杜鹃属植物内生真菌的分离及对赤拟谷盗和马铃薯腐烂茎线虫的防治作用

王旭东，李秋月，王佳丽，姬 颖，马晓倩，李 媛，梁俊玉

（西北师范大学生命科学学院，兰州 730070）

目前，中药材种植和仓储过程中出现的病虫害问题，使得中药材的药用价值和商品价值大幅降低甚至丧失[1]。赤拟谷盗Triboliumcastaneum是中药材储存中发现的主要害虫类群，其成虫身上的腺体能分泌含有致癌物质的臭液，导致产品结块、变色、发臭和腐败，造成严重的经济损失[2]。马铃薯腐烂茎线虫Ditylenchusdestructor作为常见的植物寄生线虫，寄主广泛，可掠夺寄主营养，并造成机械损伤，是造成当归麻口病的重要病原物之一，为害当归生长周期，造成当归减产，已成为制约当归种植业发展的首要病害[3,4]。当前针对赤拟谷盗多采用拟除虫菊酯类农药杀虫剂和磷化氢、溴甲烷熏蒸剂等化学药剂进行防治[5,6]，针对马铃薯腐烂茎线虫主要是利用卤代烃类、有机磷类、氨基甲酸酯类等化学药剂对线虫进行防治[7]。但化学药剂的长期使用易引起人畜中毒、农药残留污染环境等问题[8]，因此开发环保、高效的新型杀虫药物，对中药材种植及仓储害虫的绿色防控具有重要意义。

自Strobel 等[9]从短叶红豆杉的内生真菌Taxomycesandreanae中得到紫杉醇以来，植物内生真菌迅速被国内外研究者关注，成为研究热点。植物内生真菌种类丰富，可代谢产生结构多样和活性丰富的天然产物，与宿主植物具有相同或相似的生物活性，易于分离纯化和培养，并可大量发酵生产，可以很好地发挥植物源杀虫剂的优势。本试验选取的千里香杜鹃Rhododendronthymifolium、头花杜鹃Rhododendron capitatum、烈香杜鹃Rhododendronanthopogonoide、陇蜀杜鹃Rhododendronprzewalskii具有抗炎镇痛、免疫、杀虫等多方面的药理活性。千里香杜鹃挥发油对赤拟谷盗和嗜卷书虱Liposcelisbostrychophila具有一定的触杀作用，其植物活性成分具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性[10]。头花杜鹃对烟草甲Lasioderma serricorne、赤拟谷盗和嗜卷书虱也表现出一定的毒杀作用[11]。烈香杜鹃资源丰富，具有清热解毒、健胃消肿的功效，是藏药达理的主要成分之一[12,13]。目前从烈香杜鹃茎和叶的醋酸乙酯部位分离出多种类型的化合物，如三萜类、黄铜类，香豆素类等[14,15]。此外，烈香杜鹃挥发油也具有很高的药用价值，对草原毛虫Gynaephoramenyuanensis表现出较强的毒杀和抑制活性[16]。孙景云[17]从陇蜀杜鹃中分离得到18 株内生真菌，对抗单胺氧化酶、抗乙酰胆碱酯酶均有不同程度的活性作用，并对朱砂叶螨Tetranychuscinnabarinus表现出良好的毒杀作用，此外，还能够抑制辣椒疫霉菌PhytophthoracapsiciLeonian 的生长。目前关于杜鹃属植物内生真菌对赤拟谷盗和马铃薯腐烂茎线虫的防治作用报道较少，所以本试验对四种杜鹃属植物内生真菌进行分离，并研究其粗提物对赤拟谷盗的触杀和拒食作用以及对马铃薯腐烂茎线虫的毒杀作用，初步筛选出具有良好抗虫活性的菌株，对其进行形态学与分子生物学鉴定，为杜鹃属植物内生真菌防治赤拟谷盗和马铃薯腐烂茎线虫以及发展中药材生态种植和绿色仓储进行基础研究。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

千里香杜鹃、头花杜鹃、烈香杜鹃、陇蜀杜鹃植物样品于2021 年6 月采自甘肃省武威市天祝县石门镇，由西北师范大学生命科学学院梁俊玉副教授鉴定。样品自然阴干，存放于西北师范大学生命科学学院中药材质量研究实验室。样品采集信息见表1。

表1 杜鹃属植物样品采集信息Table 1 Sample collection information of Rhododendron

旋转蒸发仪（东京理化器械独资工厂）；隔水式恒温培养箱（上海新诺仪器设备有限公司）；万分之一分析天平（德国，赛多利斯）；超净工作台（ESCO 公司）；立式高压蒸汽灭菌锅（日本Hirayama）；大容量恒温振荡箱（江苏太仓市试验设备厂）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；数显恒温水浴锅（上海博讯实业有限公司）；正己烷、二甲基亚砜、吐温-20（购自烟台市双双化工有限公司）；含灰葡萄孢菌的马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基；96 孔细胞板。

1.2 试虫饲养

赤拟谷盗试虫由西北师范大学生命科学学院中药质量研发及产品开发实验室提供，经西北师范大学生命科学学院梁俊玉副教授鉴定确认。赤拟谷盗饲养于装有面粉与酵母粉（10∶1）的0.5 L 玻璃培养瓶中，纱布封口，置于29 ℃、相对湿度75%±5%的恒温培养箱中进行全黑培养。所选试虫均为羽化后1～2 周的成虫，且不分雌雄。

采用贝尔曼漏斗法从患麻口病的当归中分离得到马铃薯腐烂茎线虫[18]，用0.5%的次氯酸钠对马铃薯腐烂茎线虫悬浮液进行消毒处理，然后离心（2 min，4000 r/min），弃去上层的消毒液，加入无菌水振摇后再离心，弃去无菌水，重复处理3 次，得到无菌的马铃薯腐烂茎线虫悬浮液，然后接到长满灰葡萄孢菌菌落的马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基上，在温度为25 ℃，相对湿度为85%±5%的培养箱中进行暗培养。试虫均为培养15 d 左右的马铃薯腐烂茎线虫。

1.3 内生真菌的分离与纯化

取4 种新鲜植物的枝、叶，无菌水冲洗干净。枝干部分切成0.5 cm3的正方体小块，叶片切成0.5 cm2的小片；然后将其置于75%乙醇中浸泡3 min，无菌水冲洗3 次，0.1% HgCl2溶液浸泡0.5 min，无菌水冲洗3 次，切去边缘材料使植物的截面充分暴露出来，接种于马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基，28 ℃培养箱中倒置培养3～7 d。运用漂洗检验法，将最后一次清洗所得无菌水涂布于马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基，相同条件培养3～7 d，观察该培养基是否有菌落长出，以此验证表面消毒是否彻底；每种供试植物材料进行3 次重复[19]。待长出菌丝后，转接至新的马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基中，逐步纯化，对已经纯化的菌落编号，记录。试验过程均在超净工作台下完成。

1.4 内生真菌粗提物提取

参照孙景云[17]试验方法，无菌条件下将分离所得22 株菌分别接至装有100 mL 马铃薯葡萄糖液体培养基PDB（马铃薯200 g、葡萄糖20 g）的250 mL 锥形瓶中（每种菌培养10 瓶），发酵条件为：接种量10%，起始pH 为自然pH，装液量100 mL，摇床（28 ℃，170 r/min）培养15 d。待培养结束，进行减压抽滤，获得菌液和菌丝体。菌液通过减压蒸馏得到菌液粗提物浸膏，菌丝体经甲醇加热回流提取3 次，每次加入甲醇的量与菌丝体的比例分别为10∶1、8∶1、6∶1，合并3 次的提取液，用旋转蒸发仪减压回收，得到菌丝体甲醇粗提物浸膏。共得到44 个内生真菌粗提物，将所得提取物置于4 ℃冰箱中冷藏备用。

1.5 抗虫活性测定

1.5.1 赤拟谷盗触杀活性测定 参照点触法[20]测定内生真菌粗提物对赤拟谷盗的触杀活性。用丙酮溶解待测内生真菌粗提物，根据预试验配制成浓度为30%、15%、7.5%、3.75%、1.875%的待测溶液，将盛有试虫的培养皿置于冰袋，每次10 头健全的且大小一致的成虫（不分雌雄），待试虫不再活动，用移液器移取0.5 μL 待测样品的丙酮稀释液于试虫的前胸背板上，然后每10 头试虫转移至半径为1 cm，高为5.5 cm玻璃瓶中，置于温度28～30 ℃，相对湿度75%±5%的培养箱中培养。丙酮为阴性对照；除虫菊酯为阳性对照，活性数据来源于参考文献，其活性测定方法与本试验一致。每个浓度重复5 次。24 h 后记录死亡/存活情况。采用IBM SPSS V26.0 统计软件计算半数致死剂量LD50。

1.5.2 赤拟谷盗拒食活性测定 赤拟谷盗拒食活性测定参照文献[21]并进行改进，取内生真菌粗提物待测样品加80%乙醇溶解，根据预试验配制成2 个浓度梯度（2 mg/mL、1 mg/mL），定容至2 mL，再分别加入0.8 g 面粉，搅拌均匀，配制成不同浓度的粗提物待测样品面粉混浊液，然后吸取200 μL 面粉混浊液至干净培养皿上，置于通风橱中过夜，再置于温度29～30 ℃，相对湿度75%±5%的培养箱中平衡水分后形成拒食活性测试面饼。每个计数瓶中放入1 个拒食活性测试面饼及20 只饥饿24 h 的试虫（依次称量空瓶重量、加入面饼重量以及放入20 头试虫后的总重量），最后将计数瓶置于恒温培养箱中培养。3 d 后，依次称取总瓶重量、挑出试虫后的重量及空瓶重量，最后计算试虫取食量，处理组每个浓度重复5 次。以等体积的80%乙醇与等量面粉混匀作空白对照；以昆虫拒食剂川楝素为阳性对照，活性数据来源于参考文献，其活性测定方法与本试验一致。

拒食率按如下公式计算：拒食率（FDI）（%）＝（C―T）/T×100，C＝对照组面饼消耗量；T＝处理组面饼消耗量。

1.5.3 马铃薯腐烂茎线虫抗虫活性测定 采用药液浸泡法[22]，将待测内生真菌粗提物用5%吐温-20、3% DMSO 和蒸馏水配置成一定浓度的溶液备用，通过预试验配制成浓度为2%、1%、0.5%、0.25%、0.125%的待测溶液。96 孔板中注入10 μL 线虫悬浮液（每10 μL 线虫悬浮液，约有80～120 只活性良好的线虫）及90 μL 不同浓度的样品溶液，共计100 μL，混合均匀后置于25 ℃，湿度为85%±5%的培养箱中。每组处理重复5 次。以等体积的5%吐温-20 和3% DMSO 为阴性对照，以克百威为阳性对照，活性数据来源于参考文献，其活性测定方法与本试验一致。24 h 后吸去上层药液，加入100 μL 蒸馏水，处理24 h 后检查各处理组的线虫死亡/存活情况，采用IBM SPSS V26.0 统计软件计算半致死浓度LC50。

1.6 内生真菌的形态学鉴定

采用点植法将菌株接种至PDA 培养基上[23]，28 ℃恒温倒置培养3～5 d，待菌株生长为单菌落，观察菌株的菌落特征，并做相应记录。显微观察：在洁净载玻片上滴加1～2 滴乳酸酚棉兰染色液，用解剖针从菌落边缘轻轻挑取少量带有孢子的菌丝置于染色液中，加盖洁净的盖玻片，轻轻按压排除气泡，制成装片观察。通过光学显微镜观察菌丝形态及产孢结构。

1.7 内生真菌的分子生物学鉴定

采用内部转录间隔区（Internal Transcribed Spacer，ITS）测序的方法。刮取适量待测菌株的新鲜菌丝于液氮中研磨，采用改良CTAB 法[24,25]提取其基因组DNA。将提取得到的DNA 样本送至杨凌天润奥科生物科技有限公司进行后期纯化和测序工作，其中测序引物为ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′）和ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）。依据测序结果，在NCBI 数据库对测序所得的ITS 序列进行BLSAT 比对，在MEGA 7.0 软件中构建系统发育树，确定内生真菌的分类地位。

2 结果与分析

2.1 菌株的分离

从千里香杜鹃、头花杜鹃、烈香杜鹃、陇蜀杜鹃4 种杜鹃属植物的枝和叶中共分离得到22 株内生真菌，其中千里香杜鹃中分离获得 5 株内生真菌、头花杜鹃中分离得到7 株内生真菌、烈香杜鹃中分离得到3 株内生真菌、陇蜀杜鹃中分离得到7 株内生真菌。全部保存在实验室4 ℃冰箱中，结果见表2。根据分离过程，我们发现4 种杜鹃属植物中，叶片相对较大的陇蜀杜鹃和头花杜鹃的叶片部位内生真菌较多，更易分离，尤其叶片较大的陇蜀杜鹃，在其叶片中分离出5 种内生真菌。然而叶片相对较小的千里香杜鹃和烈香杜鹃的叶片部位的内生真菌较少，而在枝干部位组织中分离得到较多的内生真菌。

表2 四种植物中分离得到的内生真菌及其编号Table 2 Endophytic fungi isolated from four plants and their numbers

2.2 内生真菌粗提物对赤拟谷盗触杀活性测试

采用点触法，用分离得到的22 株内生真菌粗提物对赤拟谷盗进行触杀活性测定，结果见表3，多数菌株的菌丝体粗提物触杀活性较菌液粗提物更好，其中LS-Y-2 菌丝体粗提物对赤拟谷盗的触杀活性较好（LD50＝69.31 μg/adult)，其次为TH-Z-1 菌丝体粗提物（LD50＝75.95 μg/adult）和QLX-Z-1 菌丝体粗提物（LD50＝80.98 μg/adult）。其余粗提物对赤拟谷盗触杀活性较弱。

表3 内生真菌粗提物对赤拟谷盗的触杀活性Table 3 Contact activity of crude extracts of endophytic fungi against Tribolium castaneum

2.3 内生真菌粗提物对赤拟谷盗拒食活性测试

用分离得到的22 株内生真菌粗提物对赤拟谷盗进行拒食活性测定，结果见表4，当粗提物质量浓度为2 mg/mL 时，LS-Y-2 和TH-Y-1 菌液粗提物拒食率在80%以上，与阳性对照川楝素活性相近，LS-Y-4、TH-Z-1和QLX-Z-2 菌液粗提物拒食率均达70%以上，当质量浓度为1 mg/mL 时，LS-Y-2 菌液粗提物的拒食率为70.71%。其他粗提物拒食活性较低，与触杀活性不同的是大部分菌液粗提物对赤拟谷盗所表现出的拒食活性较好。

表4 内生真菌粗提物对赤拟谷盗拒食活性Table 4 Antifeedant activity of crude extracts of endophytic fungi against Tribolium castaneum

2.4 内生真菌粗提物杀马铃薯腐烂茎线虫活性

采用药液浸泡法，用分离得到的22 株内生真菌粗提物对马铃薯腐烂茎线虫进行杀虫活性测定，结果见表5，与粗提物对赤拟谷盗触杀活性相比，粗提物对马铃薯腐烂茎线虫的杀虫活性更加显著；共有33 种粗提物对马铃薯腐烂茎线虫表现出良好的毒杀活性，其中LS-Y-2、TH-Z-1、TH-Y-1、TH-Y-1、QLX-Z-1 菌液粗提物和LS-Y-4 菌丝体粗提物杀线虫活性较显著，LC50分别为0.06、0.07、0.11、0.16、0.18 和0.19 mg/mL；LS-Y-2 和TH-Z-1 菌液粗提物对马铃薯腐烂茎线虫的毒杀活性与阳性对照克百威活性接近，这两种粗提物中可能含有对马铃薯腐烂茎线虫具有良好毒杀作用的化合物，也有可能是多种化合物相互作用产生协同效应，导致粗提物活性显著，可进一步对其化学成分进行研究。

表5 内生真菌粗提物对马铃薯腐烂茎线虫的杀虫活性Table 5 Nematocidal activity of crude extracts of endophytic fungi against Ditylenchus destructor

2.5 菌株形态学及分子生物学鉴定

通过以上抗虫活性测定，筛选出TH-Z-1、LS-Y-2、LS-Y-4 菌株为研究对象，鉴定其种属分类。

2.5.1 形态学鉴定 对TH-Z-1、LS-Y-2、LS-Y-4 菌株进行了初步形态学鉴定，其中TH-Z-1 菌落为白色，菌丝呈短茸状，基质为无色，边缘较薄而锐，镜检发现孢子呈圆型，菌丝具锁状联合，与栓菌属Trametes真菌形态特征相似；LS-Y-2 菌落形态为暗灰色絮状，基质为深褐色；LS-Y-4 菌落形态特征为棕色絮状，基质为深棕色，与链格孢属Alternaria真菌形态特征相似。镜检发现LS-Y-2 与LS-Y-4 的孢子均呈卵型，菌丝长，具有分支且弯曲。

2.5.2 分子生物学鉴定 菌株TH-Z-1，LS-Y-2 和LS-Y-4 的测序结果如下：

LS-Y-2 的ITS 序列：TTCCGTAGGGGGTGCCTGCGGAGGGATCATTACACAAATATGAAGGCGGG CTGGAACCTCTCGGGGTTACAGCCTTGCTGAATTATTCACCCTTGTCTTTTGCGTACTTCTTGTTTCCT TGGTGGGTTCGCCCACCACTAGGACAAACATAAACCTTTTGTAATTGCAATCAGCGTCAGTAACAAA TTAATAATTACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGC GATAAGTAGTGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTTTGG TATTCCAAAGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTGTACCCTCAAGCTTTGCTTGGTGTTGGGCGTCTT GTCTCTAGCTTTGCTGGAGACTCGCCTTAAAGTAATTGGCAGCCGGCCTACTGGTTTCGGAGCGCAG CACAAGTCGCACTCTCTATCAGCAAAGGTCTAGCATCCATTAAGCCTTTTTTTCAACTTTTGACCTCG GATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAAGGGGGGAGGAA

LS-Y-4 的ITS 序列：CCCCTTTTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATCCCTACCTGATCCGAGGTCA AAAGTTGAAAAAAAGGCTTAATGGATGCTAGACCTTTGCTGATAGAGAGTGCGACTTGTGCTGCGCT CCGAAACCAGTAGGCCGGCTGCCAATTACTTTAAGGCGAGTCTCCAGCAAAGCTAGAGACAAGACG CCCAACACCAAGCAAAGCTTGAGGGTACAAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCTTTGGAATACCAA AGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACACTACTTATCGCAT TTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTGTAATTATTAATTTGT TACTGACGCTGATTGCAATTACAAAAGGTTTATGTTTGTCCTAGTGGTGGGCGAACCCACCAAGGAA ACAAGAAGTACGCAAAAGACAAGGGTGAATAATTCAGCAAGGCTGTAACCCCGAGAGGTTCCAGCC CGCCTTCATATTTGTGTAATGATCCCTCCGCAGCCCCC

TH-Z-1 的ITS 序列：GGGGCTGCGGAAGGATCATTAACGAGTTTTGAAACGGGTTGTTGCTGGCCT TCCGAGGCATGTGCACGCCCTGCTCATCCACTCTACACCTGTGCACTTACTGTAGGTTGGCGTGGGTT TCTAGCCTCCGGGCTGGGAGCATTCTGCCGGCCTATGTACACTACAAACTCTAAAGTATCAGAATGT AAACGCGTCTAACGCATCTTAATACAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGA ACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCA CCTTGCGCTCCTTGGTATTCCGAGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCATGAAATTCTCAACCCATAAGTC CTTGTGATCTATGGGCTTGGATTTGGAGGCTTGCTGGCCCTAGCGGTCGGCTCCTCTTGAATGCATTA GCTTGATTCCGTGCGGATCGGCTCTCAGTGTGATAATTGTCTACGCTGTGACCGTGAAGCGTTTTGGC AAGCTCCTAACCGTCCATTAGGACAATCTTTCAACATCTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCT GAACTTAAGCATATCAAAAAGCGGGAGGA

将菌株TH-Z-1，LS-Y-2 和LS-Y-4 的测序结果在GeneBank 中进行BLAST 同源性比较，选取13 株亲缘关系95%以上的栓菌属真菌菌株，15 株亲缘关系95%以上链格孢属真菌，以及2 株亲缘关系较远的菌株，分别用NJ 法构建系统进化树，结果见图1 和图2。由图1 可知TH-Z-1 与已报道的栓菌属真菌聚为一个分支，亲缘关系最近，在分类地位上可将菌株TH-Z-1 归属为栓菌属；由图2 可知，LS-Y-2 和LS-Y-4与A.longipes，A.brassicicola和A.alternata等多株链格孢属真菌聚为一支，这些菌株具有较高的相似性，亲缘关系最近，在分类地位上菌株LS-Y-2 和LS-Y-4 归为链格孢属。结合形态学鉴定，菌株LS-Y-2 及LS-Y-4被鉴定为链格孢属真菌，TH-Z-1 被鉴定为栓菌属真菌。

图1 菌株TH-Z-1 N-J 系统发育树Fig.1 Neighbor-Joining (N-J) phylogenetic tree of strain TH-Z-1

图2 菌株LS-Y-2 和LS-Y-4 N-J 系统发育树Fig.2 Neighbor-Joining (N-J) phylogenetic tree of strain LS-Y-2 and LS-Y-4

3 讨论

本研究中从千里香杜鹃、头花杜鹃、烈香杜鹃和陇蜀杜鹃4 种杜鹃属植物中共分离得到22 株内生真菌，将其粗提物进行抗虫活性测定，发现LS-Y-2 菌液粗提物、TH-Z-1 菌液粗提物和LS-Y-4 菌丝体粗提物对马铃薯腐烂茎线虫具有较好的杀虫活性，其LC50分别为0.06、0.07、0.18 mg/mL；LS-Y-2 菌液粗提物在质量浓度为2 mg/mL 时，对赤拟谷盗表现出明显拒食活性，其拒食率为84.28%，与阳性对照具有相近拒食活性。为了更好地鉴定活性菌株和为之后的具有有效抗虫活性的化合物分离鉴定，通过形态学和分子生物学手段对菌株LS-Y-2、LS-Y-4 和TH-Z-1 进行了鉴定，结果显示可将菌株LS-Y-2 和LS-Y-4 归为链格孢属，但两种菌之间存在一定的形态差异，更确切地鉴定还需要进一步的研究；菌株TH-Z-1 与栓菌属真菌菌种具有较高的相似性，可将其归为栓菌属。因此，本试验结果对4 种杜鹃属内生真菌的开发和对赤拟谷盗和马铃薯腐烂茎线虫的防治提供了一定的试验依据。

链格孢属真菌，是植物内生真菌中最常见的一个属，相关的研究报道较多。苗智等[29]报道了链格孢属真菌可产生包括生物碱等多种化合物的次级代谢产物，从中分离得到的生物碱类化合物有次黄嘌呤、腺嘌呤、尿囊素、胸腺嘧啶脱氧核苷和尿嘧啶核苷等，其中尿囊素具有一定的抑菌和抗氧化活性，腺嘌呤具有一定的抗氧化活性；Singh 等[30]研究发现链格孢属真菌对乙酰胆碱酯酶具有一定的抑制活性，并且对斜纹夜蛾幼虫有一定毒杀活性。而乙酰胆碱酯酶作为昆虫体内生物神经传导中的关键性酶，为有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的重要靶标[31]。所以，本研究中的链格孢属真菌代谢产物对赤拟谷盗的抗虫活性可能是对赤拟谷盗体内的乙酰胆碱酯酶产生了影响，具体的抗虫机制还需后期进一步验证。此外，还有关于链格孢菌属抗虫活性方面的报道，证明其发酵液的萃取物对小菜蛾具有显著的毒杀活性（LC50＝6.136 mg/mL），并且对粘虫具有一定的拒食活性[32]。栓菌属在分类学上属于真菌门担子菌亚门非褶菌目多孔菌科，属内许多菌具有抑制肿瘤、镇痛、清热除湿、消炎解毒功效，可治疗痈疽疮疖、咽喉肿痛、跌打损伤、风湿诸症等[33,34]。在已有的研究报道中，桑志高等[35]从栓菌属真菌的发酵液和菌丝体中分离并鉴定出6 个化合物，分别有isodrimenediol diacetatei、sodrimenediol 2-acetate、脑苷脂D、麦角甾醇、过氧化麦角甾醇和啤酒甾醇。目前，栓菌属在抗虫活性方面的研究较少，发挥抗虫活性的化合物以及具体的抗虫机理还需要进行进一步探究。

植物内生真菌在新型化合物研究方面存在巨大潜力，并且在中药材害虫的绿色防治方面具有一定的研究价值，通过本研究，发现了杜鹃属植物中的多种内生真菌，而且在不同植物中的内生真菌数量差异明显，同种植物中不同组织部位分离结果也差异显著，充分体现了内生真菌的普遍性和多样性，也对赤拟谷盗和马铃薯腐烂茎线虫表现出一定防治作用，具有一定开发利用的潜力。