宫颈病变中转录因子NF-κB 家族P50、IκB-α 表达与HPV16 阳性宫颈癌的关系分析

李铃铃，尹翼，何爱琴

宫颈癌为女性生殖系统中常见的恶性肿瘤，在女性恶性肿瘤发病率中占第2 位［1-2］。高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus， HPV）作为最主要的致癌因子，可直接参与宫颈癌的发生发展，其中约70%的宫颈癌与高危型HPV16 感染有关［3］。目前高危型HPV16 如何诱导正常宫颈上皮细胞发生恶性转化，病毒癌蛋白在HPV 感染早、晚期通过调控何种细胞信号通路发挥致癌作用等问题尚不清楚，亟需进行研究。核因子-κB（nuclear factor κB，NF-κB）P50、NF-κB 抑制蛋白-α（inhibitory nuclear factor-κB-α， IκB-α）参与肺癌等多种恶性肿瘤的发生发展［4-7］，但NF-κB P50、IκB-α 表达与HPV16 阳性宫颈癌的关系目前尚不清楚。鉴于此，本研究分析NF-κB P50、IκB-α 表达及两者与HPV16 阳性宫颈癌预后的关系，旨在为临床治疗及改善宫颈癌患者的预后提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集南通大学附属肿瘤医院2017 年3 月至2019 年2 月收治的106 例HPV16阳性宫颈癌、52 例高级别鳞状上皮内瘤变（highgrade squamous intraepithelial lesion， HSIL）、43 例低级别鳞状上皮内瘤变（low-grade squamous intraepithelial lesion， LSIL）患者的宫颈组织标本及同期行全子宫切除术（因子宫腺肌症）的80 例患者正常宫颈 组 织 标 本。患 者 年 龄21～62 岁［（46.85 ±10.42）岁］。本研究患者及其家属均知情同意，并经本院医学伦理委员会审批。

纳入标准：病理类型经病理科证实者；年龄＞18 岁；术前未接受任何形式的治疗；临床资料完整。排除标准：伴有其他部位恶性肿瘤或阴道炎；注射过HPV 疫苗；重要脏器严重功能障碍；伴有免疫缺陷性疾病；伴有传染性疾病或性病者；哺乳期或妊娠期女性。

1.2 NF-κB P50、IκB-α 表达检测方法 采取免疫组化法检测宫颈癌组织、LSIL 组织、HSIL 组织、正常宫颈组织中NF-κB P50、IκB-α 表达情况。标本采用石蜡包埋、切片，灭活、微波抗原修复、洗涤，添加鼠抗人NF-κB P50 单克隆抗体、IκB-α 抗体（北京博奥森公司），于4 ℃孵育过夜；随后，采用磷酸盐缓冲溶液冲洗，滴二氨基联苯胺显色液显色，采用苏木精复染，脱水，封片。NF-κB P50、IκB-α 以细胞核、细胞质染为黄色或棕黄色记为阳性表达，否则记为阴性表达。

1.3 预后随访 通过门诊、电话等多种方式进行随访，随访截止时间为2022 年3 月，每3 个月随访1 次，以研究对象失访、死亡或随访时间截止为终点事件。

1.4 临床资料收集 收集影响HPV16 阳性宫颈癌患者预后的有关资料，主要包括年龄、体重指数（body mass index， BMI）、肿瘤最大径、是否合并基础疾病（糖尿病、高血压、高脂血症）、临床分期、淋巴结转移、分化程度、宫旁浸润、脉管侵犯、术后治疗（放疗、化疗）、宫颈癌组织中NF-κB P50 及IκB-α表达情况。

1.5 统计学处理 采用SPSS 18.0 统计软件处理所得数据。计量资料以xˉ± s 表示，采用t检验；计数资料以例数和百分比（%）表示，采用χ2检验，多组间计数资料两两比较需调整检验标准，即α'=α/k×（k-1）/2，其中α=0.05，k是组数；绘制受试者工作特征（receiver operating characteristics， ROC）曲线；采用Cox 回归模型分析影响因素。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NF-κB P50、IκB-α 在不同宫颈组织中的表达情况比较 正常宫颈组织、LSIL 组织、HSIL 组织、宫颈癌组织中NF-κB P50 阳性表达率、IκB-α 阴性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；NF-κB P50 阳性表达率、κBα 阴性表达率表现为宫颈癌组织＞HSIL 组织＞LSIL 组织＞正常宫颈组织（P＜0.01）。见表1。

表1 NF-κB P50、IκB-α 在不同宫颈组织中的表达情况

2.2 NF-κB P50、IκB-α 表达与宫颈癌患者病理特征的关系 不同年龄、BMI、病理类型、宫旁浸润的HPV16 阳性宫颈癌患者癌组织中NF-κB P50 阳性表达率、IκB-α 阴性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；肿瘤最大径≥4 cm、临床分期Ⅲ/Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化、脉管侵犯的HPV16 阳性宫颈癌患者癌组织中NF-κB P50 阳性表达率、IκB-α 阴性表达率高于肿瘤最大径＜4 cm、临床分期Ⅰ/Ⅱ期、无淋巴结转移、中/高分化、无脉管侵犯的HPV 阳性宫颈癌患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 NF-κB P50、IκB-α 表达与宫颈癌患者病理特征的关系［例（%）］

2.3 影响HPV16 阳性宫颈癌患者预后的多因素分析 106 例HPV16 阳性宫颈癌患者术后随访3 年，共失访3 例，剩余103 例患者中22 例死亡，存活率为78.64%（81/103）；Cox 回归分析显示，临床分期（OR=2.546，95%CI：1.054～3.672）、淋巴结转移（OR=2.734，95%CI：1.469～4.183）、分化程度（OR=3.257，95%CI：2.015～6.432）、NF-κB P50 阳性表达（OR=4.025，95%CI：2.765～8.436）、IκB-α 阴性表 达（OR=4.368，95%CI：3.104～10.254）均 是HPV16 阳性宫颈癌患者预后的独立影响因素（P＜0.05）。见表3。

表3 影响HPV16 阳性宫颈癌患者预后的单因素、多因素分析

2.4 NF-κB P50、IκB-α 表达与HPV16 阳性宫颈癌患者预后的关系 截至随访结束，NF-κB P50 阳性患者失访2 例，剩余76 例，其中死亡20 例，总存活率为73.68%（56/76）；NF-κB P50 阴性患者失访1 例，剩余27 例，其中死亡2 例，总存活率为92.59%（25/27）。NF-κB P50 阳性表达患者与NFκB P50 阴性表达患者生存曲线比较，差异有统计学意义（χ2=4.098，P=0.043）。见图1。

图1 HPV16 阳性宫颈癌组织NF-κB P50 阳性表达、NF-κB P50 阴性表达患者生存曲线

截至随访结束，宫颈癌患者中IκB-α 阳性患者无失访，无死亡，总存活率为100.00%（10/10）；IκBα 阴性患者失访3 例，剩余93 例，其中死亡22 例，总存活率为76.34%（71/93）。IκB-α 阳性表达患者与IκB-α 阴性表达患者生存曲线比较，差异有统计学意义（χ2=3.783，P=0.048）。见图2。

图2 HPV16 阳性宫颈癌组织IκB-α 阳性表达、IκB-α 阴性表达患者生存曲线

3 讨论

宫颈癌的发病机制目前尚不清楚，可能与遗传、过早性生活等因素有关［8-10］。HPV 是一种具有高度特异性的嗜上皮性病毒，其中高危型HPV16 持续感染的宫颈病变进展为宫颈癌的概率大幅增加［11］。在宫颈癌变发展期间及时筛查、准确诊断并给予对症治疗对降低宫颈癌发生率、死亡率意义重大。对NF-κB P50、IκB-α 与HPV16 阳性宫颈癌的关系进行探讨，具有十分重要的临床意义。

本研究结果显示，NF-κB P50 阳性表达率、IκB-α阴性表达率表现为宫颈癌组织＞HSIL 组织＞LSIL 组织＞正常宫颈组织。提示NF-κB P50 在宫颈病变组织中异常高表达，且随着宫颈病变的严重程度增加，NF-κB P50 表达水平呈升高趋势；IκB-α 在宫颈病变组织中异常低表达，且随着宫颈病变的严重程度增加，IκB-α 表达水平呈下降趋势。目前已有多项研究证实，慢性炎症与肿瘤的发生发展密切相关［12-14］；NF-κB 家族为炎症通路中的关键成员之一，其在介导免疫应答、调节天然免疫系统功能方面发挥着重要作用。其中NF-κB P50 为其家族的主要成员之一，可与其他家族成员互相聚合为同源、异源二聚体，在上游激活信号的作用下由细胞质转移至细胞核，进而发挥促细胞增殖、迁移及血管生成等作用［15］。IκB-α 为NF-κB 的抑制蛋白，在细胞质内，IκB-α 与NF-κB 相结合，并通过IκB-α 锚蛋白与位于NF-κB 上的核定位信号结合，遮蔽核定位信号使NF-κB 滞留于细胞质内呈失活状态，进而参与肿瘤的发生［16］。本研究结果表明，肿瘤最大径≥4 cm、临床分期Ⅲ/Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化、脉管侵犯的HPV16 阳性宫颈癌患者癌组织中NF-κB P50 阳性表达率、IκB-α 阴性表达率高于肿瘤最大径＜4 cm、临床分期Ⅰ/Ⅱ期、无淋巴结转移、中/高分化、无脉管侵犯的HPV16 阳性宫颈癌患者。提示NF-κB P50、IκB-α 表达与HPV16 阳性宫颈癌临床病理特征存在一定的相关性。本研究中，Cox 回归分析显示，临床分期、淋巴结转移、分化程度、NF-κB P50阳性表达、IκB-α 阴性表达均是HPV16 阳性宫颈癌患者预后的独立影响因素。NF-κB P50 在正常宫颈组织中的表达水平较低，当HPV16 感染宿主细胞，病毒蛋白可能通过破坏NF-κB 与抑癌基因信号通路的平衡，致使炎症通路NF-κB 被异常激活，进而导致宫颈癌的发生［17］；NF-κB 被激活后，NF-κB P50 与IκB-α 合成增加，并通过促进NF-κB P50 表达，增加IκB-α 蛋白降解，使IκB-α 表达降低，进而抑制NF-κB 活性，并调控肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡［18］。截至随访结束，NF-κB P50 阳性、NF-κB P50 阴性的HPV16 阳性宫颈癌患者总存活率分别为73.68%、92.59%，NF-κB P50 阳性表达患者与NF-κB P50 阴性表达患者生存曲线比较，差异有统计学意义；IκB-α 阳性、IκB-α 阴性的HPV16阳性宫颈癌患者总存活率分别为100.00%、76.34%，IκB-α 阳性表达患者与IκB-α 阴性表达患者生存曲线比较，差异有统计学意义。提示NF-κBP50、IκB-α 表达与HPV16 阳性宫颈癌患者预后具有一定的相关性，检测其表达情况对HPV16 阳性宫颈癌患者预后评估具有重要参考价值。NF-κB 作为一种多向调节功能的转录因子，可以同源或异源二聚体与IκB 抑制蛋白结合，在炎症、免疫反应等方面均发挥着重要作用，同时还可调节细胞增殖基因、抗凋亡基因的表达，而且被证实与肿瘤的发生有关；NF-κB P50 作为NF-κB 家族的主要成员之一，可通过启动靶基因的转录，影响细胞增殖、凋亡，进而参与肿瘤的发生发展［19］。IκB-α 与NF-κB家族结合为复制物，抑制NF-κB 活性，并可实现NF-κB 活化、失活的循环，进而调控基因转录。Tan等［20］研究报道，NF-κB 呈非活化状态时，在外来信号的刺激下，可经特异性激酶使IκB-α 磷酸化，致使IκB-α 降解，游离二聚体移位至细胞核，并通过与靶基因启动子κB 位点结合，对靶基因的表达进行调节。

综上所述，HPV16 阳性宫颈癌患者癌组织中NF-κB P50 阳性、IκB-α 阴性表达率较高，NF-κB P50、IκB-α 表达与HPV16 阳性宫颈癌临床病理特征及预后均具有一定的相关性，对其表达情况进行检测对HPV16 阳性宫颈癌患者预后评估具有重要参考价值。