不同梅毒血清学检测策略在梅毒诊断中的应用价值

罗桂云

梅毒是临床上一种常见性病，主要指机体感染苍梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性，系统性的性传播疾病。梅毒主要通过性传播、母婴传播以及血液传播。梅毒患者是唯一的传染源，患者的精液、乳汁、唾液和血液当中都可以存在梅毒螺旋体［1-3］。梅毒根据病程可以分为三期，一期梅毒可表现为硬下疳，腹股沟淋巴结肿大，此时传染性最强，二期梅毒可表现为梅毒疹，硬下疳消退，传染性也较强，三期梅毒可表现为骨梅毒、神经梅毒等。目前临床对梅毒螺旋体的实验室检测方法主要有甲苯胺红不加热血清试验（tolulized red unheated serum test，TRUST）、酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、化学发光微粒子免疫测定法（chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）及梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（treponema pallidum particle agglutination test，TPPA）等，上述方法在临床实验室应用中均各有优势与弊端。本研究对惠东县慢性病防治站收治的疑似梅毒感染患者分别采用不同梅毒血清学检测方法进行测定，分析并比较其诊断价值，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象与一般资料 选择2021 年11 月—2022年9月惠东县慢性病防治站检验科收取的51例疑似梅毒患者作为研究对象，其中男性27 例，女性24 例；年龄22～41 岁，平均（31.47±2.96）岁。收集所有患者的血液样本。

1.1.1 纳入标准 ① 研究对象均存在《梅毒、淋病和生殖道沙眼衣原体感染诊疗指南（2020 年）》［3］中梅毒相关临床表现；② 入组前意识清晰且具备基本理解能力；③ 对本研究内容知情同意。

1.1.2 排除标准 ① 合并心脑血管重大疾病患者；② 合并肝、肾等重要器官功能障碍者；③ 存在精神异常或认知障碍者；④ 对本研究使用试剂过敏者。

1.1.3 伦理学 本研究符合医学伦理学标准，并经本单位伦理审批（审批号：20230509），所有检测均获得过受检者或家属的知情同意。

1.2 仪器与试剂 TDL-80-2B 低速自动平衡离心机由上海安亭科学仪器厂生产，KJ-201BD 振荡器由上海一恒科学仪器有限公司生产，Multiskans MK3全自动酶联免疫分析仪购自芬兰雷博诊断有限公司，雅培i2000全自动化学发光微粒子免疫分析仪购自美国雅培公司。终止液（规格：100 mL∶500 mL）由上海酶联生物科技有限公司生产，抗原液（批号：H20223400346）购自南京诺唯赞医疗科技有限公司，TPPA 试剂盒（批号：H20173406813，规格：20×5 人份/盒）由日本富士瑞必欧株式会社提供。

1.3 研究方法 所有入组对象均采集晨起空腹静脉血10 mL 作为后续检测样本，置于低速自动平衡离心机，以3 000 r/min 离心5 min，获取上层血清。

1.3.1 TRUST 法检测 收集血清样本（50 μL）置于加样卡片圈内，再均匀涂抹，使样本分布于整个卡片圈，将抗原液（北京万泰生物药业股份有限公司）轻轻摇匀，借助试剂盒自带针头滴加1 滴抗原液至卡片圈，再将卡片置于立体脱色摇床上方，使用振荡器进行8 min 振荡摇匀（调节速度为100 r/min），立即于亮光下进行结果观察。

1.3.2 ELISA 法检测 使用全自动酶联免疫分析仪开展ELISA 法检测，分别收集3 份血清样本（每份50 μL）置于预包被板条孔内，设置阳性、阴性以及空白对照组，随后将血清样本置于恒温箱内（温度控制在37 ℃）进行60 min 温育；取出板条孔，分别将酶标记物（50 μL）加入阳性、阴性以及空白对照孔内，振荡摇匀；置于恒温箱内（温度控制在37 ℃）进行30 min 温育。再将板条孔取出，进行洗板操作后，各孔内加入底物缓冲液（50 μL），振荡摇匀后置于恒温箱内（温度控制在37 ℃）进行30 min 温育，最后在各孔内加入终止液（50 μL）并混匀。

1.3.3 CMIA 法检测 使用全自动化学发光微粒子免疫分析仪以及配套试剂、质控液及标准液，严格按照仪器及试剂盒说明书开展各项操作。

1.3.4 TPPA 法检测 使用TPPA 试剂盒与质控液，在室温条件下由操作人员在U 型板上开展标本依次倍比稀释操作，再分别加入未致敏与致敏明胶颗粒，振荡混合30 s，加盖后静置（注意调节室温在15～30 ℃）；2 h 后，借助观察镜对其反应图像进行观察并记录，最后对测定结果进行判定。

1.4 观察指标

1.4.1 不同检测方法阳性结果判定 ①TRUST 法：阳性特征为圆圈内出现粉色或红色的絮状物，若圆圈内观察到甲苯胺红颗粒在中央处发生聚集或呈均匀分布，则判定为阴性［5］；②ELISA 法：样本OD值S/C.O≥1.0 提示梅毒螺旋体抗体反应阳性；样本OD 值S/C.O＜1.0 提示梅毒螺旋体抗体反应阴性［6］；③CMIA 法：S/C.O 值≥1.0 判定为有反应性（阳性）；S/C.O 值＜1.0 判定为无反应性（阴性）；④TPPA 法：滴度≥1∶80 时判断为阳性。

1.4.2 不同检测方法结果与临床诊断结果比较 根据公式计算诊断效能：敏感度＝真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%，特异度＝真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%，诊断准确度＝（真阳性例数+真阴性例数）/总例数×100%［7］。

1.5 统计学处理 采用SPSS 22.0软件分析数据。计量资料符合正态分布以均数±标准差（±s）表示，采用t检验；计数资料以例（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同血清学方法检测梅毒的检出结果比较TPPA 方法检出阳性23 例，TRUST 及ELISA 方法检出阳性样本数分别为16 例、17 例，TPPA 方法诊断梅毒的敏感度明显高于TRUST 及ELISA 方法，差异均有统计学意义（均P＜0.05），CMIA 方法检测出阳性样本数为25 例，TPPA 与CMIA 检测方法的敏感度比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 不同血清学检测方法的诊断结果比较

2.2 不同血清学检测方法的敏感度、特异度以及诊断准确度比较 TPPA 方法诊断梅毒的特异度为96.15%，TRUST、ELISA 及CMIA 方法诊断梅毒的特异度分别为61.54%、57.69%、76.92%，TPPA 方法的特异度明显高于TRUST、ELISA 及CMIA 方法，差异均有统计学意义（均P＜0.05），TPPA 方法对梅毒的诊断准确度为94.12%，TRUST、ELISA 及CMIA 方法对梅毒的诊断准确度为62.75%、62.75%、88.24%；TPPA 方法对梅毒的诊断准确度明显高于TRUST 及ELISA 方法，差异均有统计学意义（均P＜0.05），TPPA与CMIA 方法的诊断准确度比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。见表2。

表2 不同血清学检测方法的敏感度、特异度及诊断准确度比较

3 讨论

人体一旦感染梅毒，通常表现为较明显的硬下疳特征，随着病情进展，患者会出现全身梅毒疹，病情严重时会对骨关节、黏膜、心血管、浅表淋巴结及神经系统等造成损伤，进而引发颅内压增高、视网膜炎症、痴呆等症状，影响患者工作与日常生活，导致其生活质量下降［8］。因此早期明确诊断并开展针对性治疗对改善梅毒患者预后具有重要意义。

梅毒可以作为预后判断以及复发或再感染的诊断指标［9］。目前，尽管检验科研发出聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）等各种新型分子检测技术，但由于缺乏特异性基因参考，且容易受患者机体状况等因素的干扰，导致临床仍将TPPA 作为梅毒检测的“金标准”。TPPA 血清学检测方法的准确度最高，但由于该方法使用的试剂盒价格较高，普通工薪阶层患者难以接受，因此，TPPA 无法成为梅毒常规筛查手段［10］。TRUST 法主要通过在抗原内加入甲苯胺红颗粒作为指示物，为检测人员肉眼观察提供一定便利。该方法主要优势为经济实惠、患者接受程度高，且检测结果可随病情发生变化而产生不同程度的反应，因此临床通常借助这一检测方法对患者临床病情变化实施监测。但TRUST 法容易受到外界多种因素（如患者自身存在免疫性疾病、合并恶性肿瘤、前带反应、吸毒等）干扰，导致最终检测结果的准确度偏低。当行TRUST 法检测结果显示患者为阴性时，不排除存在一或三期梅毒、神经性梅毒及潜伏梅毒的可能性，临床检验医师必须结合患者的实际症状作出准确判断。因此，临床又开始探索其他血清学检测方法。ELISA 法属于检验科常用方法之一，在梅毒疾病诊断中应用的原理为借助基因重组梅毒螺旋体的特异性抗原TP17 及TP47 包被酶板孔，运用双抗原夹心法以检测梅毒螺旋体表面特异性抗原IgM 及IgG 的抗体［11］。这一检测方法可以有效避免主观判定所产生的误差，借助定位酶标仪准确判读结果，有助于临床检出率提高，检测结果较为客观且可靠。但检验科在临床实际长期应用后发现，ELISA 法检测过程中不可避免地出现假阳性结果，再加上方法学方面的缺陷及包被原料的差异，导致这一检测方法存在一定的漏检风险。有研究人员将TPPA 作为“金标准”，发现ELISA 法存在较多假阳性结果［12］。化学发光法属于新型标记免疫测定方法，该技术主要特点为敏感度及准确度高、操作简便、可重复检测等，近年来得到飞速发展。与常规ELISA 法中以酶标板为固相载体实施检测不同，化学发光法的主要载体为悬浮性磁微粒，能有效扩大与样品反应的表面积，因此检测更迅速且灵活；再加上磁场作用，能准确反映梅毒螺旋体的动态变化，从而弥补ELISA 的不足［13］。陈俊生和张旭明［14］研究中对118 份化学发光法所得阴性标本应用TPPA 法开展检测，结果显示均为阴性，提示CMIA 的敏感度较高。

综上所述，TPPA 检测方法的敏感度、特异度及诊断准确度均优于TRUST 法及ELISA 法，CMIA 法的敏感度高达100%，CMIA 联合TPPA 的血清学检测策略在临床具有较好的应用前景。今后临床医师可考虑CMIA 与TPPA 检测方法联合使用，以避免发生漏诊、误诊，进一步提高对梅毒临床诊断的准确度，从而为后续治疗方案的选择提供可靠依据。

此外，试验开展期间也发现本研究的不足之处：① 研究对象单一且缺乏排除标准，可能存在地区差异；② 研究对象存在个体差异，如血清标本送检时间不一致，检验人员的操作水平差异都可能对检测结果造成影响。今后开展试验时可考虑纳入不同地区病例，引用严谨的排除标准，并充分考虑各种可能影响检测结果的主观合客观因素并合理排除，更加深入分析不同梅毒血清学检测策略对临床梅毒患者的诊断价值。

利益冲突作者声明不存在利益冲突