奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂有关物质方法学验证

2024-01-01潘丽汤宽霞

品牌与标准化 2024年4期

【摘要】目的：对奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂有关物质方法进行验证。方法：HPLC法，紫外检测器，DAD检测器，梯度洗脱。结果：各已知杂质与奥美拉唑分离度均大于1.5，空白辅料不干扰各杂质的检测。结论：该方法各杂质的准确度良好，峰纯度良好，适合奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂的测定。

【关键词】奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂；有关物质；方法学验证

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.04.008

Methodological Validation of Related Substances in Omeprazole Sodium Bicarbonate Dry Suspension

PAN Li， TANG Kuanxia

（Haikou Pharmaceutical Factory Co.， Ltd.， Haikou 570311， China）

Abstract： Objective： To verify the substance method of omeprazole sodium bicarbonate dry suspension. Method： HPLC， UV detector， DAD detector， gradient elution. Result： The separation degree between all known impurities and omeprazole was greater than 1.5， blank excipients do not interfere with the detection of various impurities. Conclusion： This method has good accuracy and peak purity for various impurities， and is suitable for the determination of omeprazole sodium bicarbonate dry suspension.

Keywords： omeprazole sodium bicarbonate dry suspension； related substances； methodology validation

奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂广泛用于医治胃溃疡、食管反流病、十二指肠溃疡以及有关的胃灼热和其他症状，并且在糜烂性食管炎医治与维持康复上效果明显。该药物中的碳酸氢钠对于中和胃酸有明显疗效，可避免胃酸被奥美拉唑降解，将奥美拉唑治疗消化性溃疡的效果充分发挥。奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂能够迅速起效，并且药性持久。

1仪器与试药

岛津公司的LC-2010AHT高效液相色谱仪，紫外检测器，DAD检测器，色谱柱：辛烷基键合硅胶柱（250 mm×4.6 mm，5μm），色谱乙腈，磷酸氢二钠，水，磷酸，自制品（201101批）。

2方法学验证

2.1检测波长的确定

在选择奥美拉唑或奥美拉唑磺酰化物作为对照品时，应取适量的样品，使用流动相将其溶解，同时将其制成质量浓度为20μg/mL的溶液，选择紫外-可见分光光度法进行分析，扫描控制在200～400 nm。

结果：奥美拉唑磺酰化物在273.2 nm波长处有最大吸收，奥美拉唑在275 nm的波长处有最大吸收。两者的最大吸收波长相近，都在280 nm附近。参照《中华人民共和国药典》2020年版二部中奥美拉唑原料及肠溶片公示的标准及欧洲药典原料的标准，选择280 nm为本品的检测波长。

2.2色谱条件的选择及专属性试验

空白辅料溶液：参照处方配制无奥美拉唑的空白辅料，称取空白辅料约1.8 g，置于50 mL量瓶中，加溶剂将其溶解后进行稀释至刻度，摇匀，作为空白辅料溶液。

混合溶液：精密移取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质H、杂质I定位溶液各1.0 mL，置于同一50 mL量瓶中；取本品适量（约相当于奥美拉唑10 mg），置于上述量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

精密量取上述溶液各20μL，注入液相色谱仪，按设计色谱条件进行试验，记录色谱图。由试验结果可知，空白辅料无干扰，各已知杂质与奥美拉唑主峰均能有效分离。在DAD条件下，各成分主峰处均无不纯物检出，各杂质均在280 nm处有较大吸收，证明该方法专属性良好。

2.3强制降解试验

空白辅料溶液的配制：按照处方配比，称量不含奥美拉唑的空白辅料1.8 g放入50 mL容量瓶中，加入溶剂使其溶解，稀释到刻度，摇匀，即得。

试验样品溶液的配制：取奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂1袋，精确称量出相应的含量（约相当于奥美拉唑10 mg），放入50 mL容量瓶中，加入有机试剂使其溶出，稀释到刻度，摇匀，即得。

光降解试验样品溶液的配制：取奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂1袋，精确称量出相应的含量（约相当于奥美拉唑10 mg），放入50 mL的大容量瓶中，加入30 mL的有机溶剂使其溶出，在4500 lx的荧光灯下放置24 h，加入有机化合物，直至刻度，摇动，过滤，收集续滤液，即得。

氧化破坏试验溶液配制：取奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂1袋，精确称量出相应的含量（约相当于奥美拉唑10 mg），放入50 mL的容量瓶中，加入30 mL的溶剂使其溶解，加30%过氧化氢0.5 mL，放置0.5 min，加溶剂稀释至刻度，摇匀，过滤，收集续滤液，即得，配制完成后应迅速进样。

高温降解供试品溶液的配制：取奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂1袋，精确称取内容物适量（约相当于奥美拉唑10 mg），置于50 mL容量瓶中，加30 mL溶剂溶解，水浴放置0.5 h，取出，放冷，加溶剂稀释至刻度，摇匀，过滤，收集续滤液，即得。

酸分解供试品溶液的配制：取奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂1袋，精确称量出相应的含量（约相当于奥美拉唑10 mg），置于50 mL的容量瓶中，用胶头滴管加入48 mol/L的盐酸，在常温下放置5 min，加溶剂稀释至刻度，摇匀，过滤，收集续滤液，即可得到该样品。

碱性降解供试品溶液的配制：取奥美拉唑碳酸氢钠干混悬剂1袋，精确称量出相应的含量（约相当于奥美拉唑10 mg），置于50 mL的容量瓶中，加入30 mL的溶剂使其溶解，再加入5.0 mol/L的氢氧化钠溶液1 mL，放置4 h，再用5.0 mol/L的盐酸调整pH值，后将其加入混合液中混合，稀释至刻度线，摇匀，过滤，收集续滤液，即可得到碱性降解的样品。

用DAD检测器将以上各组分20μL加入HPLC并进行测定。结果表明，各降解试验的物料平衡结果均在90%～110%；主峰纯度良好；按奥美拉唑峰计算，理论塔板数均大于2000，主峰与相邻杂质的分离度均达到要求，本色谱条件对降解产物专属性良好。

2.4空白辅料干扰试验

强制降解试验项下记录的未降解空白辅料及各强制降解试验条件下的空白辅料图谱表明，空白辅料有香兰素峰，空白辅料经强酸、强碱、氧化、光照、高温降解后，均不干扰本品有关物质的测定，计算时扣除空白辅料香兰素峰即可。

2.5线性关系试验

杂质对照品线性关系溶液的配制：分别精密移取专属性试验项下杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质H及杂质I定位溶液各0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL，置于同一100 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

杂质G对照品线性关系溶液的配制：精密移取专属性试验项下杂质G定位溶液各0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL，置同一100 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

奥美拉唑线性关系溶液配制：精确称量奥美拉唑工作标准品约10 mg，置于50 mL容量瓶内，加入各种有机试剂至刻度使其溶解混匀，然后精确吸取该溶液0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8 mL，1.0 mL，1.2 mL置于同一100 mL容量瓶内，加入各种溶剂，直至刻度，摇匀，即得。

量取以上各溶液20μL，于液相色谱仪注入，并对色谱图进行记录。由试验结果可知，奥美拉唑在0.05～2.41μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好；杂质A在0.03～1.27μg/ mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好；杂质B在0.03～ 1.33μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好；杂质C在0.05～1.25μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好；杂质D在0.05～1.28μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好；杂质E在0.03～1.27μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好；杂质G在0.05～1.25μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好；杂质H在0.04～1.31μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好；杂质I在0.03～1.31μg/mL浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好。

2.6中间精密度试验

选择同一批号测试品，2名分析人员在2台高效液相色谱仪上分别按有关物质分析方法进行检测。供试品中各已知杂质、其他单个杂质及总杂质测定结果的RSD均小于10.0%，方法的中间精密度良好。

2.7溶液稳定性试验

溶液的配制：准确称量被检样品10 mg（对应奥美拉唑10 mg）于50 mL容量瓶内，加入有机溶剂至刻度使其溶解，摇匀、过滤，即可得到该样品。精确称定1 mL，置于100 mL容量瓶中，加入各种有机溶剂直至刻度，摇匀，即得标准液。

在常温下，分别于0、2、4、6、8 h，精确吸取20μL，并将其加入液相层析器中，用面积归一化法对色谱图进行记录。由试验结果可知，供试品溶液在室温条件下放置8 h，在2 h时开始有降解杂质1出现，在6 h时又有降解杂质2（杂质E）出现，这表明奥美拉唑溶液稳定性差，应现配现用。对照溶液在室温条件放置8 h，主峰峰面积的RSD%小于2.0%，这表明对照溶液的溶液稳定性良好。

2.8准确度试验

供试品溶液配制：选择本品，对其进行精确称取（对应奥美拉唑10 mg），然后置于50 mL容量瓶中，加溶剂将其溶解稀释到刻度，摇匀后滤过，即得。

80%准确度溶液的配制：将精密度试验项下杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质H、杂质I贮备溶液各0.8 mL，杂质G贮备溶液1.6 mL，置于同一100 mL容量瓶中。

100%准确度溶液的配制：将精密度试验项下杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质H、杂质I贮备溶液各1.0 mL，杂质G贮备溶液2.0 mL，置于同一100 mL容量瓶中。

120%准确度溶液的配制：将精密度试验项下杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质H、杂质I贮备溶液各1.2 mL，杂质G贮备溶液2.4 mL，置于同一100 mL容量瓶中。

各取供试品一袋（对应奥美拉唑20 mg）置于上述容量瓶中，加溶剂溶解稀释到刻度，并摇匀后滤过，即得。每个浓度同法配制3份，现配现进。

以上溶液精确吸取20μL，并将其加入液相层析器中，用面积归一化法对色谱图进行记录。由试验结果可知，奥美拉唑有关物质检查杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质G、杂质H及杂质I的回收率均在80%～120%内，表明方法准确度良好。

2.9耐用性试验

分别在调节流动相中有机相比值改变±5%、检测波长改变±5 nm、流动相pH数值改变±0.4、柱温改变±5℃的条件下，考察变化前后系统适用性及供试品杂质检出情况。

由试验结果可知，在柱温、流动相比例20%、检测波长275 nm、流动相pH=7.2的条件下，对本品有关物质检查结果几乎无影响；在流动相比例30%条件下，杂质A和杂质I与样品中辅料香兰素出峰位置重合，辅料干扰杂质的检验；在流动相pH=8.0条件下，杂质A与杂质I重合，无法有效检验；在检验波长285 nm条件下，杂质A峰面积变化较大。以上结果说明，本方法色谱条件耐用性较差，在流动相配制过程中，应严格把控流动相A的pH值，并确保在正确的色谱条件下对样品进行检测。

3确定的方法

精确称量本品（对应奥美拉唑10 mg）于50 mL容量瓶中，加入有机溶剂，用超声波将其溶出，并将其稀释到刻度，然后摇动，过滤，取出续滤后，即得。在供试品溶液色谱图上出现杂质峰时，用修正后的方法求出杂质C，奥美拉唑磺酰基和杂质E的峰面积，使其不超过控制液的主峰面积0.5倍（0.5%）。结果表明：H峰面积不能超过控制液的最大峰的0.5倍（0.5%）；其他各杂质元素的峰面积均不能超过标准溶液的0.2倍（0.2%）；各种杂质的总和也不能超过1.0%。