共刺激分子B7-H3在乳腺癌组织中的表达及临床意义

王利瑞,徐纪海,高 庆,张维颉,孟 谦,管海方,王维康,张俊宇,马春玲*

(1山东医学高等专科学校,山东 临沂 276000;2临沂市妇幼保健院)

据2020年全球癌症数据统计,乳腺癌位居癌症发病率首位,亦为女性最常见的癌症[1]。虽然常规诊疗体系已日趋成熟,但仍有部分患者因肿瘤异质性、耐药性等问题,预后较差。免疫疗法的出现为癌症治疗开辟了新方向,免疫检查点分子因其在免疫过程中发挥的重要作用成为近年来肿瘤免疫学研究的热点之一。B7-H3作为B7家族重要的免疫检查点分子,其高表达参与了多种恶性肿瘤的发展过程,如增殖、侵袭和迁移等,有望成为肿瘤治疗的新靶点[2]。本研究通过检测B7-H3蛋白在乳腺癌及乳腺良性病变组织中的表达,分析其表达水平与临床参数的关系,探讨其在乳腺癌的发生、进展中的生物学作用。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性收集2017年6月—2022年12月就诊于临沂市妇幼保健院行乳腺癌手术的38例患者临床资料(病例组)。纳入标准:均经病理诊断为乳腺恶性肿瘤;均为女性;单侧;术前均未行放、化疗及其它治疗。排除标准:伴有其他恶性肿瘤或相关病史;伴其他乳腺疾病。38例患者中,年龄28～74岁,平均(50.82±11.99)岁;乳腺浸润性癌25例,乳腺原位癌13例。另外同时收集28例乳腺良性病变患者临床资料(对照组),年龄17～56岁,平均(34.18±10.89)岁;均经术后病理确诊。

1.2方法

1.2.1材料 免疫组化所用抗体:一抗为B7-H3多克隆抗体、二抗为HRP标记山羊抗兔通用型二抗(Boster Biological Technology)。免疫组化常用试剂:PBS缓冲液粉剂、柠檬酸抗原修复液、苏木素体细胞快速染色液、封片用中性树胶、多聚赖氨酸玻片(福州迈新),BSA、DAB显色剂、3%H2O2液,1%盐酸-酒精分化液。

1.2.2标本制备 于65℃烤箱中烘片1 h,二甲苯有序脱蜡,梯度酒精水化,热修复抗原,3%H2O2封闭,滴加3%BSA封闭内源性过氧化物酶,滴加一抗(1∶200)并4℃过夜孵育,PBS冲洗,加入生物素标记山羊抗兔IgG,37℃孵育30 min,PBS冲洗,滴加SABC,37℃孵育15 min,PBS冲洗,DAB显色,据镜下颜色变化适时终止反应,苏木素染色6 min,分化,反蓝,脱水,封片。

1.3指标评定 使用高倍镜(400×)观察记录切片的免疫组化染色强度、染色范围,评分、取均值。判定标准:出现黄至棕褐色颗粒为阳性显色,B7-H3定位于胞浆、胞膜,半定量结果判读:评分=染色强度×染色范围。染色强度由浅入深依次为:0分,无染色;1分,淡黄色;2分,棕黄色;3分,棕褐色。染色范围:无肿瘤细胞着色(-),1%～30%肿瘤细胞着色(+),30%～60%肿瘤细胞着色(++),>60%肿瘤细胞着色(+++);分别对应0、1、2、3分,评分范围0～9分,<3分为阴性表达,≥3分为阳性表达组(<6分为低表达,≥6分为高表达)。

2 结果

2.1B7-H3在乳腺组织中的表达 病例组:38例患者中,B7-H3阳性表达31例,阴性7例,阳性表达率为81.58%;主要表达在细胞浆、胞膜或二者同时表达,呈弥漫性,见封二图1、2。对照组:28例患者中,B7-H3阳性表达7例,阴性21例,阳性表达率为25%,见封二图3。两组阳性表达率比较有统计学意义(χ2=21.13,P<0.01)。

2.2病例组B7-H3的表达与相关指标 B7-H3的表达与不同病理类型有关,与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结有无转移以及ER、PR、Her-2、Ki67、P53的表达无相关性。见表1。

表1 病例组B7H3的表达与相关指标

3 讨论

大量研究指出,B7-H3 mRNA在人体组织广泛表达,但得益于严格的转录调控机制,B7-H3蛋白在正常组织表达较少,高表达见于多种恶性肿瘤组织。有研究提示,B7-H3在原发肿瘤中的表达与肿瘤大小、淋巴及血管侵犯显著相关[3]。本研究利用免疫组化检测了B7-H3在乳腺癌组织及乳腺良性病变组织中的表达情况,结果表明:B7-H3在乳腺癌组织的表达显著高于乳腺良性病变组织,且在乳腺癌肿瘤细胞的细胞质和细胞膜中广泛表达。提示B7-H3的表达情况与乳腺癌的发生有密切关系,进一步印证了B7-H3在肿瘤免疫中的负性调节作用。此外,本研究结果显示:B7-H3在浸润性乳腺癌的表达强度高于原位癌。B7-H3在胃癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、肝癌、子宫癌、肾癌等组织中均存在过表达,且敲低前列腺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、大肠癌细胞和黑素瘤细胞中B7-H3的表达可显著抑制癌细胞迁移和侵袭[4]。数据库结果示:B7-H3mRNA在乳腺癌中高表达,并与患者较差的生存期相关,沉默乳腺癌细中的B7-H3可抑制上皮间质转化,抑制其增殖、迁移、侵袭的能力[5],愈加凸显了B7-H3在乳腺癌中的作用。本研究将B7-H3的表达与相关参数如肿瘤直径、淋巴结转移情况、Her-2、Ki67、P53等进行相关性分析,虽然结果均显示无统计学意义,但统计学相关性受样本量等多因素影响,且B7-H3已被发现介导多种信号通路,在胃癌、结直肠癌、胰腺癌、膀胱癌、神经胶质瘤中发挥促进作用,靶向抑制这些通路可干扰B7-H3介导的信号传导以减弱癌症侵袭性[6]。

综上所述,乳腺癌的发生和进展与多种因素相关,B7-H3的高表达对乳腺癌的发生和进展具有重要作用,在乳腺癌的诊断及免疫治疗方面具有潜在的临床价值,有望成为免疫治疗新靶点。