2018—2022 年四川省达州市兽医系统实验室检测能力比对分析
2023-11-22李清竹徐倚天刘俐君赵小波黎丁箕
李清竹，徐倚天，刘俐君，赵小波，杨 青，张 蕾，黎丁箕，李 成
（达州市动物疫病预防控制中心，四川达州 635000）
为科学评估达州市兽医系统实验室检测水平，达州市动物疫病预防控制中心（以下简称市疫控中心）于2018—2022 年期间组织辖区内7个县级兽医实验室开展兽医系统实验室检测能力比对工作。本文通过对比对结果分析，提出针对性整改措施，以期进一步提高全市兽医系统实验室检测水平，增强达州市动物疫病监测预警能力。
1 材料与方法
1.1 比对范围
达州市内辖区7 个县级兽医实验室，其中5个实验室已通过省级考核或延展考核验收。
1.2 比对项目、检测方法、试剂来源和执行标准
2018—2022 年，每年比对3～5 个检测项目，共比对项目17 个。比对项目包括禽流感、口蹄疫、布鲁氏菌病、非洲猪瘟的病原学或血清学检测（详情见表1）。涉及5 种检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）、血凝与血凝抑制试验（HA-HI）、荧光聚合酶链式反应（荧光PCR）、布鲁氏菌试管凝集试验（SAT）、以及布鲁氏菌虎红平板凝集试验（RBT）。
表1 2018—2022 年检测能力比对项目
1.3 比对样品和试剂
比对样品由市疫控中心自制或试剂厂家生产，经市疫控中心反复验证、编号、分装，标定样品参考值后发放，各参考值的样品数量不一致。每个比对项目设置4～6 个盲样，各样品外观无差异，样品量相同。除2022 年非洲猪瘟病毒核酸检测、禽流感H5/H7 亚型核酸检测2 个项目以外，其余比对项目试剂均由市疫控中心统一购置。
1.4 比对样品发放方式
比对样品由市疫控中心统一发放，县级兽医实验室派专人在限定日期内到市疫控中心实验室领取，放入装有冰袋的保温箱中保存，并在12h内送达各自实验室后按具体要求存放。
1.5 评判标准
1.5.1 禽流感H5、H7 亚型抗体检测
阴、阳性对照成立，检测结果与参考值相同或者±1 个滴度，判定为结果正确。
1.5.2 O 型口蹄疫抗体检测
阴、阳性对照成立，阳性样品、若弱阳性样品检测结果为“阳性”，阴性样品的结果为“阴性”，判定为结果正确。
1.5.3 非洲猪瘟病毒核酸、禽流感H5/H7 亚型核酸检测
阴、阳性对照成立，阳性样品、若弱阳性样品的检测结果为“阳性”，阴性样品的结果为“阴性”，判定为结果正确。
1.5.4 布鲁氏菌抗体检测
使用试管凝集试验，虎红平板试验进行检测：阴、阳性对照成立，若阳性样品的检测结果为“阳性”，阴性样品的结果为“阴性”，判定为结果正确。
1.6 比对结果报告
县级实验室每年在规定时间内独立完成各项目检测，及时向市疫控中心上报检测结果，同时报送检测报告及原始记录。
2 结果分析
2.1 总体比对结果
2018—2022 年，7 个县级兽医实验室共检测602 份盲样，检测结果正确有573 份，总体正确率为95.18%。
2.2 不同年度比对结果
2018—2022 年，各年份检测结果准确率分别为99.05%、85.71%、93.33%、95.24%、100%，呈先下降后稳步上升趋势。
2.3 不同实验室比对结果差异
2.3.1 不同年份
2018 年有6 个县级实验室检测结果准确率为100%；2019 年有2 个实验室准确率为100%，但也有3 个实验室的准确率在85%以下；2020 年不同检测准确率范围（100%，85%～99%，85%以下）的县级实验室个数分别为：3、3、1；2021年100%准确的实验室为5 个，但有1 个实验室准确率在85%以下；2022 年7 个县级实验室的检测准确率均为100%。
2.3.2 不同县
2.3.2.1 总体情况
G 县兽医实验室检测准确率最高，为98.84%；E 县实验室准确率为90.70%，最低；7 个县级实验室检测准确率均达到了90%以上。
2.3.2.2 不同年份
A 县实验室2018 和2022 年的检测结果准确率均为100%，2019、2020 年分别为86.67%，2021 年为94.44%；
B 县实验室2019 年准确率为80%，其余各年检测结果正确率均达100%；
C 县实验室2019 年检测结果准确率为86.67%，其余各年的均为100%；
D 县实验室2021、2022 年检测结果正确率均为100%，2018、2019、2020 年分别为93.33%、66.67%和93.33%；
E 县实验室2019、2021 年检测准确率分别为80.00%、72.22%，其余3 年均为100%；
F 县实验室除2020 年检测结果准确率为80.00%，其余4 年的均为100%；
G 县实验室除2020 年检测结果准确率为93.33%，其余4 年的均为100%。
2.3.2.3 不同检测方法
A～G 县实验室ELISA 检测结果准确率在92.31%～100%；HA-HI 方法检测结果准确率在61.90%～100%，其中E 县的为61.90%，D 县的为76.19%，其余县的均在90%以上；除D 县的SAT 方法检测结果准确率为92.86%，其余县的均为100%；荧光PCR 方法A、D、F、G 县检测结果准确率均为95.24%，B、C、E 县的为100%；A～G 县RBT 方法的准确率均为100%（图1）。
图1 不同县级实验室不同检测方法检测准确率
2.4 不同检测项目比对结果差异
项目实验室符合率在28.57%～100%，2019年禽流感H7 亚型抗体检测项目实验室符合率最低，仅为28.57%，2020 年非洲猪瘟病毒核酸检测项目的为42.86%，其余各项目的实验室符合率均在85%以上。各项目检测结果准确率在62.86%～100%，除2019 年的禽流感H7 亚型抗体检测项目的检测结果准确率为62.86%，其余各项目的均在85%以上。
2.5 不同检测方法比对结果差异
在2018—2022 年，ELISA、HA-HI、荧 光PCR、SAT 和RBT 的总体检测结果正确率分别为97.80%、86.39%、97.28%、98.98%、100%（表2）。从各年份的检测结果来看，除2019 年HA-HI 检测准确率为62.86%，其余各年份各方法比对结果准确率均在85%以上。
表2 不同检测方法检测正确率统计 单位：%
3 讨论
达州市兽医系统实验室检测能力比对项目设置上，充分考虑了当地实际情况，针对各阶段的重点防控病种，结合县级兽医实验室基础设施等条件，尽可能覆盖实验室检测工作常用的ELISA、HA-HI、荧光PCR 等多种检测方法。
3.1 总体水平
2018—2022 年总体准确率为95.18%，总体检测水平高，能满足非洲猪瘟、禽流感、口蹄疫等主要动物疫病检测需要[1]，说明县级兽医实验室能够为达州市动物疫病监测预警乃至疫病防控体系提供坚实的技术支撑。除2019 年准确率为85.71%，其余年份准确率均在93.33%及以上，表明达州市兽医系统实验室整体检测能力水平高但略微不稳定。
3.2 不同实验室检测水平差异
各县级实验室检测能力不同，部分实验室的检测准确率较低。从检测能力与稳定性来看，A、B、C、G、F 县检测水平高且稳定，D、E 县检测能力稍弱且波动起伏大，可能与D、E 县的实验室财政资金不足，个别检测项目技术不熟练有关。总体而言，县级实验室能较好掌握常用的5种检测方法，但个别县的个别检测方法检测能力不足，如E 县对HA-HI 方法掌握程度较低。
3.3 不同检测项目差异
2019 年禽流感H7 亚型抗体检测项目（HAHI 方法）和2020 年非洲猪瘟病毒核酸检测项目（荧光PCR 方法）实验室符合率或检测准确率偏低。可能是HA-HI 法受器材、稀释液、抗原、待检血清、红细胞、人员操作等因素影响，试验结果易出现偏差[2]；2020 年各县级实验室初步具备荧光PCR 检测能力，首次进行该项目比对，实际操作经验不足，技术不熟练。且荧光PCR 从样品处理、核酸提取、扩增到结果判定，步骤复杂，对操作人员技术要求较高，可能造成结果差别较大[3]。
3.4 不同检测方法差异
HA-HI 法准确率仅有86.39%，其余4 种检测方法准确率均在97.28%以上，说明县级实验室能熟练掌握RBT、SAT、ELISA、荧光PCR 4 种方法，但HA-HI 方法是检测薄弱点，需强化培训指导与实际操作。出现上述结果可能与各检测方法的特点有关，RBT 是实验室日常监测布鲁氏菌病、基层大量初筛的最常见方法[4]，其特点是操作简便、省时省力；SAT 是布病抗体检测的复核方法，准确率高，特异性强，但耗时长[5]；ELISA是兽医实验室最常用的血清学检测方法，通常采用商品化试剂且结果判定使用仪器读数[6]，操作简便，准确率高。相对而言，HA-HI 法和荧光PCR法的操作相对复杂，对操作人员技术要求较高。
3.5 检测报告、原始记录存在的问题
各县兽医实验室递交的检测报告、原始记录都存在一些问题，主要包括：①检测原始记录不完善，部分记录出现原始记录填写不详尽、不规范、不完整、不清晰等现象；②检测报告不规范，存在盖章不全、三级审核签字不齐、检测信息填写不当等情况[7]。这些问题的出现与工作人员的职业素养相关，部分问题可能会对实验结果造成一定的影响。
4 小结
在2018—2022 年达州市兽医系统实验室检测能力比对中，各县级兽医实验室均展现出了较高的检测能力，但部分实验室存在着检测水平不稳定的问题、对个别检测方法能力不足、也存在着检测报告不规范、原始记录不完善等问题。县级兽医实验室应当以比对试验为契机，针对出现的问题进行整改，提升自身检测能力。可以通以下些工作提高检测能力：认真总结经验，深入查找不足，解决存在问题；积极争取资金，升级检测设施；深化实验室建设，培养检测人才；加强人员培训考核，重视检测质量。从而进一步提高全市兽医系统实验室检测水平，增强达州市动物疫病监测预警能力。
