称重法验证西门子全自动发光免疫分析仪样本针和试剂针正确度和重复性

魏湃佳 徐 宁 李 涛 曹永坚 罗 强 刘振杰

广州中医药大学第二附属医院 广东省中医院检验科，广东广州 510370

自动化的发光免疫分析仪越来越广泛地应用于临床检验，并涉及光、机、电、软件、液路、温控、免疫分析等多方面的综合技术。系统结构复杂、控制时序要求严格、运行可靠性和精密度要求高[1-3]。不同品牌不同型号仪器的试剂针、样品针的加样量程差别比较大，由于全自动发光免疫分析仪为全封闭仪器，有的仪器不能实现仪器开盖、加纯水作为待测样品或试剂、中断加样操作等干预步骤，进行样本针或者试剂针吸样量的性能验证就比较困难。很多厂家进行仪器性能验证的时候，并没有对吸样量进行直接的验证[4-6]。这显然不符合《医学实验室质量和能力认可准则》[7]。本研究应用YY/T 1155-2019行业标准[8]，对西门子最新上市的全自动发光免疫分析仪Atellica IM1600吸样量进行验证。

1 材料与方法

1.1 材料

除气纯水；西门子Atellica IM1600全自动发光免疫分析仪，梅特勒电子万分天平XS105。

1.2 方法

登陆CSE（Customer Service Engineer），在测试定义里，启用特殊项目xSMTS10、xSMTS100；xSMT110、xSMT125、xSMT1200；xSMT225、xSMT2200；xSMT325、xSMT3200，并进CSE诊断。打开前后盖，移去杯子装载区的S-Channel，移去试剂针加样区孵育环盖子，在后台诊断软件的Excution里Disable外环，让外环掉电。把外环和S-channel杯子取出，油性笔编号1～89，90～200后（标记在杯子上部），放置5 min后分析天平称重并记录在表格里，每20个一袋，从外环盲孔（90#）逆时针方向依次放置1～89号杯子；S-Channel从Ring loader依次放置90～200号杯子。盖回孵育环盖子和S-Channel，并初始化模块。取下试剂针周围环境温度传感器，放置在试剂针加热器里，打开前盖取下酸、碱分配针放置在容器里，松开暗盒，把暗盒移到一边，保证接线正常，当运行测试时从清洗环推杯子电梯接取杯子。盖回后盖，前盖用屏蔽工具屏蔽开关感应器，压下盖锁。在空试管里放置3 ml纯水、3个空试剂瓶Well2位置放入10 ml除气纯水（MLTPRB）。加载Dummy（50099925MMDD01），MLTPRB（07799920012345）。编排一个Test标本，测试一个xSMTS10进行灌注。在暗合推杯位置接住杯子并丢弃之。编排一个ID号为SMT标本，分别编排选择以下测试各20次：xSMTS10、xSMTS100；样品针10 μl和100 μl；xSMT125、xSMT1200；试剂1针25 μl和200 μl；xSMT225、xSMT2200；试剂2针25 μl和200 μl；xSMT325、xSMT3200；试剂3针25 μl和200 μl。每个测试杯在清洗环推杯子到暗盒的位置接住，依次放在试管卡座上（如试管泡沫板）。分四次进行，每次分别称重。分析天平测量重量并记录在表格里，复原仪器，在诊断里清空填充杯子1次，测试定义里关闭本方案启用的测试项目，关机重启，并运行标本观察。

1.3 统计学方法

建立Excel数据表，分别计算每一个试验杯子里面加入水的重量，并计算变异系数值，加样体积≤10 μl，偏倚不超过±1 μl，变异系数≤5%为可接受范围，10 μl<加样体积≤50 μl，变异系数≤3%为可接受范围，加样体积>50 μl，变异系数≤2%为可接受范围。标准大气压，25℃条件下，水密度为997.403 kg/m3。

2 结果

测试程序完成后，分别计算每一个试验杯子里面加入水重量的均值及变异系数，评估试剂和样本加注的重复性，所有测试项目变异系数均处于允许变化范围之内[9]。根据YY/T 1155-2019行业标准，在恒温恒湿箱内，结合各项目20次测定均值计算偏倚，评估试剂和样本加注的正确度，所有测试项目偏倚均处于允许范围内。加样体积≤10 μl，偏倚不超过±1 μl，变异系数≤5%为可接受范围，加样体积10 μl<加样体积≤50 μl，偏倚不超过5%，变异系数≤3%为可接受范围，加样体积>50 μl，偏倚不超过5%，变异系数≤2%为可接受范围[9]。试验仪器样本与试剂加注的重复性和正确度均满足要求，见表1～4。

表2 试剂针1吸样正确度和重复性验证

表3 试剂针2吸样正确度和重复性验证

表4 试剂针3吸样正确度和重复性验证

3 讨论

根据《医学实验室质量和能力认可准则》（CNAS CL02：2012）中的临床生物化学测试标准[7-8]，新测试体系在测试患者样本之前，必须进行一系列的评价和验证，以确保其在测试过程中的准确性和正确度等指标满足预定的使用目的。《全自动生化分析仪校准规范》[9]中亦有相关描述。王军等[10]也认为，在新的试验体系中，采用符合国家有关标准的试验手段，然后再进行试验；对检验系统的基础分析能力进行了检验，只有检验能力达到了规范的要求，才能用于日常的临床检验[7-9]。性能验证主要包括参考区间、精密度、干扰和回收试验、检出限等，样本针和试剂针的验证属于精密度和正确度的范畴，由于认可准则里面没有明确的内容指引，很多厂家对化学发光免疫分析仪进行性能验证的时候，通常认为，只要精密度和正确度结果符合要求就等于样本针和试剂针的吸样是符合要求的。因此，很多公司出具的校准报告上，均没有明确的进行样本针和试剂针的实验。而在国家药品监督管理局2019发布的全自动发光免疫分析仪评价标准YY/T 1155-2019中，已经明确了加样正确度和重复性的要求，并且提供了两种验证方法可供参考。

称量方法是通过操纵仪器中的试剂针头或样本针头，将一定容积的液滴移到规定的器皿中，然后利用电子天平来计量被移出的液滴的容积[10-12]。但是，大部分的全自动生化分析仪都不支持以上液体转移的具体测试顺序，而且在实验室中进行微称时，会受到很多的影响，如果操作不当，就会带来很大的不确定度，无法对仪器试剂和样品的加注精度和重复性进行实际的检验[13]。在理论上，常规的比色法可以判断样品的加注状态，然而，目前主流的全自动生化分析仪，第一个添加的不是样品，而是试剂1，而且二者的加注之间的间隔十分短暂，因此使用比色法来判断二者之间的关系十分困难。比色法是通过加注、回收和定容的方式，稀释所加注色素原液，确定稀释倍数，并对稀释后色素原液与内标物吸光度进行测量，进而计算色素原液加注容量。有研究提出了对比色法进行改进的方法，即在全自动生化分析机中设置特殊的检测步骤，将吸光度已知的标准物质进行稀释，然后对稀释后的吸光度进行测定，并与理论吸光度值进行比较；对进样及进样的精确性及重现性进行了间接评估[14-15]。

实验的过程中有几个关键的步骤需要特别注意：①操作者需要非常熟悉仪器的性能和操作，需要专业的仪器工程师的协助，在测试定义里启用特殊项目如：xSMTS10；②设置好了程序，停机之后，需要将外环和S-channel杯子取出，并用油性笔编号1～89，90～200后（标记在杯子上部），放置5 min，等笔迹完全干了之后，每20个装一袋，因为量太多会比较乱，而量太少，操作步骤多容易出错；③实验开始后，每个测试杯在清洗环推杯子到暗盒的位置接住，并且依次放在试管卡座上（如试管泡沫板）。分4次进行，每次进行20个杯子的实验并5 min内完成称重。该过程需要密切关注杯中液体的撒漏或者挥发；④大部分的试剂盒其中有一格是完全干净密封的，在进行后面的实验的过程中，可以利用该格子添加蒸馏水，作为试剂针测试的样本。

综上所述，西门子全自动发光免疫分析仪Atellica IM1600样本针和试剂针吸样量正确度和重复性符合YY/T 1155-2019行业标准，可以进行常规检测工作。