非小细胞肺癌组织中LINC00707、miR-382-5p表达及其与患者预后的关系

周利君,郭红荣,王红娟,方思,徐建群

(武汉市第三医院/武汉大学附属同仁医院 呼吸与危重症医学科,湖北 武汉 430074)

肺癌目前是我国发病率及死亡率均较高的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中较常见的病理类型,占肺癌人群的80%～85%[1]。由于NSCLC初期症状不具有特异性,大多数NSCLC患者在就医时已发展为中晚期甚至出现转移,手术等临床治疗方法无法根治,导致NSCLC患者预后较差,5年生存率不足20%[2-3]。因此寻找与NSCLC患者预后相关的特异性指标,能够使患者得到及时有效的干预,提高生存率。长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是长度大于200个核苷酸、不能编码蛋白质的RNA,LncRNA在人体各个组织及器官中均有表达,能够通过相关信号通路参与癌症发生与发展[4-5]。LncRNA 00707(LINC00707)作为LncRNA家族重要成员,同样会对恶性肿瘤疾病的发生产生影响,并且有研究表明LINC00707对肺上皮细胞炎症因子的释放和凋亡具有调控作用,提示LINC00707可能与肺部疾病发生有关[6]。LncRNA也能够与微小RNA(miRNA)相互作用,通过控制靶基因的表达,对疾病的发生进行调控[7]。有报道称miRNA-382-5p(miR-382-5p)在乳腺癌、胃癌等患者体液中均有表达[8]。本研究测定NSCLC患者癌组织中LINC00707和miR-382-5p表达水平,并分析二者与NSCLC患者预后的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取本院2018年2月至2020年2月手术治疗的127例NSCLC患者,术中留取NSCLC组织和癌旁组织。患者年龄40～70岁,平均(64.26±6.88)岁,男73例,女54例。纳入标准:(1) 患者均行肺活检及病理检查,依据《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2019版)》[9]中的诊断标准确诊为NSCLC;(2) 均为初次确诊NSCLC;(3) 未接受过放化疗、靶向治疗等抗肿瘤治疗者;(4) 患者及家属知情且同意参与本研究。排除标准:(1) 伴有感染性疾病、代谢疾病或免疫系统疾病者;(2) 伴有其他器官的恶性肿瘤者;(3) 合并心、肝、肺等重要器官功能障碍者。本研究经医院伦理委员会审批,严格按照规定程序执行。

1.2 资料收集

收集患者年龄、性别、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、分化程度、组织学类型等临床资料。

1.3 LINC00707、miR-382-5p表达水平的检测

取NSCLC患者癌组织及癌旁组织(距癌组织边缘3 cm以上),于-80 ℃保存待测。取50 mg组织,采用Trizol试剂(美国Invitrogen公司)分离提取组织中的总RNA,用分光光度计(UPT-100,上海尤尼柯仪器有限公司)检测RNA纯度和浓度,采用PrimeScript miRNA cDNA Synthesis反转录试剂盒(日本TaKaRa公司)以RNA为模板逆转录为cDNA,使用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix(货号:Q711-02,日本TaKaRa公司)对cDNA进行定量检测,检测仪器为7300型实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司),以GAPDH、U6为内参,使用2-ΔΔCt方法分别计算LINC00707及miR-382-5p的表达水平。引物序列见表1。

表1 引物序列

1.4 随访

自NSCLC患者入院起,以电话及门诊的方式对其进行为期3年的随访,每2个月随访1次,以患者出现复发或癌因死亡为随访终点,记录患者3年间的生存状况。患者随访率为100%,生存时间记录为入院日期至患者死亡时间或最终随访截止时间(2023年2月),以此计算NSCLC患者3年生存率。

1.5 统计学处理

采用SPSS 25.0软件进行数据处理,计数资料以例(n)或百分率(%)表示,采用χ2检验,计量资料以表示,组间比较行配对t检验;Pearson法分析NSCLC组织LINC00707与miR-382-5p表达的相关性;采用Kaplan-Meier法分析LINC00707和miR-382-5p的表达与患者预后的关系;多因素Cox回归分析影响NSCLC患者预后的相关因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 NSCLC组织与癌旁组织LINC00707和miR-382-5p表达的比较

NSCLC组织中LINC00707表达水平明显高于癌旁组织,miR-382-5p表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 NSCLC组织与癌旁组织LINC00707和miR-382-5p表达的比较()

表2 NSCLC组织与癌旁组织LINC00707和miR-382-5p表达的比较()

组 织nLINC00707miR-382-5p癌旁组织1271.03±0.111.06±0.14NSCLC组织1271.41±0.260.72±0.06t值15.16925.896P值<0.001<0.001

2.2 NSCLC组织LINC00707与miR-382-5p表达的相关性

Pearson相关分析显示,NSCLC组织LINC00707与miR-382-5p的表达水平呈负相关(r=-0.692,P<0.05),见图1。

图1 NSCLC组织LINC00707与miR-382-5p表达的相关性

2.3 NSCLC组织LINC00707、miR-382-5p表达与患者临床病理特征的关系

不同年龄、性别、肿瘤直径、浸润深度、组织学分类的NSCLC患者LINC00707、miR-382-5p表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结发生转移、分化程度为低分化的患者NSCLC组织中LINC00707呈现高表达水平,miR-382-5p则呈现出低表达水平(P<0.05)。见表3。

表3 NSCLC组织LINC00707、miR-382-5p表达与患者临床病理特征的关系()

表3 NSCLC组织LINC00707、miR-382-5p表达与患者临床病理特征的关系()

临床病理特征nLINC007表达水平t值P值miR-382-5p表达水平t值P值年龄 <60岁481.36±0.220.73±0.08 ≥60791.45±0.291.8500.0670.72±0.060.8010.425性别 男731.39±0.240.73±0.07 女541.45±0.291.2740.2050.71±0.061.6900.094肿瘤直径 <3 cm691.44±0.240.73±0.08 ≥3 cm581.39±0.211.2370.2180.71±0.061.5690.119TNM分期 Ⅰ+Ⅱ781.28±0.150.77±0.08 Ⅲ+Ⅳ491.62±0.347.728<0.0010.66±0.048.939<0.001淋巴结转移 否901.31±0.180.76±0.08 是371.67±0.397.128<0.0010.63±0.049.398<0.001浸润深度 浅层701.39±0.220.73±0.08 深层571.44±0.341.0000.3190.71±0.061.5630.121分化程度 低分化551.59±0.420.65±0.04 中/高分化721.28±0.145.857<0.0010.78±0.0712.315<0.001组织学分类 鳞癌691.39±0.250.73±0.07 腺癌581.44±0.311.0060.3160.71±0.061.7110.090

2.4 LINC00707、miR-382-5p表达与患者预后的关系

采用Kaplan-Meier法分析LINC00707及miR-382-5p表达水平与患者预后的关系,结果显示,LINC00707低表达患者3年生存率(27/63,42.86%)高于LINC00707高表达患者(18/64,28.13%)(χ2=5.123,P=0.024),miR-382-5p高表达患者3年生存率(28/64,43.75%)高于miR-382-5p低表达患者(17/63,26.98%)(χ2=4.089,P=0.043),见图2、3。

图2 NSCLC组织LINC00707表达与患者3年生存率的关系

图3 NSCLC组织miR-382-5p表达与患者3年生存率的关系

2.5 多因素Cox回归分析影响NSCLC患者预后的相关因素

以NSCLC患者3年内是否死亡为因变量(赋值:死亡=1,存活=0),以TNM分期(赋值:Ⅲ+Ⅳ=1,Ⅰ+Ⅱ=0)、淋巴结是否转移(赋值:是=1,否=0)、分化程度(赋值:中/高分化=0,低分化=1)、LINC00707(实测值)、miR-382-5p(实测值)为自变量进行多因素Cox回归分析,结果显示,TNM分期、淋巴结转移、分化程度、LINC00707、miR-382-5p是NSCLC患者预后的影响因素(P<0.05)。见表4。

表4 多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素

3 讨 论

肺癌是我国常见的恶性肿瘤之一,根据病理类型可将肺癌分为小细胞肺癌和NSCLC两大类,其中NSCLC是最为常见的类型[10]。由于NSCLC发病隐匿,患者早期症状并不明显,大多数患者确诊时已处于中晚期,错过了最佳治疗时机,导致患者预后较差,生存率较低,给患者及其家庭带来沉重负担[11-12],因此寻找与NSCLC密切相关的肿瘤标志物,对NSCLC患者的及早诊治具有重要意义。相关研究表明,LncRNA能够影响肿瘤的发生及转移过程,其表达水平对肿瘤早期诊断具有一定临床意义,而miRNA也与肺癌、胃癌等恶性肿瘤疾病发生密切相关[13]。

LncRNA是一类不具备编码蛋白能力的RNA,能够通过与蛋白质、RNA等大分子结合调控基因的翻译、转录过程,从而促进相关疾病的发生与发展[14]。有研究表明LncRNA与肺癌、胃癌、肝细胞癌等多种癌症发生密切相关[15-16],并且Li等[17]报道LncRNA对NSCLC具有较高诊断准确率。在本研究中,NSCLC组织中LINC00707表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05);Chen等[18]的研究结果显示,肺炎患儿体液LINC00707表达水平相较于对照组升高,表明LINC00707表达水平的升高与肺部疾病发生密切相关,本研究结果与之一致。而对LINC00707表达水平与患者临床病理特征关系分析结果显示,TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结发生转移、分化程度为低分化的NSCLC患者癌组织中LINC00707呈现高表达水平,说明LINC00707表达水平的升高不仅能够促使NSCLC发生,还与NSCLC恶性程度密切相关,可能作为预测NSCLC患者预后状态的特异性指标。

miRNA是一种内源性非编码单链小分子,国内外大量研究表明,miRNA能够通过调控其靶基因转录与翻译来影响肿瘤转移和侵袭过程[19],miR-382-5p属于miRNA家族中的一员,在口腔鳞状细胞癌、乳腺癌、胃癌等恶性肿瘤发生发展过程中起重要作用[20-22],但对NSCLC的影响研究较少。本研究中,NSCLC组织中miR-382-5p表达水平与癌旁组织相比明显较低(P<0.05),刘博等[23]研究也表明,肺癌患者血清miR-382-5p表达量相较于健康对照组明显降低,本研究结果与之一致。进一步分析miR-382-5p表达与患者临床病理特征的关系,结果显示,TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结发生转移、分化程度为低分化的患者miR-382-5p则呈现出低表达水平(P<0.05),这说明miR-382-5p低表达会促使癌细胞增殖、分化及转移,促进NSCLC发展。相关性分析结果显示,NSCLC组织中LINC00707与miR-382-5p的表达水平呈负相关(r=-0.692,P<0.05),说明二者对NSCLC的发生起到相反作用。Chen等[18]的研究结果也显示,患有肺炎的婴儿血清中LINC00707水平升高而miR-382-5p水平降低,本研究结果与之一致。采用Kaplan-Meier法分析LINC00707与miR-382-5p表达与患者预后的关系,结果显示,LINC00707低表达及miR-382-5p高表达患者的3年生存率较高,结合多因素Cox回归分析结果来看,LINC0070、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、miR-382-5p是NSCLC患者预后的影响因素,提示应关注上述因素,以便及时对患者采取干预措施,改善预后。

综上所述,NSCLC组织中LINC00707表达较高,miR-382-5p表达则较低,二者是影响NSCLC患者预后的敏感指标。然而LINC0070及miR-382-5p对NSCLC的具体影响机制还需进一步探究。