血清miR-378a-5p水平联合微血流成像的超声多模态检查对肝癌疾病进展与微血管侵犯的评估价值

王爱霞 张东锋

肝癌(HCC)是临床常见恶性肿瘤之一,在我国致死率较高,具有起病隐匿、恶性程度较高、肿瘤易发生转移的特点,严重威胁人类身体健康。目前HCC仍以手术治疗为主,近年来随着化疗、放疗等手段的涌现,HCC治愈率逐步上升,但复发率仍然较高[1]。微血管侵犯(MVI)是HCC患者术后复发的独立危险因素,可增加HCC患者术后复发风险,近年来逐渐关注MVI的发病原因。由此可见,早期精准诊断MVI对治疗方案的制定及HCC的发展情况意义重大。miR-378a-5p是一类微小RNA分子,研究发现[2-3],miR-378a-5p在正常组织中发挥保护作用,且可在HCC中抑制肝干细胞活化,促进肝损伤和纤维化强启动因子,编码活化蛋白质,在肝脏疾病中起到保护作用。超声多模拟态是诊断HCC最常见的检测方式,但临床关于预测MVI的价值鲜有报道,基于此,本研究选取HCC患者100例作为本次研究对象,探讨血清miR-378a-5p水平联合微血流成像的超声多模态检查对HCC进展与MVI的评估价值,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年5月至2021年5月本院收治的HCC患者100例作为研究对象,根据诊断结果分为MVI组、非MVI组,其中MVI组60例,男性28例,女性32例;年龄52～76岁,平均(68.23±6.13)岁;体质量45～74 kg,平均(59.14±5.78)kg;临床分期:Ⅰ期25例,Ⅱ期19例,Ⅲ期16例。非MVI组40例,男性21例,女性19例;年龄50～77岁,平均(67.49±6.21)岁;体质量46～72 kg,平均(58.34±5.49)kg;临床分期:Ⅰ期23例,Ⅱ期9例,Ⅲ期8例。两组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),有可比性。

1.2 纳入标准

①符合《原发性肝癌规范化病理指南(2015版)》诊断标准[4],并通过临床症状及相关检查确诊。②患者依从性好,配合临床检查。③临床资料完整。④符合医学伦理学要求,且患者家属均知晓情况并签署知情同意书。

1.3 排除标准

①合并急性或慢性感染性疾病。②长期服用抗抑郁药物、镇静药物。③合并其他重大疾病或精神病。④合并其他恶性肿瘤或存在远处转移。⑤合并严重自身免疫性疾病。

1.4 方法

临床和生化检查:取坐位于清晨测量收缩压(SBP)和舒张压(DBP)3次,取其平均值。取空腹静脉血测定甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)。MVI诊断方式:观察患者病理学切片,若发现癌栓聚集在癌旁肝组织中央静脉、门静脉分支、包膜小静脉等微小静脉内或位于内皮细胞衬覆的血管腔内则判定为MVI。

血清miR-378a-5p水平检测:所有受试者均于入院即刻采集空腹外周静脉血3 mL分别保存于抗凝试管中,常温静置血液30 min后采取离心处理,于10 min后分离上清液,-70 ℃保存,以待使用。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-378a-5p mRNA相对表达量[5]。应用miRNA提取试剂盒(美国普洛麦格生物技术有限公司)提取血清中miRNA,采用加尾法在15 ℃ 30 min条件下对样本进行反转录;需要合成的miR-378a-5p目的基因上游:5′-CUCCUGACUCCAGGUCCUGUGU-3′;下游:5′-ACUGGACUUGGAGUCAGAAGAG-3′。采用实时荧光定量PCR仪(杭州安杰思生物科技有限公司,型号:AGS9600)分析经反转录后的样本,条件为95 ℃反应10 min、93 ℃反应20 s、75 ℃反应30 s、60 ℃反应20 s,共循环45次。

微血流成像的超声多模态检查方法:取患者仰卧位,应用配备微血流成像的Philips彩超诊断仪(飞利浦(中国)投资有限公司,型号:EPIQ7)常规超声检查肝肿瘤数目、位置、大小、边界、形态及内部回声情况。设置超声造影成像机械指数<0.1,动态范围50～60 dB,使用微血流成像技术检查肝肿瘤最大切面,注射造影剂,储存静态、动态图像。

1.5 观察指标

①HCC不同分期血清指标和超声表现差异。②MVI单因素分析。③MVI多因素分析。④血清miR-378a-5p水平联合微血流成像的超声多模态检查对MVI的诊断价值分析。

1.6 统计学分析

2 结果

2.1 HCC不同分期血清指标和超声表现比较

HCC Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期动脉相、门脉相造影及血清miR-378a-5p水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。HCC患者动脉相造影表现为高增强,门脉相表现为低增强,见表1。

表1 HCC不同分期血清指标和超声表现比较

2.2 MVI单因素分析

单因素分析显示,两组性别、年龄、体质量、肿瘤位置比较,差异无统计学意义(P>0.05);MVI组包膜破损、无包膜、微血流Ⅱ级、Ⅲ级、门脉相高增强、肿瘤不光滑边缘、AFP、CEA、miR-378a-5p、SBP、DBP高于非MVI组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 MVI单因素分析

2.3 MVI多因素Logistic回归分析

以HCC发展情况作为因变量Y,以血清CEA、微血流分级、miR-378a-5p作为自变量X,进行赋值。见表3。将X和Y纳入Logistic回归模型中,分析发现血清CEA、微血流分级、miR-378a-5p为发生MVI的独立危险因素(P<0.05),见表4。

表3 赋值

表4 MVI多因素Logistic回归分析

2.4 血清miR-378a-5p、联合微血流成像的超声多模态检查对MVI的诊断价值分析

ROC结果显示,血清miR-378a-5p、血流成像的超声多模态检查单独预测MVI的最佳截断点分别为2.655 ng/mL、44.35 μg/mL,单独及联合预测MVI预后不良的AUC分别为0.731、0.697、0.852。见表5、图1。

图1 血清miR-378a-5p、微血流成像的超声多模态检查单独及联合检测诊断早期MVI的ROC曲线

表5 血清miR-378a-5p、联合微血流成像的超声多模态检查单独及联合检测对MVI预后不良的预测价值

3 讨论

HCC早期表现不够典型,通常在发现时已经到达晚期,目前临床采用手术治疗HCC,但其术后进展是一种较为复杂的病理过程,属于多种因素参与之后的结果,研究证明[6]MVI是参与HCC术后进展的重要机制,MVI是HCC发生转移的第一步,因此,术前精准预测MVI,进而有效预测HCC患者术后进展的风险对于临床治疗方案的制定预后判断意义重大。迄今为止,MVI主要通过术前影像学检查预测,大量文献证实[7-8],CT或核磁共振检查可预测肝肿瘤MVI,但关于超声应用于MVI的研究很少见。相关研究[9]提示miR-378a-5p与MVI存在联系,其不仅可存在于细胞组织中,还可存在于血液中,与癌细胞的增殖分化密切相关。因此了解血清miR-378a-5p及超声表现在HCC的发展及MVI的诊断、预测价值,对指导临床治疗及改善预后具有积极意义。

本研究中,HCC患者动脉相造影表现为高增强,门脉相表现为低增强,而HCC不同分期患者miR-378a-5p水平呈下降趋势,提示HCC患者的肿瘤分化程度与动脉相、门脉相密切相关,且机体内miR-378a-5p水平出现异常。与Wang等[10]研究结果一致,说明血清miR-378a-5p水平与微血流成像的超声多模态检查对于HCC进展鉴别具有一定意义。本研究结果显示,MVI组包膜破损、无包膜、单结节型、多结节型、肿瘤最大直径、肿瘤不光滑边缘、AFP、CEA、miR-378a-5p、SBP、DBP高于非MVI组,提示miR-378a-5p为MVI的不良因素,经Logistic回归分析发现微血流分级、miR-378a-5p为发生MVI的独立危险因素,表明患者病程中血清miR-378a-5p、微血流成像的超声多模态检测对评估病情及患者预后意义重大。微血流成像超声是近年来最新研发的成像技术,可在低量范围内显示更加丰富的血流信号,微血流成像的超声检测中血流分级数增加可能与MVI的HCC血供存在联系[11],区分由于组织运动产生的多普勒信号和血流多普勒信号,与既往临床使用成像技术比较,其更能敏感地检测出微小血流。miR-378a-5p作为重要转录后调控因子在临床上备受关注,其与多种疾病发生、发展密切相关,故在其检测到miR-378a-5p低表达可能与肝脏疾病发生有关[12]。

近年来,现代医学趋向于多种方式联合应用于临床检测。本研究ROC结果显示,血清miR-378a-5p、联合微血流成像的超声多模态检查单独及联合预测MVI预后不良的AUC分别为0.731、0.697、0.852。提示血清miR-378a-5p、联合微血流成像的超声多模态检查联合检测对评估MVI患者预后的价值优于两者单独检测,提高评估效能。血清miR-378a-5p、联合微血流成像的超声多模态检查联合检测的灵敏度、特异度和准确度较高,对该病诊断有临床指导意义,可为患者的早期诊断筛查提供一定的参考数据。微血流成像的超声检测作为一种新型技术可更加敏感地检测到肝肿瘤微血管,有望成为HCC术后新生血管的评估标准。有学者证实[13-14],下调肝脏细胞中miR-378a-5p的表达可明显促进该疾病的发生,减弱肝脏功能,由此可见,临床在治疗HCC时需加强对血清miR-155、水平的动态监测,并及时采取干预措施,维持两者正常水平,提升预后效果。

综上所述,miR-378a-5p在MVI患者中异常表达,且血清miR-378a-5p、联合微血流成像的超声多模态检查联合检测可作为早期MVI诊断及预后不良预测的有效参考依据,同时miR-378a-5p的低表达可能与HCC的进展程度相关。当然本研究仍存在一定不足,例如样本数量有待拓宽及随访时间较短等,在今后研究中需针对性改进,进一步提升研究可信度。