上海市松江区猪口蹄疫病毒3ABC 抗体血清学调查

金一春 上海市松江区农产品质量安全中心 上海 201611

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物发生急性、热性、高度接触性的烈性传染病[1]，联合国粮农组织（FAO）和世界动物卫生组织（OIE）将其列入必须通报的动物疫病[2]。 该病传播快、发病率高，暴发流行时会造成十分惨重的经济损失， 是当前影响养猪业最严重的传染病之一。 我国为防控口蹄疫采取免疫、检疫、监测、扑杀及消毒等相结合的办法，其中最为关键性的措施就是采取疫苗免疫接种[3]。

口蹄疫的非结构蛋白会参与病毒复制、 多聚蛋白裂解和病毒颗粒组装，与结构蛋白相比变异较少、相对保守[4]。根据这些特性，2004 年Moonen P 等[5]发现采用FMDV 非结构蛋白3ABC 抗体ELISA 方法不但能检测阴性感染动物， 还能区分自然感染动物和灭活疫苗免疫动物。 为掌握松江区生猪口蹄疫感染情况，区分感染和免疫生猪，为辖区内猪口蹄疫防控提供科学依据，自2020 年起，笔者用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法连续3 年对辖区内的生猪开展口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体血清学检测，检测情况报告如下。

1 材料与方法

1.1 被检血清 按照辖区内生猪的养殖方式和规模，随机对具有代表性的规模场、专业户抽样，采集已完成免疫28 d 以上的生猪血液样本，采用常规方法分离血清，并于-20 ℃冰箱冷冻保存、备用。 共抽检血清样本1 505 份，其中规模猪场共950 份（种猪590 份、肉猪360 份），专业户555 份（肉猪）。

1.2 检测试剂 选用武汉科前生物股份有限公司生产的口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 阻断ELISA抗体检测试剂盒。

1.3 检测方法与结果判定

1.3.1 检测方法 严格按照检测试剂盒的使用说明。 为达到试验所需条件要求， 将检测试剂在20～25 ℃环境下平衡，用超纯水或去离子水将浓缩洗液作20 倍稀释，用样品稀释液将阴性、阳性对照血清和待检血清作2 倍稀释。取微量反应板，用约300 μL洗涤液洗涤板孔，重复2 次，最后将板拍干；在微量反应板各相应孔中加入已处理过的被检血清及阴性、阳性对照血清各100 μL，振荡、混匀、封膜，置37 ℃下温育60 min； 用约300 μL 洗涤液洗涤反应板孔，重复5 次，最后将板拍干；每孔加入酶标记物100 μL，振荡、混匀、封膜，置37 ℃下温育30 min；用约300 μL 洗涤液洗涤板孔，重复5 次，最后将板拍干；每孔加入底物溶液100 μL，混匀，置室温（20～25 ℃）避光显色10 min；每孔加入终止液50 μL，混匀，置酶标仪上用单波长630 nm 读取结果。

1.3.2 结果判定 在试验有效性成立条件下， 计算被检样品的阻断率。阻断率≥50%，该样品判为抗体阳性，阻断率<50%，该样品判为抗体阴性。

2 结 果

2.1 不同年份猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体检测 从检测结果看（见图1），2020 年，规模场和专业户的猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体阳性率分别为0.0%和0.0%；2021 年，规模场和专业户的猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体阳性率分别为2.12%和8.18%；2022 年，规模场和专业户的猪口蹄疫非结构蛋白3ABC 抗体阳性率分别为1.25%和1.67%。

图1 不同年份猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体检测

2.2 不同养殖方式猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体检测 共抽检猪血清样品1 505 份，经检测，阳性数有32 份，阳性率为2.13%。其中，规模场猪血清样品950 份，阳性数11 份，阳性率为1.16%；养殖专业户猪血清样品555 份， 阳性数21 份， 阳性率为3.78%（见表1）。

表1 不同饲养方式猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体检测

2.3 不同猪群猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体检测 抽检种猪血清样品共590 份、 肉猪血清样品共915 份。 检测数据显示（见表2），2020 年，种猪和肉猪的猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体阳性率分别为0.0%和0.0%；2021 年，种猪和肉猪的猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体阳性率分别为2.05%和5.92%；2022 年，种猪和肉猪的猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体阳性率分别为1.40%和1.40%。 不同养殖方式肉猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体检测结果见图2。

表2 不同猪群猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体

图2 不同养殖方式肉猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体

3 讨 论

监测结果表明，2020 年上海市松江区猪口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC 抗体阳性率为0.00%，而2021 年和2022 年的阳性率均高于2020 年。 其中，2021 年肉猪FMDV-3ABC 抗体阳性率为5.92%，结合2021 年上半年肉猪FMDV-O 免疫抗体合格率较低（42.7%），存在感染风险。 通过对猪场针对性的流行病学调查， 并未发现临床感染案例， 由于FMDV在动物体内存在隐性感染状况， 监测结果揭示，2021-2022 年规模场和专业户猪群均存在FMD 无症状隐性感染情况，或者曾感染过并产生了抗体。

从调查数据汇总来看， 专业户比规模场的阳性率高，肉猪比种猪的阳性数多，间接提示相对于种猪来说，日龄较小的肉猪由于FMDV-3ABC 抗体阳性率较高，发生口蹄疫病毒感染的可能性也越大。要加强专业户的养殖管理理念， 提高生物安全和疫情防控意识，特别是在调运和引进种畜上加强管理，做好消毒工作和疫苗接种。

本次试验采集的样品都是来自辖区内口蹄疫免疫猪群， 有研究表明免疫非纯化或者纯度不高的疫苗同样会产生非结构蛋白抗体阳性[6]，而当前疫苗生产工艺， 在病毒纯化过程中不能去除全部非结构蛋白，这就对区分野毒感染还是免疫形成一定的干扰。本试验结果也不排除疫苗纯度不够导致FMDV-3ABC 抗体阳性，所以，疫苗生产商需进一步改进疫苗纯化工艺，从而提高检测准确性，为口蹄疫防控起到积极作用。

本次监测调查只是做了初步筛查工作， 但结果也表明松江区动物口蹄疫野毒感染的风险依然存在，不能掉以轻心。 要根据实际情况，持续开展口蹄疫免疫抗体监测，并科学合理、有计划地进行口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的检测；对于FMDV 非结构蛋白抗体阳性的个体或群体， 并不代表一定是感染了FMDV，建议开展流行病学调查，结合临床症状，并采集相应的组织样品及O/P 液等进行病毒核酸PCR 检测；实行科学的免疫程序，确保100%免疫覆盖率，有条件的及时对监测结果进行风险评估，作出科学的预警预报， 为本区动物口蹄疫的根除和消灭提供技术支撑。