复方桐叶烧伤油促进糖尿病足皮肤创面愈合及通过p38 MAPK信号通路调节糖尿病足大鼠皮肤组织AQP3表达

叶伟 黄敏 陈颖犁

【摘 要】目的 探討复方桐叶烧伤油通过p38信号通路调节激酶（MAPK）信号通路对糖尿病足大鼠皮肤组织水通道蛋白3表达的影响。方法 选取60只SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、糖尿病足溃疡组（B组）、复方桐叶烧伤油组（C组）、复方桐叶烧伤油+SB203580组（D组），各15只。B组、C组、D组45只大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病后构建糖尿病足溃疡模型；比较各组研究指标。结果 C组创面愈合率显著高于B组，D组创面愈合率显著低于C组（P<0.001）；B组、C组、D组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平均显著高于A组，C组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平均显著低于B组，D组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平显著高于C组（P<0.001）；B组、D组组织中APQ3、p38蛋白表达量均低于A组（P<0.001）；C组组织中APQ3表达量低于A组（P<0.001），而p38蛋白表达量显著高于B组，D组APQ3、p38蛋白表达量均极显著低于C组（P<0.001）。结论 复方桐叶烧伤油促进糖尿病足皮肤创面愈合，通过激活p38 MAPK信号通路磷酸化上调糖尿病足大鼠皮肤组织中APQ3表达。

【关键词】复方桐叶烧伤油；p38 MAPK信号通路；糖尿病足；水通道蛋白3

中图分类号：R587.2 文献标识码：A 文章编号：1004-4949（2023）20-0103-04

基金项目：江西省中医院管理局科技计划项目（编号：2021A204）

Compound Tong Ye Burn Oil Promotes Skin Wound Healing of Diabetic Foot and Regulates AQP3 Expression in Diabetic Foot Rats Through p38 MAPK Signaling Pathway

YE Wei1， HUANG Min2， CHEN Ying-li3

（1.Department of Emergency， the First Affiliated Hospital of Nanchang University， Nanchang 330000， Jiangxi， China； 2.Department of Emergency， Fengcheng Hospital of Traditional Chinese Medicine， Fengcheng 331100， Jiangxi， China； 3.Department of Hematology， Jiangxi Childrens Hospital， Nanchang 330000， Jiangxi， China）

【Abstract】Objective To investigate the effect of compound Tong leaf burn oil on the expression of aquaporin-3 in the skin of diabetic foot rats through p38 signaling pathway regulated kinase （MAPK） signaling pathway. Methods 60 SD rats were randomly divided into normal control group， diabetic foot ulcer group， compound tung leaf burn oil group and compound tung leaf burn oil +SB203580 group， with 15 rats in each group. Diabetic foot ulcer model was established in 45 rats in diabetic foot ulcer group， compound tung leaf burn oil group， compound tung leaf burn oil +SB203580 group after intrabitoneal injection of streptozotocin. The study indexes of each group were compared. Results The wound healing rate of group C was significantly higher than that of group B， and the wound healing rate of group D was significantly lower than that of group C （P<0.001）. The levels of TNF-α， IL-6 and CRP in group B， group C and group D were significantly higher than those in group A； The levels of TNF-α， IL-6 and CRP in group C were significantly lower than those in group B； The levels of TNF-α， IL-6 and CRP in group D were significantly higher than those in group C （P<0.001）. The expression levels of APQ3 and p38 protein in group B and group D were lower than those in group A （P<0.001）. The expression of APQ3 in group C was lower than that in group A （P<0.001）， while the expression of p38 protein was significantly higher than that in group B. The expression of APQ3 and p38 protein in group D was significantly lower than that in group C （P<0.001）. Conclusion Compound Tong leaf burn oil can promote the skin wound healing of diabetic foot and up-regulate the expression of APQ3 in the skin tissue of diabetic foot rats by activating the phosphorylation of p38 MAPK signaling pathway.

【Key words】Compound TongYe Burn Oil； p38 MAPK signaling pathway； Diabetic foot； Aquaporin 3

糖尿病足溃疡（diabetic foot ulcer）是糖尿病的严重并发症之一，是导致糖尿病患者致残甚至致死的主要原因之一，糖尿病患者足部溃疡的总发生率可能高达19～34%[1]。随着糖尿病发病率的不断升高，糖尿病足溃疡的发病率也在逐年升高，探究糖尿病足溃疡的的治疗方案尤为重要。有研究发现[2]，高糖条件下p38 MAPK活性降低，由乙酰胆碱诱导的角质形成细胞-上皮-间质细胞转化被抑制，说明p38 MAPK信号通路可能会影响创面修复的过程。在AQP3缺陷的角质形成细胞的研究中，p38 MAPK激活受损。Kumazasa提取物引起的AQP3表达增加可能是通过激活p38 MAPK信号通路来增强转录[3]。复方桐叶烧伤油具有促进创面愈合、消炎止痛等功效，经复方桐叶烧伤油治疗后溃疡创面可缩小，溃疡皮肤组织中的TGF-α含量升高，TNF-β含量降低；溃疡皮肤组织中肉芽组织厚度明显降低，炎症细胞数明显减少。复方桐叶烧伤油是否调控AQP3和p38 MAPK来促进创面愈合尚不明确，本研究选取糖尿病足大鼠模型探讨复方桐叶烧伤油通过p38信号通路调节激酶信号通路对糖尿病足大鼠皮肤组织水通道蛋白3表达的机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取60只清潔级SD大鼠[科大斯贝福北京生物有限公司，生产许可证号：SCXK（京）2019-0010]，周龄为8周，体重为（235±18）g。动物实验符合动物伦理（伦理号：CDYFY-IACUC-202304QR013）。大鼠饲养温度为23 ℃～24 ℃，湿度为40%～60%，将大鼠适应性喂养7 d后进行后续实验。

1.2 方法

1.2.1试验分组 选择60只SD大鼠随机分为A组、B组、C组、D组，各15只。A组采用普通饲料喂养且给予腹腔注射柠檬酸钠缓冲液，剂量与糖尿病模型大鼠腹腔注射剂量一致；余45只大鼠通过高糖高脂饲料喂养并制备以改良链脲佐菌素诱导的糖尿病模型，建模成功后将糖尿病足溃疡模型大鼠模型随机分为B组、C组、复方桐叶烧伤油+SB203580。其中A组与B组均外敷浸湿生理盐水的纺纱，C组于造模成功后予以复方桐叶烧伤油进行治疗，p38抑制剂组于造模成功后予以D组治疗。B组3只大鼠死于糖尿病足感染，C组1只大鼠死于糖尿病足感染，D组4只大鼠死于糖尿病足感染。

1.2.2皮肤组织取材 用无菌组织提取器分别于各组大鼠足背部皮肤进行取材，取材完成后用于ELISA法检测、Western blot分析。

1.3 观察指标 观察各组大鼠的创面愈合情况、炎症因子水平（通过取创面组织，检测组织中TNF-α、IL-6、CRP表达水平）、蛋白表达情况（检测组织中AQP3及p38蛋白水平）。

1.4 统计学方法 组织蛋白定量检测数据图采用GraphPad Prism 9.0制作，研究数据均采用SPSS 27.0统计学软件进行分析，计量资料以（x-±s）表示，多组间比较采用F检验，两组间比较采用独立样本t检验；P<0.05表示差异有统计学意义 ，P<0.01表示统计学意义显著，P<0.001表示统计学意义极显著。

2 结果

2.1 各组大鼠创面愈合情况 C组创面愈合率显著高于B组，D组创面愈合率显著低于C组（P<0.001），见表1。

2.2 各组皮肤组织炎性因子比较 B组、C组、D组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平均极显著高于A组；C组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平均极显著低于B组；D组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平极显著均高于C组（P<0.001），见表2。

2.3 各组皮肤创面AQP3及p38蛋白表达情况比较B组、D组组织中APQ3、p38蛋白表达量均低于A组；C组组织中APQ3蛋白表达量低于A组，而 p38蛋白表达量极显著低于A组；D组APQ3、p38蛋白表达量均极显著低于C组（P<0.001），见表3。

3 讨论

糖尿病足作为糖尿病的并发症之一，为严重影响患者生命质量的重要因素，血糖控制不佳容易合并周围神经病变和周围血管病变，糖尿病足患者皮肤对各组种刺激反应差，皮肤出现病变愈合差，多因素导致患者患病率高，治疗效果不佳[4，5]。若糖尿病患者的下肢出现伤口，易合并感染，从而导致足部溃疡。

本研究结果显示，C组创面愈合率极显著高于B组（P<0.001），经复方桐叶烧伤油处理的糖尿病足大鼠溃疡面积均显著缩小。分析原因可能是由于复方桐叶烧伤油有利于扩张微血管并改善机体微循环，减轻机体炎症反应，并促进创面愈合，对上皮组织生长具有重要作用，同时该药能够保护间生态组织，诱导间生态组织转化为具有生长功能的上皮组织，有利于改善糖尿病足大鼠皮肤创面情况[6，7]。D组创面愈合率极显著低于C组（P<0.001），说明抑制p38 MAPK抑制剂可以拮抗复方桐叶烧伤油促进创伤面愈合的作用，国外也有研究发现p38 MAPK抑制剂可以抑制糖尿病引起的伤口愈合，高糖血症可导致胰岛素源性的炎性因子释放量升高，如TNF-α、IL-6、CRP等炎性细胞因子，进而加剧机体炎症性反应及氧化应激反应[8，9]。本研究结果也显示，C组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平均极显著低于B组，D组组织中TNF-α、IL-6、CRP水平均极显著高于C组（P<0.001），说明经复方桐叶烧伤油处理后，糖尿病足大鼠皮肤组织中TNF-α、IL-6、CRP水平均显著降低，即复方桐叶烧伤油减轻了创伤面炎症反应。在各种机械损伤和创伤损伤中，表皮角质形成细胞的AQP3表达增加，促进角质形成细胞迁移，增强角质形成细胞的增殖和分化，胞外信号调节激酶信号通路在介导细胞信号方面扮演重要角色，p38 MAPK信号通路参与介导细胞反应[10-12]。本研究发现，C组组织中APQ3、p38蛋白表达量均极显著高于B组，而D组APQ3、p38 蛋白表达量均显著低于C组（P<0.001），提示复方桐叶烧伤油可能通过激活p38 MAPK信号通路磷酸化上调阻断AQP3表达。

复方桐叶烧伤油可能通过激活p38 MAPK信号通路磷酸化而上调糖尿病足大鼠皮肤组织中AQP3表达，可改善炎症反应及促进创面溃疡愈合。

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编辑 张孟丽