H，m，H-8，17），1.63（2H，m，H-3），1.25~1.32（8H，brs，H-4~7），0.97（3H，t，J=7.5 Hz，H-18）。以上波谱数据与文献〔10〕报道基本一致，故鉴定该化合物为α-亚麻酸。

化合物7：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：3.64（2H，t，J=6.7 Hz，H-1），1.56（2H，qui，J=6.7 Hz，H-2），1.25（30H，brs，H-3~17），0.87（3H，t，J=6.8 Hz，H-18）。以上波谱数据与文献〔11〕报道基本一致，故鉴定该化合物为十八醇。

4 讨论

本实验首次从丽江山荆子干燥枝叶95%乙醇提取物中分离鉴定了7 个链状化合物，包括2 个链状二萜类化合物（1 和2）、4 个脂肪酸类化合物（4~7），以及1 个链状二萜和长链脂肪酸的加合物（3），所有化合物均为首次从丽江山荆子中分离得到，其中化合物1~6为首次从苹果属植物中分离得到。根据文献报道，反式植醇具有抗菌活性，高度抑制MTB C171Q 受体结核分枝杆菌KasA，体外活性接近异烟肼〔12〕；α-亚麻酸具有抗过敏、抗炎、改善肥胖引起的胰岛素抵抗等药理活性〔13-14〕。由此推断，丽江山荆子的民间用药有一定合理性，其潜在药用价值亟待开发。