类风湿关节炎血清miR-410-3p 表达与膝关节软组织病变的关系

饶 慧,蒋盛芝,樊谕蓓,周雨晴,张丽华 （湖南师范大学附属第一医院风湿免疫科，湖南 长沙 410001）

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是以关节滑囊组织增生及炎症细胞浸润为特征的自身免疫性疾病，常累及肩关节、肘关节、膝关节、踝关节等，可破坏关节滑膜、软骨、关节囊甚至骨质，早期以关节肿胀、疼痛为主要临床表现[1]，病情进展后期可出现严重骨量流失及骨质破坏等，从而引起关节畸形及功能性障碍，若不及时治疗可影响关节功能甚至致残，对患者身心健康造成严重影响[2]。近年来，研究显示，miRNAs 在RA 患者机体内关节滑液、组织滑膜细胞及外周血中表达异常，并通过靶向不同细胞调节多个生物过程参与RA 的发生发展，可作为RA 的一种新的、有前景的生物标志物[3-4]。有学者提出，miR-410-3p 间接参与骨关节炎的发生发展，有效调控间充质干细胞向软骨细胞分化[5]，但是miR-410-3p 与RA 患者膝关节软组织病变的关系还需进一步分析。鉴于此，本研究检测RA 患者中miR-410-3p 的表达水平并分析其与膝关节软组织病变的关系，以期为RA 患者的临床治疗和预后改善提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2018 年1 月至2021 年10 月我院收治的RA患者89 例为RA 组，依据28 个关节疾病活动度评分[6]（disease activity score in 28 joints,DAS28）将其分为活动组（42 例）和缓解组（47 例）。活动组男18 例、女24 例，平均年龄（52.13±4.15）岁，平均BMI（23.21±2.33）kg/m2；缓解组男25 例、女22 例，平均年龄（52.57±4.38）岁，平均BMI（22.98±2.46）kg/m2。另选取同期体检健康志愿者52 例为健康组，其中男29 例、女23 例，平均年龄（51.97±3.78）岁，平均BMI（23.64±2.41）kg/m2。纳入标准：RA 组患者均符合《2018 中国类风湿关节炎诊疗指南》[7]中RA 的诊断标准；健康组均为体检健康志愿者。排除标准：合并恶性肿瘤；伴有全身组织感染疾病；处于妊娠期或哺乳期；伴心、肝、肾功能严重障碍；高脂血症、高血压、糖尿病、血液系统疾病、银屑病及其他代谢异常。各组患者性别、年龄和BMI 比较差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准（201712-004），所有受试者均对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-410-3p 表达检测 采集RA 组患者门诊或入院24 h 内、健康组志愿者体检当日空腹静脉血5 mL，以3 500 r/min离心15 min，分离血清并转移至无菌离心管中，-80 ℃冷冻保存备用。采用RT-PCR法检测miR-410-3p表达水平。

1.2.2 膝关节软组织病变超声检查 采用IS33 型彩色多普勒超声显像仪（探头频率为7.5～10.0 MHz），受试者平躺，暴露下肢，探头置于髌上正中横切面，屈膝90°～135°，观察患者关节软骨形态、厚度及软骨下骨质变化；在患者屈膝至135°时，观察股骨髁软骨厚度及回声改变；在屈膝30°～45°时，观察骨膜的厚度、形态及髌上囊积液情况，若存在积液，探头加压推开积液后，测量髌上囊滑膜厚度[8]。所有操作均由同1位影像科专业医生完成。

1.3 观察指标

比较各组患者血清miR-410-3p 水平、髌上囊液体深度、滑膜厚度、股骨内侧踝软骨厚度、股骨外侧踝软骨厚度。分析RA 患者血清miR-410-3p 水平与膝关节软组织病变的相关性。

1.4 统计学分析

数据采用SPSS 21.0 统计学软件进行分析。计量数据以均数±标准差（）表示，采用t检验；计数数据以率（%）表示，多组数据比较采用单因素方差分析和SNK-q检验，采用Pearson法进行相关性分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清miR-410-3p水平及超声检测结果对比

各组患者血清miR-410-3p 表达水平差异具有统计学意义（P＜0.05），活动组和缓解组患者血清miR-410-3p 表达水平均低于健康组（P＜0.05），活动组患者血清miR-410-3p 表达水平低于缓解组（P＜0.05）。各组患者髌上囊液体深度、滑膜厚度、股骨内侧踝软骨厚度和股骨外侧踝软骨厚度比较差异有统计学意义（P＜0.05）；活动组、缓解组患者髌上囊液体深度和滑膜厚度均大于健康组（P＜0.05），且活动组患者上述指标大于缓解组（P＜0.05）；活动组、缓解组患者股骨内、外侧踝软骨厚度均小于健康组（P＜0.05），且活动组患者上述指标小于缓解组（P＜0.05），见表1。

表1 血清miR-410-3p水平及超声检测结果比较（）

表1 血清miR-410-3p水平及超声检测结果比较（）

*：与健康组相比，P＜0.05；#：与缓解组相比，P＜0.05

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2.2 RA 患者血清miR-410-3p 表达水平与膝关节软组织病变的相关性分析

活动组、缓解组患者血清miR-410-3p 表达水平与髌上囊液体深度和滑膜厚度呈正相关（P＜0.05），与股骨内、外侧踝软骨厚度呈负相关（P＜0.05），见表2。

表2 RA 患者血清miR-410-3p 表达水平与膝关节软组织病变的相关性分析

3 讨论

RA 是一种以系统性炎症为主要特征的慢性风湿性疾病，发病率约为5/1 000[9]。膝关节是重要的承重关节，也是RA 常累及的关节，持续性炎症可造成关节及周围软组织不可逆的进行性损伤，甚至导致关节畸形、硬化，影响肢体功能[10]。研究显示，miR-410-3p 在脓毒症、系统性红斑狼疮等炎症性、免疫性疾病中发挥重要作用[11-12]，但miR-410-3p 在RA 中的表达及其与膝关节软组织病变的关系目前尚无定论。

本研究结果显示，活动组和缓解组患者miR-410-3p水平均低于健康组，且活动组低于缓解组，提示RA 患者血清miR-410-3p 表达水平明显下降，其低表达可能与RA 病情变化有一定关联。miR-410-3p 定位于人染色体14q32.31，其在多种疾病和癌症中表达异常[13-14]。miR-410-3p 可通过靶向下游转录因子调控滑膜成纤维细胞分泌，进而调控炎症微环境，通过分泌多种促炎细胞因子及趋化因子活化免疫细胞至损伤滑膜，参与RA 的发生发展[15]。Wang等[16]研究显示，miR-410-3p在RA 患者的滑膜组织和滑膜成纤维细胞中表达下调，证实了miR-410-3p与RA的发生有关。

本研究结果显示，缓解组、活动组患者髌上囊液体深度和滑膜厚度均大于健康组，且活动组患者上述指标均大于缓解组；缓解组、活动组患者股骨内、外侧踝软骨厚度均小于健康组，且活动组患者上述指标均小于缓解组，提示RA 患者膝关节发生软组织病变，且与病情严重程度有关。本研究相关性分析显示，RA患者miR-410-3p 水平与髌上囊液体深度和滑膜厚度呈正相关，与股骨内、外侧踝软骨厚度呈负相关，说明RA 患者中miR-410-3p 表达水平与膝关节软组织病变存在一定相关性。研究认为，NF-κB 信号通路依赖性基因表达的激活在RA 的发展中发挥重要作用，其可调控关节损伤及周围软组织下游靶基因TNF-α、IL-1β等炎症因子表达，导致关节软组织发生不可逆性病变。还有研究发现，miR-410-3p 水平与NF-κB 信号通路有一定关联，在体外培养的RA 滑膜成纤维细胞中，miR-410-3p 可通过抑制IKB-α 的磷酸化抑制p65 蛋白磷酸化，从而抑制NF-κB 信号通路的活化，减少炎症因子分泌和炎症刺激，进而延缓关节软组织的病变[17-18]。此外，miR-410-3p 还能与下游靶基因转录因子YY1 相互作用，通过靶向转录因子YY1 不仅可以抑制细胞因子和趋化因子的释放，减轻关节慢性炎症，还能抑制RA 滑膜成纤维细胞的增殖，促进其凋亡，进而减少软骨、滑膜增生[16,19]。

综上，RA 患者血清miR-410-3p 表达水平降低，且与膝关节软组织病变密切相关，血清miR-410-3p 水平检测可为膝关节软组织病变的评估提供依据。