老年口腔鳞状细胞癌组织细胞凋亡相关基因蛋白表达情况及其与病理特征的相关性

简玲玲 田莉萍 牛 锐

作者单位：450000 郑州大学第一附属医院

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是指发生在口腔的恶性肿瘤,以鳞状细胞为主,恶性程度高,存在较强侵袭及转移能力,整体预后差,严重威胁患者生命健康。研究发现,肿瘤的发生、发展不仅与细胞增殖速率有关,还受细胞凋亡影响[1]。细胞凋亡是指受基因控制的细胞自主性死亡。机体产生新生细胞的同时,突变和衰老细胞将被清除,细胞内稳定及正常组织形态取决于细胞增殖和凋亡的平衡,一旦平衡被打破,细胞的恶性转化及基因突变的积聚,将诱发肿瘤发生,凋亡抑制则是导致恶性肿瘤发生的关键因素[2-3]。而细胞凋亡受基因调控,其中Bax、Bcl-2、P53基因被证实与鳞状细胞发生、发展有关,故通过明确该类基因在OSCC中的表达及与临床病理特征间的关系,则能够帮助临床良好评估病情进展程度及预测预后风险。本研究对上述基因表达与病理特征之间的关系进行研究,有助于为临床治疗OSCC提供新思路。现总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018年10月至2021年10月于我院就诊的88例OSCC患者临床资料,其中49例男性,39例女性;年龄60～82岁,平均年龄(71.02±4.33)岁;体质量指数(BMI) 19～29 kg/m2,平均BMI(23.71±1.15)kg/m2;病理分级:38例Ⅰ级,32例Ⅱ级,18例Ⅲ级;病理类型:16例口底癌,48例牙龈癌,7例口唇癌,12例舌癌,5例软腭癌;文化程度:25例初中及以下,51例高中,12例本科及以上;其中11例淋巴结转移,77例无淋巴结转移。经医学伦理委员会批准。

纳入标准:①年龄≥60岁;②经术后病理检查确诊为OSCC;③意识清楚,可配合完成本研究;④患者或家属知情同意。排除标准:①合并其他恶性肿瘤者;②存在重要脏器功能障碍者;③存有精神疾病者。

1.2 方法

所有患者均行手术治疗,术后取代表性病变组织块送检,连续切片数张,切片厚4 μm,采用免疫组织化学染色(LSAB)法对Bax、Bcl-2、P53进行染色,单抗工作浓度为1∶40,Bax、Bcl-2单抗隆抗体购自Santa Cruz Biotechnology公司,P53(DO-1)购自DAKO公司,LSAB购自Vector公司。取口腔鳞状细胞组织、口腔鳞状细胞组织及涎腺腺样囊性癌组织作为阳性对照,磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution,PBS)代替一抗作为阴性对照。结果判定:棕黄色颗粒出现在细胞核中则代表P53为阳性,否则为阴性;棕黄色颗粒出现在细胞质中,呈片状或巢状,或呈散在分布,且阳性细胞数>3%以上为阳性,否则为阴性。

观察Bax、Bcl-2、P53阳性表达情况。分析Bax、Bcl-2、P53阳性表达与病理特征间关系。

1.3 统计学分析

2 结果

88例OSCC患者,经检测Bcl-2阳性41例,占比46.59%;Bax阳性39例,占比44.32%;P53阳性30例,占比34.09%。有淋巴结转移Bax阳性表达率低于无淋巴结转移,Bcl-2、P53阳性表达率高于无淋巴结转移,有统计学差异(P<0.05);Ⅰ级、Ⅱ级Bcl-2阳性表达率低于Ⅲ级,Ⅰ级、Ⅱ级Bax阳性表达率高于Ⅲ级,Ⅱ级、Ⅲ级P53阳性表达率高于Ⅰ级,有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1 老年OSCC患者Bax、Bcl-2、P53阳性表达与病理特征关系(例,%)

3 讨论

3.1 OSCC现状

鳞状细胞癌是口腔中最常见的恶性肿瘤,约占80%以上,其属于多基因疾病,疾病发生、发展中受多种基因调控[4-5]。手术为该病常用治疗方式,通过切除病灶组织虽可阻止肿瘤进展,延长患者生存时间,但该病恶性程度较高,术后仍存在一定复发风险,导致患者整体预后一般。随着近年来对肿瘤发生机制研究的深入,细胞调控、抑制相关基因受到临床高度重视,期望通过这些基因表达来预测疾病进展及预后,从而指导临床治疗,最大程度延长患者生存时间。

3.2 Bcl-2、Bax、P53在恶性肿瘤中的意义

肿瘤的发生发展取决于细胞凋亡相对比率和细胞增殖速率,其中细胞凋亡受多基因调控,是一个复杂的过程,而Bcl-2、Bax、P53是重要调控基因。Bcl-2是Bcl基因家族重要成员之一,是一种抗细胞凋亡的调控因子,其可抑制细胞的程序性细胞死亡,而不影响细胞增殖,被称为调控细胞死亡的“存活基因”[6]。Bcl-2在胚胎组织中广泛表达,但在成熟组织细胞中表达显著降低。Bcl-2蛋白可嵌入细胞膜中,固定于膜上,且具有停靠蛋白和离子通道双重作用。一般认为在肿瘤形成过程中,Bcl-2仅会抑制细胞凋亡,而不会促使细胞增殖,故导致细胞凋亡和细胞增殖动态平衡被打破,进而导致癌变。Bax为Bcl-2同源类似物,是一种凋亡促进基因,是由192个氨基酸残基组成的蛋白质,可结合Bcl-2形成异二聚体形式[7]。Bax在结构上虽然与Bcl-2相似,但其功能则与Bcl-2相反,可促使细胞凋亡,在高分化肿瘤细胞中,宿主可通过Bax基因过度表达而诱导肿瘤细胞凋亡[8-9]。P53是一种肿瘤抑制基因,参与细胞周期调控,对于维持细胞稳定、防止基因突变具有积极的作用,能够预防肿瘤形成。P53基因有突变型和野生型两种,前者能够促进细胞癌变,降低Bcl-2表达,属Bcl-2的调控因子,后者可抑制细胞异常增殖,在细胞发生DNA损伤时可将细胞停滞于G1/S期,为DNA损伤修复争取足够的时间,促进细胞恢复,若DNA损伤无法正常修复,则其可启动细胞凋亡机制。野生型P53蛋白半衰期只有20 min左右,但其发生突变后结构更加稳定,半衰期可达2～12 h,临床易检出。大量研究证实,P53蛋白在健康人体组织中不表达,在异常增生上皮组织的基底细胞中呈弱表达,在OSCC细胞组织中呈强阳性表达[10]。

3.3 Bcl-2、Bax、P53与OSCC病理特征间关系

本研究结果显示,Bcl-2阳性41例,占比46.59%,Bax阳性39例,占比44.32%,P53阳性30例,占比34.09%。有淋巴结转移Bax阳性表达率低于无淋巴结转移,Bcl-2、P53阳性表达率高于无淋巴结转移,有统计学差异(P<0.05);Ⅰ级、Ⅱ级Bax阳性表达率高于Ⅲ级,Ⅰ级、Ⅱ级Bcl-2阳性表达率低于Ⅲ级,Ⅱ级、Ⅲ级P53阳性表达率高于Ⅰ级,有统计学差异(P<0.05),说明老年OSCC组织细胞Bcl-2、Bax、P53基因表达与病理特征密切相关。有研究显示,Bcl-2表达与OSCC分化程度呈正相关,且无淋巴转移患者Bcl-2表达水平较高[11]。相关资料显示,老年OSCC患者中Bax阳性率为53.2%[12]。有报道称,在多种肿瘤细胞中可检测出P53过度表达,且癌组织分化程度越低,P53表达强度越低[13]。以上相关研究均与本研究结果具有一致性,由此可见Bcl-2、Bax、P53在OSCC发生、发展、预后评估中发挥着重要的作用。然而本研究纳入样本量较少,后期应增加样本量纳入,以进一步研究其临床价值。

综上所述,老年OSCC组织细胞Bcl-2、Bax、P53基因蛋白表达与淋巴结转移、病理分级密切相关,临床可通过检测上述基因以评估疾病进展情况。