结直肠癌转录因子激活蛋白2α和2β表达与腹腔镜下根治术后复发的临床关系

李忠发，陈元龙，李扬

（资阳市人民医院 普外科，四川 资阳 641301）

在全世界范围内，结直肠癌发病率位居第3 位，病死率位居第2 位[1]。虽然，结直肠癌手术适应证在不断扩大，手术患者越来越多，但是，术后复发已成为结直肠癌的死亡原因之一[2]。有研究[3]显示，结直肠癌腹腔镜下根治术后12 个月复发转移率高达25.00%。因此，探讨影响结直肠癌根治术后复发的危险因素，以指导临床采取措施干预，对降低术后复发率和改善患者预后，具有重大意义。转录因子激活蛋白2（transcription factor activator protein 2，TFAP-2）是一类从海拉细胞中分离发现的转录因子，拥有能与细胞特异性结合的DNA，能够调控细胞增殖、分化和凋亡等[4]。转录因子激活蛋白2α（transcription factor activator protein 2α，TFAP-2α）和转录因子激活蛋白2β（transcription factor activator protein 2β，TFAP-2β）是TFAP-2 家族中的重要成员。既往有研究[5-6]报道，两者在乳腺癌和胰腺癌等多种恶性肿瘤中异常表达，并且可能是抑癌或促癌因子。然而，TFAP-2α 和TFAP-2β 在结直肠癌中的表达却少有报道。鉴于此，本研究选取行腹腔镜根治术的结直肠癌患者147 例，检测TFAP-2α 和TFAP-2β 在癌组织中的表达情况，并分析两者与术后复发的关系，旨在为临床干预提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取资阳市人民医院2018年2月－2020年1月收治的行腹腔镜根治术的结直肠癌患者147 例。其中，男84 例，女63 例；年龄26～83 岁，平均（57.14±8.06）岁；结肠癌57 例，直肠癌90 例。所有患者行腹腔镜下根治术，切除相应结肠或直肠肠段，清扫区域淋巴结，并根据患者术后病理分期、生物学指标和术后恢复情况，进行辅助化疗。本研究获得医院伦理委员会批准通过，批件号：2018-00110号。

纳入标准：术前病理TNM 分期为Ⅰ～Ⅲ期；行腹腔镜下根治手术；术后病理证实为结直肠癌；签订知情同意书。排除标准：结直肠癌复发者；多个原发癌者；合并其他肿瘤者；合并严重的肝肾功能不全或心脑血管疾病者；合并免疫性和血液性疾病者；术前有肿瘤治疗史。剔除标准：非结肠癌死亡者；失访者。

1.2 方法

1.2.1 TFAP-2α 和TFAP-2β 蛋白表达检测 收集患者手术切除的癌组织和切缘正常组织，用磷酸盐缓冲液漂洗后，再用甲醛（40 g/L）固定，用石蜡包埋制成切片；脱蜡后，梯度乙醇水化；置于柠檬酸盐缓冲液（0.01 mmol/L）中，行高温抗原修复后，用过氧化氢（3%）来阻断过氧化氢酶活性；用磷酸盐缓冲液清洗后，滴加山羊血清进行封闭，依次滴加一抗和二抗，经显色复染后，冲洗、脱水、透明，封片镜检。

1.2.2 镜检结果判定 胞核无色为0分，胞核呈淡黄色为1 分，胞核呈棕黄色为2 分，胞核呈棕褐色为3 分；以随机5 个细胞胞核棕黄或棕褐染色为阳性细胞，阳性细胞率 ＜ 5%、≥5%且≤25%、＞ 25%且≤50%、＞ 50%且≤75%和 ＞ 75%，分别记0、1、2、3和4 分，最后2 项评分乘积≤3 分为阴性表达，＞ 3 分则为阳性表达。

1.2.3 术后随访 以术后病理确诊为随访起点，患者定期来院复诊，统计患者术后3年的复发情况。

1.3 观察指标

1.3.1 癌组织和切缘正常组织 比较两者TFAP-2α和TFAP-2β的阳性表达率。

1.3.2 复发情况 统计结直肠癌患者腹腔镜下根治术后3 年复发率，比较复发和未复发患者癌组织TFAP-2α和TFAP-2β的阳性表达率。

1.3.3 结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的影响因素 记录影响因素、回归系数（B）、标准误（standard error，SE）、相对危险度（relative risk，和95%置信区间（95% confidence interval，95%CI）。

1.4 统计学方法

选用SPSS 25.0 软件分析数据，计数资料以例（%）表示，比较采用χ2检验；采用Cox 回归分析影响结直肠癌腹腔镜下根治术后复发的危险因素。P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织和切缘正常组织TFAP-2α 和TFAP-2β阳性表达率比较

与切缘正常组织相比，癌组织TFAP-2α 和TFAP-2β 阳性表达率较低，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。见表1。

表1 癌组织和切缘正常组织TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率比较 例（%）Table 1 Comparison of positive expression rates of TFAP-2α and TFAP-2β between cancer tissue and normal tissue at the cutting edge n（%）

2.2 复发组与未复发组癌组织TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率比较

术后3 年内有34 例复发，复发率为23.13%（34/147）。与未复发组相比，复发组癌组织TFAP-2α和TFAP-2β 阳性表达率较低，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。见表2。

表2 复发组与未复发组癌组织TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率比较 例（%）Table 2 Comparison of positive expression rates of TFAP-2α and TFAP-2β between the recurrence group and nonrecurrence group n（%）

2.3 结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的影响因素

2.3.1 单因素分析 与未复发患者相比，复发患者T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比较高，癌组织TFAP-2α 和TFAP-2β 阳性率较低，差异均有统计学意义（P＜ 0.05）。见表3。

表3 结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的单因素分析 例（%）Table 3 Univariate analysis of recurrence after laparoscopic radical surgery in colorectal cancer patients n（%）

2.3.2 Cox 回归分析 T3至T4期、N1至N2期、血管侵犯占比较高，以及癌组织TFAP-2α 和TFAP-2β 阳性表达率降低，是结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的独立危险因素（P＜ 0.05）。见表4。

表4 结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的Cox回归分析Table 4 Cox regression analysis of recurrence after laparoscopic radical surgery in colorectal cancer patients

3 讨论

3.1 结直肠癌术后复发情况

近年来，结直肠癌的发病率不断升高[7]，即使经手术治疗后，仍有部分患者术后发生复发、转移，导致预后不佳，甚至造成死亡[8]。本研究通过随访发现，结直肠癌腹腔镜下根治术后3 年复发率为23.13%，提示：结直肠癌患者术后复发率较高，临床需探讨影响结直肠癌术后复发的因素，指导预后评估和采取早期措施，以降低术后复发率。

3.2 TFAP-2α和TFAP-2β在结直肠癌组织中的表达

本研究结果显示，相较于切缘正常组织，结直肠癌组织的TFAP-2α 和TFAP-2β 阳性表达率降低，提示：TFAP-2α 和TFAP-2β 阳性表达可能与结直肠癌的发生存在一定的关系。TFAP-2α 和TFAP-2β 是核转录特异性调控因子。李波等[9]研究报道，TFAP-2α在宫颈癌组织中较正常宫颈组织阳性表达率明显降低，可能发挥抑癌作用。YANG 等[10]报道，TFAP-2β

在肝细胞癌组织及细胞中表达降低，对肝细胞癌的生长有抑制作用。本研究结果与上述报道一致，均表明了TFAP-2α 和TFAP-2β 在肿瘤的发病中具有抑癌作用。但也有研究[11-12]发现，TFAP-2α在肺腺癌中表达上调，可通过介导促转移信号通路，来促进肺腺癌的发生发展，TFAP-2β 在乳腺癌中呈高表达，并且其水平升高，可促进乳腺癌肿瘤生长，两者均具有促癌作用，这与本研究结果不同。考虑原因为：TFAP-2α和TFAP-2β 在不同类型肿瘤的发生、发展中，作用机制不同，导致发挥促癌或抑癌的作用不同。

3.3 结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的独立危险因素

3.3.1 TFAP-2α 和TFAP-2β 表达降低 本研究比较了结直肠癌腹腔镜下根治术后，复发患者和未复发患者癌组织TFAP-2α 和TFAP-2β 的表达，发现两者在复发患者中阳性表达率降低。且经Cox回归分析显示，两者表达降低，均是结直肠癌腹腔镜根治术后复发的独立危险因素。TFAP-2α 能通过调节细胞外信号，调节激酶、上皮细胞-间充质细胞转换和p35等，来影响肿瘤细胞的增殖和侵袭。KOŁAT 等[13]研究报道，TFAP-2α过度表达，可通过p35依赖性和独立路径通路、β 连环蛋白信号通路、细胞色素C9 依赖线粒体通路等，预防癌细胞侵袭，抑制癌细胞生长和增殖。BECK 等[14]研究报道，TFAP-2α 能够通过磷脂酰肌醇3 激酶级联调节细胞周期，通过TGM2 来激活AKT，TFAP-2α 表达缺失时，AKT 磷酸化水平下降，并且诱导结直肠癌对高度选择性磷脂酰肌醇3激酶抑制剂产生耐药性。因此，在结直肠癌中，TFAP-2α 表达下调，会削弱对肿瘤细胞生长的阻滞和凋亡作用，促进肿瘤的侵袭和迁移能力，且可能影响术后辅助化疗效果，增加术后复发的风险。有研究[15]发现，TFAP-2β的DNA结合域与β-连环蛋白1～9犰狳重复序列相互作用，并可通过与β-TrCP 结合，促进β-连环蛋白的降解，抑制肿瘤细胞增殖和上皮间充质转化，还能抑制WNT 下游基因β-连环蛋白、MMP-7 和Cyclin D1 等的表达，以抑制肿瘤细胞的恶性增殖。因此，在结直肠癌中，TFAP-2β 阳性表达率降低，不但会促进上皮间充质转化，加强肿瘤的侵袭转移能力，还会促进肿瘤细胞增殖，侵袭周围正常组织，增加手术切除难度和术后复发率。

3.3.2 病理分期与血管侵犯 本研究还发现，病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯，也是结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的独立危险因素。T分期越高，代表肿瘤浸润越深，淋巴管分布在黏膜下层，当肿瘤浸润到黏膜下层时，极易通过淋巴管发生转移，并且随着浸润加深，更易侵袭周围组织、淋巴管和血管，增加术后复发转移风险。ITABASHI 等[16]报道，淋巴结阳性是结直肠癌术后复发的重要因素；程晨等[17]也报道，N1或N2分期和血管侵犯与术后复发风险增高有关，是术后复发的危险因素。因此，建议临床在治疗结直肠癌患者时，术后应早期针对以上危险因素进行评估，以减少复发。

综上所述，TFAP-2α 和TFAP-2β 阳性表达率在结直肠癌组织中较正常组织低，且两者阳性表达率降低，以及病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比较高，是结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的独立危险因素。