IL-35 和IL-37 在幽门螺杆菌相关性胃炎和胃溃疡患者中的表达及临床意义

王 琼 吕 颖

幽门螺杆菌（Hp）是生长于人类胃部的一种特殊致病菌，Hp感染者常伴随急性或慢性炎症反应[1]。据统计，全球约50%的人群已感染Hp，其中2%～5%会发生胃癌，因此Hp感染被认为是导致胃部疾病发生的重要因素[2]。胃炎是Hp感染者常见的并发疾病，根据症状持续时间可分为急性胃炎和慢性胃炎，其中慢性胃炎通常是胃溃疡和胃癌等较严重胃部疾病的前驱疾病。研究表明，70%～85%的胃溃疡和90%～95%的十二指肠溃疡是由Hp感染诱发的[3]。IL-35 是IL-12 家族成员，被认为是一种抗炎细胞因子，可以在多种病原体感染过程中调节免疫反应和炎症反应[4-5]。IL-37 是IL-1 家族成员，广泛存在于骨髓、睾丸、淋巴结、胸腺和皮肤等组织器官中，其被认为具有一定的抗炎作用[6-7]。IL-35 和IL-37 在多种病原体感染者中表达水平的变化已有不少报道，但关于两者在Hp感染导致的胃炎和胃溃疡患者中表达水平变化的报道较少。本研究探讨了IL-35 和IL-37 在Hp相关性胃炎和胃溃疡患者中表达水平的差异及临床意义。

1 研究对象与方法

1.1 研究对象

选择2019年6月至2021年6月中国人民解放军联勤保障部队第九四一医院收治的胃炎和胃溃疡患者作为研究对象。纳入标准：（1）行胃镜检查，且结果显示有胃黏膜改变；（2）符合《慢性胃炎基层诊疗指南（2019年）》[8]中胃炎的诊断标准；（3）符合《消化性溃疡基层诊疗指南（2023年）》[9]中消化性溃疡的诊断标准，且经胃镜确诊；（4）符合《第六次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告（非根除治疗部分）》[10]中Hp感染的诊断标准。排除标准：（1）近2 个月内服用过阿司匹林或非甾体抗炎药；（2）合并恶性肿瘤；（3）合并严重代谢性疾病或自身免疫病；（4）服用免疫抑制剂；（5）感染HBV、丙型肝炎病毒（HCV）或人类免疫缺陷病毒（HIV）等。最终纳入124 例患者，其中Hp相关性胃炎和胃溃疡患者共80 例，非Hp相关性胃炎和胃溃疡患者共44 例。所有入组患者及家属均签署知情同意书，本研究获得医院医学伦理委员会批准。

1.2 分组和资料收集

在入组的124 例患者中，Hp相关性胃炎患者42 例（设为HAG 组），非Hp相关性胃炎患者24例（设为nHAG 组），Hp相关性胃溃疡患者38 例（设为HGU 组），非Hp相关性胃溃疡患者20 例（设为nHGU 组）。收集所有入组患者的性别、年龄、BMI，以及血清总胆固醇（TC）、尿酸（UA）、ALT、AST 和C 反应蛋白（CRP）水平等临床资料。

1.3 样本采集

采集入组患者的空腹外周血10 mL，500×g 离心10 min，分离血浆，所得血浆冻存于-80 ℃冰箱，待后续实验检测其中IL-35 和IL-37 的表达水平。所有入组患者在行胃镜检查时采集胃黏膜活体组织，碾碎后加入裂解液在冰上充分裂解，使用总RNA 提取试剂盒和反转录试剂盒[均购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司]获取cDNA，冻存于-80 ℃冰箱，待测。

1.4 血浆中IL-35 和IL-37 蛋白的表达水平检测

采用ELISA 法检测血浆中IL-35 和IL-37 蛋白的表达水平。取1.3 中的血浆在室温下融化，500×g 离心5 min，使用ELISA 检测试剂盒（购自美国R＆D 公司）并严格按照说明书进行操作。使用HM-96A 型多功能酶标仪（购自山东恒美电子科技有限公司）进行比色分析，测定样本在450 nm波长处的光密度（OD）值，绘制标准曲线，根据OD 值计算样本含量。

1.5 胃黏膜组织中IL-35 和IL-37 mRNA 的表达水平检测

采用实时荧光定量PCR 法检测胃黏膜组织中IL-35 和IL-37 mRNA 的表达水平。单个样本的PCR反应体系包括Master mix、IL-35 或IL-37 的正向引物和反向引物各1 μL、样本cDNA 和ddH2O。PCR反应条件：95 ℃预处理5 min；95 ℃ 40 s，60 ℃40 s，72 ℃ 15 s，共计35 个循环；最后4 ℃ 2 h。以GAPDH 作为内参，采用2-ΔΔCt法计算IL-35 和IL-37 mRNA 的相对表达量。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司设计并合成，引物序列见表1。

表1 引物序列

1.6 统计学方法

应用SPSS 23.0 和GraphPad 8.0 软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，2组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用方差分析。计数资料以例（%）表示，组间比较采用卡方检验。采用Spearman 相关系数法分析Hp相关性胃炎和胃溃疡患者中IL-35 和IL-37 的表达水平与胃溃疡发生的相关性。采用logistic 回归模型分析影响Hp相关性胃溃疡发生的危险因素。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组的临床资料比较

结果表明，4 组的年龄、性别构成，以及BMI、TC、UA、ALT、AST 和CRP 水平的差异均无统计学意义（P均＞0.05），提示具有可比性。见表2。

表2 各组的临床资料比较

2.2 HAG 组和nHAG 组中IL-35 和IL-37 的表达水平比较

由表3 可知，与nHAG 组相比，HAG 组患者血浆中IL-35 和IL-37 蛋白的表达水平，以及胃黏膜组织中IL-35 和IL-37 mRNA 的相对表达量均显著降低，组间的差异均有统计学意义（P均＜0.05）。

表3 HAG 组和nHAG 组中IL-35 和IL-37 的表达水平比较

2.3 HGU 组和nHGU 组中IL-35 和IL-37 的表达水平比较

由表4 可知，与nHGU 组相比，HGU 组血浆中IL-35 和IL-37 蛋白的表达水平，以及胃黏膜组织中IL-35 和IL-37 mRNA 的相对表达量均显著降低，组间的差异均有统计学意义（P均＜0.05）。

表4 HGU 组和nHGU 组中IL-35 和IL-37 的表达水平比较

2.4 Hp 相关性胃炎和胃溃疡患者的各项指标与胃溃疡发生的相关性

结果显示，Hp相关性胃溃疡患者血浆中IL-37蛋白的表达水平，以及胃黏膜组织中IL-35 和IL-37 mRNA 的相对表达量均与胃溃疡的发生呈负相关（P均＜0.05），其余指标与胃溃疡的发生均无显著相关性（P均＞0.05）。见表5。

表5 Hp 相关性胃溃疡患者的各项指标与胃溃疡发生的相关性

2.5 胃溃疡发生的影响因素分析

以Hp相关性胃炎和胃溃疡患者是否发生胃溃疡作为因变量（发生胃溃疡=1，未发生胃溃疡=0），以2.4 中具有统计学意义（P＜0.05）的项目（包括IL-35 mRNA、IL-37 和IL-37 mRNA）作为自变量，纳入logistic 回归模型分析，结果显示IL-35 mRNA、IL-37 和IL-37 mRNA 均为胃溃疡发生的保护因素（P均＜0.05）。见表6。

表6 影响胃溃疡发生的logistic 回归模型分析

3 讨论

Hp感染是胃炎、胃溃疡等消化系统疾病的重要致病因素，也是导致消化道肿瘤发生及进展的重要因素[11]。患者感染Hp后，致病菌会穿透胃壁黏液层，定植于胃上皮细胞表面并大量增殖，同时伴随毒素因子及多种炎症细胞因子在细菌定植处大量累积，引发局部及全身性免疫反应和炎症反应，加重胃黏膜损伤程度，最终导致不同程度的消化系统疾病[12-13]。研究表明，多种炎症细胞因子参与了Hp感染引起的胃黏膜损伤过程，其中IL 家族扮演了重要角色[14]。IL-1、IL-6 和IL-27 等促炎细胞因子在Hp相关性消化道疾病患者中表达水平的变化已有不少报道[15-16]，但关于抗炎细胞因子（如IL-35、IL-37）的表达水平变化尚未明确，本研究对此进行了探讨。

研究表明，在多种急慢性感染性疾病、免疫相关疾病患者中，IL-35 具有抑制炎症细胞增殖的作用[17]。在自身免疫性结肠炎患者中，IL-35 抑制Th1 和Th17 细胞增殖的作用较IL-27 更强，其可以在一定程度上避免因过度自身免疫反应导致的肠道损伤[18]。p35 和EBI3 是IL-35 的2 个亚基，均参与了免疫反应和炎症反应过程。研究表明，p35可减轻单纯疱疹病毒性角膜炎（HSK）合并慢性HBV 感染大鼠的炎症反应，而EBI3 能够通过下调IL-17 和IL-22 的表达及抑制Th17 细胞的活性，从而减弱大鼠的免疫防御功能[19]。IL-37 在多种病理、生理过程中发挥着抗炎作用。巨噬细胞和上皮细胞可以通过分泌IL-37 抑制其他炎性细胞因子（如IL-1α、IL-1β、IL-6 和TNF-α 等）的表达[20]。研究表明，IL-37 通过附着在IL-18Rα、IL-18BP 和IL-37/IL-18Rα 复合体上而激活抗炎反应[21]；另有研究表明，IL-37 在受到机体内外源性因素的刺激后会被半胱氨酸特异性天冬氨酸蛋白酶-1（caspase-1）激活，通过改变细胞膜通透性而发挥抗菌、抗病毒、中和内毒素及抑癌等多种免疫防御作用[22]。

本研究结果显示，Hp相关性胃炎和胃溃疡患者血浆中IL-35 和IL-37 蛋白的表达水平，以及胃黏膜组织中IL-35 和IL-37 mRNA 的相对表达量均较未感染者显著降低；此外，通过相关性分析发现血浆中IL-37 蛋白的表达水平，以及胃黏膜组织中IL-35 和IL-37 mRNA 的相对表达量均与Hp相关性胃溃疡的发生呈负相关，而血浆中IL-35 蛋白的表达水平与Hp相关性胃溃疡的发生无显著相关性，这可能与纳入研究的样本量较少，或ELISA 检测结果的偏倚有关。本研究中logistic 回归模型分析结果显示，IL-35 mRNA、IL-37 和IL-37 mRNA 均为胃溃疡发生的保护因素。以上结果提示，Hp感染会降低抗炎细胞因子IL-35 和IL-37 的蛋白表达水平和转录水平。由此推测，Hp可能通过上述途径抑制机体固有免疫防御和特异性免疫防御功能，导致Hp定植处的胃黏膜屏障受损，进而诱导Hp相关性胃炎患者的病情加重，但Hp相关性胃炎是否更容易进展为胃溃疡或胃癌，仍有待进一步验证。

综上所述，Hp相关性胃炎和胃溃疡患者中IL-35 和IL-37 均呈低表达，两者对于诊断胃炎和胃溃疡患者是否感染Hp具有一定应用价值。本研究存在一定的局限性：首先，本研究为单中心研究，且所有入组患者均需行胃镜检查及活体组织检查，导致最终纳入的病例数较少，今后的研究需扩大样本量；其次，本研究仅选择了IL-35 和IL-37 作为观察指标，未对其他炎症细胞因子进行检测；最后，本研究探讨了IL-35 和IL-37 在Hp相关性与非Hp相关性胃炎和胃溃疡患者中表达水平的差异，今后需进一步分析两者发挥抗炎效应的具体作用机制。