创新柑橘黄龙病检测技术，助推柑橘产业持续健康发展

杨碧垚，陈金福

（宾川县食品药品检验检测院 云南宾川 671600）

柑橘产业是宾川县具有300 多年种植历史的传统产业，经多年实践证明，是促进宾川县农业增效、农民增收具有强大支撑和推动作用的优势、特色、骨干产业之一。1995 年，宾川脐橙在中国第二届农业博览会上荣获银质奖；2007 年以来，又先后荣获“中国柑橘之乡”“全国兴果富农果业发展百强优质示范县”“中国优质柑橘基地”“中国十大名橘”等荣誉。“十四五”期间，县委县政府提出了突出葡萄、柑橘“两果”优势，打造世界一流“绿色食品品牌”“建设世界一流水果之乡”的发展定位，确立了到2025 年柑橘种植面积达12 万亩的发展目标，柑橘产业迎来了又一次重大发展机遇。目前，柑橘黄龙病仍然是制约全县柑橘产业发展的主要因素，要重振宾川县柑橘产业，最重要的就是解决柑橘黄龙病的危害问题。因此，强化柑橘黄龙病检验检测，提升病虫害监测能力，充分发挥雷达预警作用，加强病虫害防控，才能更好地促进全县柑橘产业持续健康发展。

1 情况介绍

柑橘黄龙病，是由一种限于韧皮部内寄生的革兰氏阴性细菌引起的，能够侵染包括柑橘属、枳属、金柑属和九里香等多种芸香科植物的世界柑橘生产上的毁灭性病害。病原物为一种类革兰氏阴性细菌，属韧皮杆菌，菌体多数呈圆形或者椭圆形，少数呈不规则形，大小为（20～600）纳米×（170～1600）纳米，厚17～33 纳米，平均25 纳米，由3 层膜组成。

2017 年，宾川县食品药品检验检测院与云南农业大学植物保护学院合作，开展柑橘黄龙病生物防控试验，并先后两次选派技术人员到云南农业大学植保学院学习培训，重点学习柑橘黄龙病检测方法、检测原理和实验操作能力。充分利用宾川分中心实验室优势，开展柑橘叶片、果实、根茎、土壤等柑橘黄龙病检测技术攻关，先后建立柑橘黄龙病病原菌实时荧光PCR 和普通PCR 检测方法，其中实时荧光PCR 检测灵敏度高于普通PCR 近100 倍。2018年，实验室顺利通过两种检测方法的现场评审考核，取得了柑橘黄龙病检测资质，为全县柑橘黄龙病精准防控提供了技术支撑，截至目前，累计完成柑橘黄龙病检测1000 余批次。

2 实施方案

2.1 考察学习

为了解和掌握柑橘栽培管理技术、柑橘黄龙病生物防控、检验检测技术等，邀请云南农业大学植保学院何月秋教授在州城镇宾居华侨社区4 个果园开展柑橘黄龙病生物防控试验。同时，宾川县食品药品检验检测院选派3 名技术骨干到云南农业大学、大理州质量技术监督综合检测中心等地进行培训学习（如图1 所示）。

图1 培训学习

2.2 建立柑橘黄龙病检验检测体系

2.2.1 加强实验室建设按《柑橘黄龙病菌实时荧光PCR 检测方法》建立了柑橘黄龙病病原菌检测实验室，配备三通道荧光定量PCR 仪、梯度PCR 仪、凝胶成像系统、电泳槽、超声波清洗机等必要的仪器设备，达到快速定性分析与定量分析的实验室条件要求，为开展柑橘黄龙病检测奠定了基础（如图2 所示）。

图2 检测相关设备

2.2.2 加强人才培养柑橘黄龙病实时荧光定量PCR 检测技术虽然不是不可企及的高尖端技术，但诸如样本DNA 的提取、DNA 扩增、PCR 产物的电泳、凝胶成像分析、荧光定量PCR 结果解析等都需要较专业的技术人员进行操作。通过“请进来”和“送出去”的方式，邀请技术专家和学者到宾川县实地培训，又将宾川县检验技术人才派送到大学或科研机构进行强化培养，快速掌握检验技术。进行多形式和多层次培训，为各项实验顺利开展提供了人才保障（如图3 所示）。

图3 人才交流

2.2.3 取得资质根据现有实验室环境条件、主要设备和人员专业水平，通过了GB/T 28062—2011《柑橘黄龙病菌实时荧光PCR 检测方法》省级资质认定考核组的考核评审，是目前全省唯一一家取得法定资质的柑橘黄龙病检测机构[1]。

2.2.4 创建职工创新工作室为了进一步提升柑橘黄龙病检测能力，对宾川县柑橘黄龙病防控提出指导性意见，邀请云南农业大学何月秋教授在宾川县设立专家工作站，将其研究柑橘黄龙病丰富的经验及丰硕的成果应用到一线，切实促进宾川县解决柑橘黄龙病危害严重的问题，保障柑橘产业健康持续发展，目前已成功创建职工创新工作室，专家工作站正在申报中。

2.3 加强柑橘苗木检验

根据《宾川县柑橘种苗管理办法（试行）》要求，联合县农业农村局、县市场监管局、县林草局对宾川县境内繁育的柑橘种苗和调运入宾川县的外来柑橘苗木进行风险监测，抽样检测是否携带柑橘黄龙病菌，为加强柑橘种苗管理提供有力的技术支持（如图4 所示）。

图4 抽样检测

2.4 开展植株抽样检测

在全县各乡镇企业、合作社、农户柑橘种植基地进行监测，对疑似柑橘黄龙病病株进行抽样检测，确定是否携带柑橘黄龙病菌并及时反馈，为柑橘黄龙病精准防控提供技术支持。目前山区3 个乡镇设1个监测点，坝区7 个镇设9 个监测点，每个监测点每个季度抽检样品数量不低于20 份。

3 案例思考

3.1 开展柑橘黄龙病检测工作是种苗管理的需要

多年来，宾川县柑橘种苗生产经营一直存在不规范的情况。传统育苗方式如随意育苗、露地育苗以及散户育苗等占主导地位，这些方式规模较小，条件简陋，组织化程度低，技术含量不高，导致种苗质量差，容易感染病虫害。此外，随意引种调苗的现象也比较突出，而市场监管严重滞后，进一步导致宾川县种苗质量得不到有效保障。为了解决这一问题，需要建立柑橘黄龙病检测机制，即引进快速、便捷的病虫害检测手段。通过使用这些先进技术，在柑橘苗的引种和本地培育过程中进行快速检测，如对调入的柑橘苗和本地培育的柑橘苗进行严格的检测和筛选，能及时发现携带病菌或虫害的苗木，并采取适当的防治措施，保障种苗的质量和健康。同时，这种柑橘黄龙病检测模式还能进一步解放劳动力，强化技术人员、管理人员对柑橘树体生长的把控，如更加全面地病虫害管理、进行有效的灌溉和施肥管理等。此外良好的检测技术，还能预防病害传播，柑橘黄龙病主要通过木虱传播，具有很强的传染性。如果不及时检查，可能会引起病害的扩散。因此，在引种或收购种苗时需要进行柑橘黄龙病的检查[2]。

3.2 开展柑橘黄龙病检测工作是柑橘黄龙病科学防控的需要

柑橘黄龙病是一种由亚洲韧皮杆菌引起的病害，对柑橘类作物造成严重危害。为了科学防控这种病害，对柑橘黄龙病进行检测是必不可少的。首先，对柑橘黄龙病检测可以及时发现和确认病害。此病害早期症状难以察觉，通过检测可以准确诊断，避免延误防治时机。及早发现并采取相应的防治措施，可以最大程度地减少疫情扩散的风险，保护柑橘类作物的健康生长；其次，柑橘黄龙病检测有助于科学评估病害的危害程度。通过检测，可以了解病害的发展状况以及对产量和品质的影响程度，从而为精确制定防治措施提供依据。准确评估病害的危害程度，可以更科学地分配资源，提高防治效果；最后，开展柑橘黄龙病检测也有助于病害的监测和预警。通过定期进行检测，可以实时掌握疫情发展态势，及时发现病害的变化趋势。综上，笔者通过开展柑橘叶片、果实、根茎、土壤等黄龙病检测技术攻关的大量试验论证，总结探索出柑橘根部和土壤黄龙病病原菌的检测方法，研究发现：土壤中无柑橘黄龙病病原菌存在，为柑橘黄龙病防控提供了技术支撑[3]。

3.3 开展柑橘黄龙病检测工作是保障产业持续健康发展的需要

首先，宾川县建设了柑橘无病良种苗木繁育基地，提供安全的脱毒苗。然而，要确保基地培育出的苗木全部是安全的，并非易事。因此，在这种情况下，对苗木进行质量抽检显得尤为重要。通过抽检，可以确保苗木的品质和健康状况达到一定标准，进而促进产业的持续健康发展。其次，针对田间的柑橘植株，目前只能依靠观察症状来判断是否为健康植株。然而，在柑橘黄龙病的隐症期，病菌并不容易被察觉，这就使得判断植株是否感染柑橘黄龙病菌变得非常困难。因此，开展柑橘黄龙病的检测工作迫在眉睫。通过使用现代化的检测技术，例如PCR（聚合酶链式反应）等，可以及早发现并鉴定柑橘植株中是否存在黄龙病菌。这不仅有助于及时采取防控措施，还可以减少柑橘产业受到的损失。

4 结束语

通过科技创新，建成柑橘黄龙病检测分子生物实验室，按照国家标准《柑橘黄龙病菌实时荧光PCR 检测方法》（GB/T 28062—2011），采用RTFPCR 技术检测柑橘黄龙病，达到准确定性与定量的检测要求，快速判定柑橘苗木、植株和产品是否感染或携带柑橘黄龙病菌，从而为柑橘黄龙病防控或执法检查提供技术支持，为柑橘产业的健康持续发展保驾护航，切实保障人民群众“舌尖上的安全”。