免疫性复发性流产患者CD31、CD34及FⅧ表达量变化及其与病理学特征的关系＊

董 洁 李 晶 王沙沙 姚 岚

安阳市妇幼保健院病理科 (河南 安阳 455000)

复发性流产即患者连续发生3次及3次以上12周前妊娠产物(通过B超或者组织学检查证实的宫内妊娠)丢失，其中60.0%以上为免疫性复发性流产，不包括异位妊娠、生化妊娠所导致的流产[1-2]。现代研究表明妊娠成功的关键步骤之一是配偶之间生殖免疫功能正常，不过机体的免疫功能与行为受到严格的调控，如果发生异常，就可导致免疫性流产的发生[3]。约2/3的免疫性复发性流产妇女有血栓形成倾向，且伴随有血液高凝状态。当前临床上最常见的遗传性血栓形成疾病之一是活性蛋白C抵抗、抗凝蛋白C、凝血因子Ⅲ(FⅧ)的缺乏。其中FⅧ也称抗血友病球蛋白、抗血友病因子，是一种由肝脏合成的丝氨酸蛋白酶，在机体的抗血栓以及促进纤溶过程中发挥重要作用[4]。当前有研究表明，CD31、CD34表达与子宫内膜异位症、胎膜早破、流产等存在相关，具有调节基因转录、DNA修复、细胞分化、细胞成熟、表观遗传学等作用[5]。本文具体探讨与分析了免疫性复发性流产患者CD31、CD34及FⅧ表达量变化及其与病理学特征的关系，希望为明确免疫性复发性流产的发生机制提供一定的参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象2021年2月到2022年9月选择在安阳市妇幼保健院诊治的非人为原因流产100例作为研究组，同期选择在安阳市妇幼保健院人工流产患者100例作为对照组。

纳入标准：所有患者自愿参与本次课题研究；所有患者入院前3个月均未服用影响凝血功能与血小板功能的药物；无生殖器官畸形；无生殖系统感染；本次研究得到了安阳市妇幼保健院伦理委员会的批准；依从性良好；研究组符合免疫性复发性流产的诊断标准。排除标准：合并高危传染性疾病的患者；合并有肝肾疾病、甲状腺疾病病史者；患有精神、意识障碍的患者；合并有交流障碍疾病者；临床资料不全者。两组患者的年龄、受教育年限、血压、心率等对比无显著差异(P＞0.05)。见表1。

表1 两组患者的一般资料对比

1.2 观察指标取所有患者流产后的蜕膜组织标本保存在-80.0℃冰箱，购买CD31、CD34及FⅧ相关单克隆抗体，行免疫组化染色，阳性对照片由安阳市妇幼保健院病理科提供，由磷酸盐缓冲液代替一抗做阴性对照。蜕膜组织样本经福尔马林固定后，石蜡包埋，连续3 μm厚度切片。然后加入一抗，4℃放置于室温约30 min，洗涤3次后(每次洗涤时间为15 min左右)。滴加二抗，37℃放置10 min，磷酸盐缓冲液洗涤3次；DAB显色5 min左右，苏木素复染细胞核，封片观察。CD31表达于细胞膜，CD34表达于细胞膜/细胞浆，FVIII表达于细胞浆。每张切片于高倍镜(400倍)下随机计数5个视野，阳性细胞数大于或等于20.0%为阳性表达。病理诊断结果全部由安阳市妇幼保健院病理科具有丰富诊断经验的病理医师进行诊断(副主任医师及其以上职称，在病理科工作年限大于或等于5年)。同时由研究者采用统一的指导语，调查收集所有患者的一般资料等。

1.3 统计方法所获资料采用Epidata3.1 建立数据库，选择SPSS 21.00软件进行分析，计量数据(都符合正态分布)比如FⅧ阳性细胞百分率以均数±标准差(±s)表示，对比采用t检验；计数数据采用n、%与例数表示，对比采用χ2检验，多因素分析采用条件Logistic回归分析，相关性分析采用Spearsman分析，P＜0.05为有统计学意义。

2 结 果

研究组蜕膜组织CD31、CD34及FⅧ阳性细胞百分率低于对照组(P＜0.05)。见表2。

表2 两组血小板CD31、CD34及FⅧ阳性细胞百分率对比(%)

2.2 相关性分析在两组200例患者中，Spearsman分析显示蜕膜组织中CD31、CD34、FⅧ表达量与免疫性复发性流产都存在相关性(P＜0.05)。见表3。

表3 免疫性复发性流产患者CD31、CD34及Ⅷ表达量变化及其与病理学特征的关系(n=200)

表3 免疫性复发性流产患者CD31、CD34及Ⅷ表达量变化及其与病理学特征的关系(n=200)

指标 CD31 CD34 FⅧr 0.672 0.711 0.693 P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.3 影响因素分析在两组200例患者中，在免疫性复发性流产作为因变量，以蜕膜组织中CD31、CD34、FⅧ表达量作为自变量，多因素条件Logistic回归显示蜕膜组织中CD31、CD34、FⅧ表达量都为导致免疫性复发性流产发生的重要因素(P＜0.05)。见表4。

3 讨 论

复发性流产在临床上比较常见，由于各种因素的影响，国内外复发性流产的发生率呈上升趋势。多数复发性流产与免疫因素有关，母胎免疫耐受异常等病理特征是复发性流产重要机制之一，为此免疫性复发流产占复发性流产的60.0%以上[6-7]。

现代研究表明胎盘组织CD31、CD34是最主要的黏附受体之一，CD31、CD34的低表达可引起血小板聚集、血栓形成。使用免疫组化法测定胎盘组织CD31、CD34阳性表达水平已成为检查胎盘功能的一种重要手段，也具有操作成熟度高、准确性强等优点。本研究显示研究组蜕膜组织CD31、CD34及FⅧ阳性细胞百分率低于对照组(P＜0.05)，表明免疫性复发流产患者多伴随有血小板CD31、CD34及FⅧ的异常表达。分析可知：CD31、CD34对调节机体的内皮细胞功能、血小板聚集、血液流通具有重要作用，其异常表达可引起患者血液改变，影响组织供血供氧，从而导致流产的发生[8]。FⅧ是一种由肝脏合成的丝氨酸蛋白酶，FⅧ缺乏与动脉血栓、静脉血栓的形成有关，与复发性自然流产关系密切[9]。

本研究Spearsman分析显示CD31、CD34、FⅧ表达量与免疫性复发性流产都存在相关性(P＜0.05)；多因素条件Logistic回归显示CD31、CD34、FⅧ表达量都为导致免疫性复发性流产发生的重要因素(P＜0.05)，表明免疫性复发性流产患者CD31、CD34及FⅧ表达量变化及其与病理学特征存在明显的相关性。分析可知，CD31、CD34、FⅧ表达量异常可调节趋化因子和细胞因子产生，可促进前列腺素合成，促进宫颈成熟，诱发病理性妊娠，继而导致流产的发生[10]。在防治免疫性复发流产中，要积极对患者进行治疗与超声诊断，以促进改善患者的总体预后[11-12]。

总之，免疫性复发流产患者多伴随有CD31、CD34及FⅧ的异常表达，免疫性复发性流产患者CD31、CD34及FⅧ表达量变化及其与病理学特征存在明显的相关性。由于经费问题与一定的伦理问题，本次研究没有纳入非流产人群进行对比分析，调查与分析的比较少，且分析的内容比较少，人数也比较少，将在后续研究中探讨。