拮抗剂方案注射HCG 后不同授精时间对IVF助孕结局影响
2024-01-13杨广铭梁光林李结贞李土珍赵善飞
杨广铭,梁光林,李结贞,李土珍,赵善飞
1.茂名市人民医院生殖医学中心,广东 茂名 525000;2.茂名市人民医院儿科,广东 茂名 525000
在生理条件之下,通过卵泡刺激素(folliclestimulating hormone, FSH)的作用,机体的卵母细胞中的胞浆会进一步发育成熟,再进一步通过黄体生成素(luteinizing hormone, LH)的作用最后成熟[1]。当进行体外受精-胚胎移植(in vitro fertilizationembryo transfer, IVF-ET)技术时,会向患者注射外源性人绒毛膜促性腺激素(human choriogonadotropin,HCG),目的是让卵母细胞有效成熟,进一步进行排卵,其成熟程度紧密影响着卵母细胞的受精能力和功能;不能成熟欠佳,也不能过熟,不然会整体影响受精与胚胎发育。现今临床通常在34~36 h 时间内取卵,但是最佳授精时间还没有确定一致[2]。本研究回顾性分析2021年3月—2023年3月在茂名市人民医院生殖中心接受IVF-ET 治疗,并采取拮抗剂方案的161 例COS 患者的临床资料,研究拮抗剂方案注射HCG 后不同授精时间和IVF 助孕结局的关系,来分析最佳的授精时间,为实验室和临床提高IVF 助孕结局提供依据。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取在本院生殖中心接受IVF-ET 治疗,并采取拮抗剂方案,行新鲜周期移植的161 例COS 患者,分组的依据为注射HCG 后的不同授精时间,A组(n=26):注射HCG 后的38~39 h(含39 h)授精;B组(n=77):注射HCG 后的39~40 h(含40 h)授精;C组(n=46):注射HCG 后的40~41 h(含41 h)授精;D组(n=12):注射HCG 后的41~42h(含42 h)授精。4组患者的一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。见表1。
表1 4 组患者基线资料比较
1.2 纳入与排除标准
纳入标准:①因输卵管方式不孕的女方;②获卵数3~20 枚;④男方精液质量达到IVF-ET 标准[3];⑤夫妻双方染色体正常。
排除标准:①女方患有多囊卵巢综合征;②女方患有子宫内膜异位症;③女方的卵巢功能衰退;④生殖器结核;⑤女方的染色体异常或者子宫畸形。
1.3 方法
①控制性超促排:在月经周期的第2~3 天选择促性腺激素(gonadotropins, Gn)来开启促排卵,并监测机体卵泡的具体生长情况,用Gn 5~6 d 后如果优势卵泡的直径在12~14 mm 时予以促性腺激素释放激素拮抗剂(gonadotropin-releasing hormone antagonists, GnRH)0.25 mg/d,直至HCG 注射日。
②取卵、卵母细胞的临床培养:在机体注射HCG,经过34~36 h 后进一步取卵,需要借助阴道超声的引导,并把卵母细胞放置在授精液的培养液里面培养,培养≥2 h 才能IVF 授精。
③体外授精与胚胎培养:精液通过密度梯度离心法与上游法共同处理后,把卵子和精子根据1∶20 000 的比例去放到授精液里面,放在培养箱里面培养。
④胚胎评分与胚胎移植:在授精后(17±1)h 左右,对受精情况进一步观察,正常受精的标志是出现两个原核和两个极体,然后需要每天进行观察1次。于第3 天依据细胞数卵裂球数,均一度及碎片评分1~4 级,其中1 级为优质胚胎,1、2、3 级为可利用胚胎,按照患者的实际情况,决定是否要移植和最终要移植的胚胎数量,剩余的胚胎,在经过患者的知情同意后对其进行囊胚培养或者是囊胚培养,形成囊胚后,根据Gardner 评分对其进行评估。
⑤临床结局的有效判断:在移植14 d 后抽取机体血测HCG 去判断是否出现生化妊娠,在移植28 d时予以超声检查,确认有无胎心与孕囊,确认有无临床妊娠。
其中A 组注射HCG 后的38~39 h(含39 h)授精;B 组注射HCG 后的39~40 h(含40 h)授精;C 组注射HCG 后的40~41 h(含41 h)授精;D 组注射HCG 后的41~42 h(含42 h)授精。
1.4 观察指标
胚胎发育指标情况:正常受精率、1PN(单原核)率、多PN(多原核)率、正常卵裂率、可用胚胎率、优质胚胎率、囊胚形成率。其中正常受精率=正常受精卵子数/受精卵子数×100%;可用胚胎率=可用胚胎数/正常受精卵子数×100%;正常卵裂率=正常受精卵裂数/受精数×100%;优质胚胎率=优质胚胎数/可利用胚胎数×100%;囊胚形成率=2 期及以上囊胚/囊胚培养数×100%。
临床结局指标:临床妊娠率、胚胎着床率、早期流产率以及每移植周期活产率。其中临床妊娠率=临床妊娠周期数/移植周期数×100%;胚胎着床率=孕囊数/总移植胚胎数×100%;早期流产率=孕12 周内自然流产周期数/临床妊娠周期数×100%;每移植周期活产率=活产的分娩数/新鲜胚胎移植周期数×100%。
1.5 统计方法
数据用SPSS 22.0 统计学软件做分析,计数资料行χ2检验,用例数(n)和率(%)表示,P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 4 组患者胚胎发育指标对比
D 组的优质胚胎率优于另外3 组,差异有统计学意义(P<0.05)。而4 组正常受精率、1PN 率、多PN 率、可用胚胎率、正常卵裂率以及囊胚形成率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
表2 4 组患者胚胎发育指标对比(%)
2.2 4 组患者临床结局指标对比
4 组的临床妊娠率以及每移植周期活产率对比,差异无统计学意义(P>0.05),但是D 组的胚胎着床率和早期流产率优于另外3 组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。
表3 4 组患者临床结局指标对比(%)
3 讨论
正常的机体条件下,核成熟与胞质成熟是机体卵母细胞的整体成熟的标志,两者共同作用才能有效保障卵母细胞的正常受精和胚胎[4-5]。但是有研究发现,控制性促排卵获得的机体卵母细胞的成熟状态呈现不一致。取卵后,整体的成熟情况和受精、胚胎的发育潜能也会受到体卵母细胞在外界具体的孵育时间,若受精太早的话,有部分的卵母细胞会有胞质未成熟的现象,还有部分卵母细胞的核质没有达到成熟,会造成受精率低的现象,但若授精时间太晚的情况下,卵母细胞会容易出现老化的现象,这样会进一步提升纺锤体结构异常的整体比率,进一步使卵母细胞中的染色体结构会发生异常,最终受精率与胚胎质量会受到影响[6]。
现今的临床中,在HCG 注射后,授精的具体时间没有统一,以往的研究显示,HCG 注射后在39~40 h 时间内可以进行授精的话,其最终的临床妊娠结局良好;所以研究认为,该时间段内卵母细胞的成熟情况良好,而且受精卵可以正常结合[7]。还有部分研究显示,成熟卵母细胞里纺锤体的产生会受到HCG 注射后时间的影响,在39~40.5 h 时间内,会发现大部分的MⅡ卵母细胞产生纺锤体,则会认为这个时间段可能是最佳的授精时间段[8]。
有相关研究发现,卵母细胞的外界培养时间如果太长的话,机体的纺锤体结构很容易遭到破坏,会影响最终的发育能力。有临床学者研究HCG 注射后的不同授精时间,结果发现优质胚胎率和可利用胚胎率最高的时间段是41~42 h 之间,且临床妊娠率也较好[9-10],该研究结果和本文中研究结果数据是保持一致的。研究指出,在HCG 注射后40~41 h时间内,其胚胎着床率与临床妊娠率能够提高。本研究结果数据发现,D 组的优质胚胎率44.00%更好(P<0.05);与汪佳星等[1]研究中优质胚胎率:A 组(33.9%)<B 组(39.5%)<C 组(41.8%)<D 组(44.6%)(P<0.05)的结果具有一致性。研究数据说明,HCG注射后,对授精时间适当增加后,会整体提高胚胎的质量;当时间在41~42 h 内进行受精的话,临床妊娠率最高,说明这个时间段授精的妊娠结局良好。还有研究提出,拮抗剂方案联合HCG 对IVF-ET 临床结局的影响,得出了添加少量的HCG,将可以将优质胚胎数量进一步提高[11-12]。
综上所述,时间在38~42 h 内的IVF-ET 的临床结局并不会受到拮抗剂方案HCG 注射后的不同授精时间的影响,但如果在这个时间范围内,将授精时间在一定程度上延迟时,会进一步增加患者优质胚胎率。