MiR-623表达水平对三阴乳腺癌预后的影响

朱 珍 王明琴 翟渊鹏 张付娟

作者单位：450000 郑州大学附属肿瘤医院,河南省肿瘤医院

三阴性乳腺癌是指病理染色报告中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及人表皮生长因子受体2(HER2)都是阴性的亚型,占乳腺癌总体的12%～17%。三阴性乳腺癌异质性高,通常发病年龄较低,易早期转移至肺、脑,对激素及靶向治疗反应差,预后差,文献报道Ⅲ～Ⅳ期三阴性乳腺癌患者5年生存率仅为13%[1]。

微小RNA(miRNA)是一类微小的非编码的内源RNA分子,其长度为20～25个核苷酸,具有高度的遗传稳定性。它们通过特异性结合多个靶mRNA3'非翻译区(3'-UTR),导致靶mRNA的翻译抑制或降解,从而参与调控细胞发育、增殖、分化、凋亡等过程,参与肿瘤的发生,调节多种细胞途径,包括增殖、分化、迁移和侵袭[2]。研究表明miRNA143表达下调可促进细胞凋亡并在胰腺癌发展过程中起到重要作用[3]。目前研究表明miRNA623在乳腺癌表达下调[4],但目前为止其在三阴乳腺癌中表达情况尚不明确。本研究探讨miRNA623在三阴乳腺癌中表达情况及其对预后影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

前瞻性纳入2016年1月至2019年1月我院收治的三阴乳腺癌并进行乳癌根治术或保乳手术患者。本研究由我院伦理委员会批准。病例纳入标准:①确诊为乳腺癌,并经免疫组化法确诊三阴乳腺癌的女性;②接受过乳房切除术或保乳手术;③完整的临床资料和随访情况。排除标准:①接受化疗、放疗或其他类型抗癌治疗的患者;②诊断为其他恶性肿瘤;③乳腺癌家族史。

1.2 miRNA-623测定

所有样本均取自手术切除的乳腺癌组织,样品立即冷冻在液氮中,并储存在-80 ℃下。用TRIzol试剂(Invitgen;Thermo Fisher Science Inc.)从采集的肿瘤组织及相邻细胞中提取总RNA。通过使用miRNA First-Strand cDNA合成试剂盒(Invitgen;Thermo Fisher Science Inc.)反转录成cDNA。反转录程序为:37 ℃作用1 h,85 ℃作用5 min。使用SYBR Green I Master Mix试剂盒(Invitgen;Thermo Fisher Science Inc.)进行RT-qPCR。热循环条件为:95 ℃作用10 min,60 ℃作用15 s,共40个循环。用2-ΔΔCt计算方法将miR-623的相对表达水平。MiR-623的引物序列为:正向5'-ATCCCTT-GCAGGGGCTGT TGGGT-3',反向5'-GCCAGCACAG-AATTAATACGAC-3'。U6的引物序列为:正向5'-CTCG-CTTCGGCAGCACA-3',反向5'-ACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。

1.3 观察指标

记录患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况及TNM分期。以miR-623水平的平均值为基准,将121例乳腺癌患者分为miR-623高表达组和低表达组。对所有患者进行术后随访,每6个月一次电话随访调查,以总生存率(OS)为主要终点事件。

1.4 统计学方法

所有统计学处理应用SPSS 15.0软件。本研究分类变量采用频数和百分率表示,组间比较采用χ2检验;应用log-Rank 比较miRNA-623高表达组和低表达组生存事件,Cox比例风险模型探索miRNA-623对三阴乳腺癌手术后生存时间的影响。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者基线特征

共纳入三阴乳腺癌121例,年龄<50岁患者54例,TNM分期Ⅰ～Ⅱ期71例,肿瘤<5 cm患者62例。miRNA-632高表达68例,低表达53例,不同miRNA-632表达组的TNM分期及淋巴结转移情况有统计学差异(P<0.05),年龄、肿瘤大小无统计学差异(P>0.05),见表1。

表1 2组患者基线特征比较/例

2.2 MiR-623对三阴乳腺癌生存时间的预后影响

所有患者完成3年随访,平均随访32月,中位生存时间25.6个月。与miR-623高表达患者相比,miR-623低表达患者的总生存期更短(Log rankP=0.020)(见图1)。COX回归分析结果显示,miR-623低表达[HR=2.743;95% CI=1.260～5.971;P=0.011]和TNM分期高(HR=2.191;95%CI 1.082～4.434;P=0.029)与患者的生存率密切相关,是三阴乳腺癌生存时间的两个独立预后因素。见表2。

图1 不同miR-623表达水平乳腺癌患者的Kaplan-Meier曲线

表2 乳腺癌患者生存率影响因素Cox回归分析结果

3 讨论

本研究通过前瞻性分析发现mi-RNA623低表达是三阴乳腺癌生存时间的不利影响因素。

三阴性乳腺癌(TNBC)是一种高度分子多样性乳腺癌亚型,通常影响年轻女性,其转移早,疾病复发更常见,所以预后不良。目前尽管对三阴乳腺癌的治疗进行了多种探索,其死亡率仍然较高[5],因此三阴乳腺癌分子标志物受到越来越多的关注,其中包括血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子受体、长链非编码RNA、miRNA。miRNA在多种癌症的早期诊断和预后中起到重要作用,在最近对21项研究进行的荟萃分析中发现,miRNA-155低表达(HR 1.49;95%CI:1.26～1.72)和miRNA-21高表达(HR 2.50;95%CI:1.56～4.01)与三阴乳腺癌死亡率升高相关[6]。另外一项研究中,21例三阴乳腺癌患者接受新辅助治疗前后血液中miRNA321水平有变化,同时发现经顺铂化疗后血液miRNA水平上升,这说明血浆中的miRNA是疾病活动有价值的分子标志物[7]。本研究中的miRNA是测定肿瘤细胞内的水平,比血液中测定能更直接地反映肿瘤组织内miRNA表达水平,其结果和以前研究大体一致。学者报道应用Transwell分析法观察miRNA632对肿瘤转移的影响发现,转染miR-623的肿瘤细胞迁移和侵袭能力明显低于转染miR-623抑制剂的细胞,表明miR-623对乳腺癌细胞的迁移和侵袭具有抑制作用。同时发现转染miRNA632模拟剂明显抑制HCC1937和MCF-7肿瘤细胞的增殖,而miR-623抑制剂则促进其增殖[4,8]。

本组患者中位生存时间为25.6个月,这与既往报道一致[9]。本研究为单中心观察性研究,未能对患者进行动态miRNA水平检测,因此本研究关于miRNA632对三阴乳腺癌预后的影响尚不全面,需要更加严谨、大样本多中心的研究加以证实。