血清miR-4485-3p和miR-1469在胃癌患者手术前后的表达变化及对术后复发或转移的预测价值

王根柱 王亦茹 徐宏霞

作者单位：450000 郑州市第三人民医院

胃癌属于常见的消化道恶性肿瘤,可应用的治疗方法众多,如手术治疗、化疗、免疫靶向治疗等,均在胃癌治疗中发挥着重要的作用[1]。临床上在对胃癌进行治疗时,手术仍为最有效的治疗方式,通过切除病变部位,可有效延长患者的生存期。同时手术治疗可有效提升患者的生存质量,改善疾病预后。但当病灶发生转移或弥漫性扩散,则可能丧失手术治疗机会,而需借助其它方法实施治疗。因此为改善疾病预后,需对胃癌进行尽早诊治[2]。 microRNAs参与转录后水平基因表达的调控,和机体肿瘤病变的出现及发展存在密切关联,其属于新型基因诊断标志物。有研究报道称,在对胃癌进行诊断时,血清miR-4485-3p和miR-1469具备较高的应用价值[3]。但对于血清miR-4485-3p和miR-1469在胃癌手术治疗效果评估及预后预测中的应用,尚无相关研究报道,本次研究主要探讨血清miR-4485-3p和miR-1469在胃癌患者手术前后的表达变化及对术后复发或转移的预测价值。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月至2021年12月我院收治的胃癌患者80例,其中男性45例,女性35例,年龄25～68岁,平均(48.50±4.62)岁,患者均存在不同程度恶心呕吐、腹痛、呕血、黑便等症状。纳入标准:符合胃癌诊断标准[4]。排除标准:检查药物过敏患者;甲状腺功能明显异常患者。

1.2 研究方法

采集患者手术治疗前后1 d的静脉血5 mL,在室温环境下放置1 h后,放入离心机内以1000 r/min速度离心10 min,离心完成后取上层血清,将其转移至新的收集管,再次按照1.2×104r/min的速度离心10 min,将细胞碎片去除,保存于-80 ℃环境待检。

根据试剂盒说明书开展RNA提取和逆转录,应用Trizol LS试剂对血清总RNA进行提取,采用RNasefree ddH2O 10 μL将其溶解后,应用PCR试剂盒实施逆转录,对cDNA予以生成,在进行逆转录时,反应体系的总量为10 μL,在37 ℃温度下反应60 min,在85 ℃温度下反应5 min。将获取的cDNA模板进行稀释,稀释倍数为10倍,最后将其放置于-20 ℃环境下待检。在对血清miR-4485-3p和miR-1469水平进行检测时,PCR扩增应用的仪器为DK500实时荧光定量PCR仪,反应条件:在95 ℃温度下进行10 s预变性,在95 ℃温度下进行5 s变性,在60 ℃温度下进行退火,并进行20 s时间延伸,共开展40个循环处理。各个样品均应用3个复孔,将U6作为内参照基因。

1.3 观察指标

(1)本组患者手术治疗前后1 d的血清miR-4485-3p与miR-1469水平;(2)胃癌患者血清miR-4485-3p和miR-1469水平相关性;(3)开展6个月时间随访,记录术后复发情况,比较复发患者与无复发患者的血清miR-4485-3p和miR-1469水平;(4)术后转移患者与无转移患者的血清miR-4485-3p和miR-1469水平。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 本组患者手术治疗前后1 d的血清miR-4485-3p与miR-1469水平比较

胃癌患者手术治疗后血清miR-4485-3p与miR-1469水平高于治疗前(P<0.05),如表1。

表1 手术治疗前后1 d的血清miR-4485-3p与miR-1469水平比较

2.2 胃癌患者血清miR-4485-3p和miR-1469水平相关性分析

通过开展相关性分析显示,胃癌患者血清miR-4485-3p和miR-1469水平的相关系数γ值为0.122,P值为0.320,95%CI为-0.122～0.338,表明胃癌患者血清miR-4485-3p和miR-1469水平无明显相关性(P>0.05)。

2.3 术后复发与无复发患者的术前血清miR-4485-3p和miR-1469水平比较

80例患者术后复发18例,术后复发组患者的术前血清miR-4485-3p和miR-1469低于无复发组(P<0.05),如表2。

表2 术后复发与无复发患者的术前血清miR-4485-3p和miR-1469水平比较

2.4 术后转移与无转移患者的术前血清miR-4485-3p和miR-1469水平比较

本组患者术后转移9例,术后转移组患者的术前血清miR-4485-3p和miR-1469低于无转移组(P<0.05),如表3。

表3 术后转移与无转移患者的术前血清miR-4485-3p和miR-1469水平比较

3 讨论

原发性胃癌属于胃癌的常见类型,在我国具有较高的发病率,尤其是随着饮食结构的变化,发病率逐渐升高,发病人群的年龄也呈现出年轻化的趋势。在疾病发生的初期阶段,病灶体积较小,且无明显特异性症状,因此容易被忽视,出现漏诊或误诊的情况[5]。疾病确诊时可能已丧失最佳治疗时机。因此加强影像学检查,对于尽早确诊原发性胃癌,对于患者疾病预后改善具有积极意义[6]。以往临床上在对消化道肿瘤进行检查时,所应用的方法主要为胃镜检查、超声检查以及X线钡影检查,但上述方法均只能对黏膜表面所发生的病理改变进行诊断,即便开展表面组织病理活检,也难以对深层病变进行确诊。microRNA属于内源基因编码的单链RNA分子,其会对靶mRNA具备的稳定性产生破坏,导致靶mRNA的翻译受到抑制,由此来调控靶mRNA的水平。有资料报道称,mRNA对人类1/3的基因产生调控,有70%左右的哺乳动物的mRNA所处的位置在TUs区,同时大多数所处的位置在内含子区[7-9]。

microRNA中RNA含量高,其具备的序列大小通常情况下为17～25个核苷酸,在细胞增殖、凋亡、迁移以及分化过程中,发挥着重要的调节作用,同时在肿瘤信号通路的过度激活或抑制中也发挥作用[10]。在对肿瘤开展诊断和治疗时,可通过microRNA来对疾病进行分型和预后预测。血清miR-4485-3p属于重要的microRNA类型,有研究报道称,胃癌患者的血清miR-4485-3p表达和患者自身的性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移不存在明显的相关性[11]。但也有学者通过研究发现,血清miR-4485-3p可作为对胃癌治疗效果进行诊断和评价的重要指标[12]。miR-1469所处的位置在15号染色体,其可发挥致癌基因或抑癌基因的活性,在肿瘤发展中充当重要角色。在肿瘤组织中,miR-1469呈现异常表达,主要是在发生凋亡的肿瘤细胞内,miR-1469的水平会明显提高。有研究报道称,肺癌患者群体中,miR-1469可将VP16诱导的细胞凋亡增强,通过实施更深层的分析后显示,miR-1469产生的作用靶点为stat5a,miR-1469可依靠stat5a对肿瘤细胞的增生以及凋亡产生作用[13]。本次研究中,胃癌患者手术治疗后血清miR-4485-3p与miR-1469水平高于治疗前,表明随着手术治疗的开展,胃癌患者的疾病发展得到控制,使患者的血清miR-4485-3p与miR-1469水平得以有效提升。与相关研究报道称,胃癌患者术后血清miR-4485-3p与miR-1469水平高于治疗前相符[14]。同时本次研究中,胃癌患者血清miR-4485-3p和miR-1469水平无明显相关性,表明血清miR-4485-3p与miR-1469水平之间并不存在明显的关联,其均可独立作为对胃癌手术疗效进行评估的指标。本次研究中,术后复发组患者的术前血清miR-4485-3p和miR-1469低于无复发组;术后转移组患者的术前血清miR-4485-3p和miR-1469低于无转移组,表明血清miR-4485-3p与miR-1469水平在胃癌手术治疗后预后预测中具备较好的应用效果[15]。在手术治疗前,患者自身的血清miR-4485-3p与miR-1469水平越低,则表明患者在接受手术治疗后,其出现复发以及远处转移的风险越高。有研究报道称,miR-1469的表达水平和肿瘤患者的5年生存率以及总生存周期存在密切关联,当miR-1469的表达水平较低时,肿瘤患者的5生生存率更高,总生存期更长。通过在手术治疗前,为患者进行血清miR-4485-3p与miR-1469水平检测,可为患者的预后提供参考。对于手术治疗前血清miR-4485-3p与miR-1469水平较低的胃癌患者,术后需更加注意监测复发与远处转移的发生[16]。

综上所述,血清miR-4485-3p和miR-1469在胃癌患者手术后水平得以明显提升,且可对术后复发或转移提供良好的预测价值。