上皮性卵巢癌组织中配对盒基因8、波形蛋白表达与临床病理特征及化疗后复发的关系

李由由, 卢 丹

(扬州大学临床医学院 妇产科, 江苏 扬州, 215000)

上皮性卵巢癌(EOC)是卵巢恶性肿瘤中最常见的类型,病死率位居妇科恶性肿瘤的首位。目前手术治疗和以铂类药物为基础的联合化疗为主要治疗手段[1]。虽然多数患者初次治疗反应较好,但75%的晚期卵巢癌患者3年内会出现肿瘤复发[2], 影响患者生存状态。配对盒基因8(PAX8)是Mullerian管的正常发育所必需的,是促进肿瘤细胞增殖及上皮间质转化的重要介质[3-4]。波形蛋白是中间丝蛋白家族中表达最广泛且高度保守的蛋白质之一,参与肿瘤细胞凋亡、上皮间质转化、血管生成等病理、生理过程[5]。本研究探讨上皮性卵巢癌组织中PAX8、波形蛋白表达水平与临床病理特征及化疗后复发的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

根据纳入及排除标准,选取2018年1月—2021年12月于本院治疗并经病理确诊的86例上皮性卵巢癌患者为研究对象,患者年龄33～75岁,平均(56.1±9.7)岁。纳入标准: ① 术前未接受治疗者; ② 入院后接受手术治疗(全面分期术或肿瘤细胞减灭术)者; ③ 术后接受铂类药物为基础的化疗≥4次者; ④ 临床及术后随访资料完整者。排除标准: ① 术前接受新辅助化疗患者; ② 合并其他肿瘤、严重基础疾病、自身免疫性疾病者; ③ 临床病理资料不完整,未定期复查,失访患者。通过电话、门诊定期复查随访,随访截止时间为2023年1月1日,以患者复发为终点事件,随访期间复发40例,未复发46例; 复发患者均为首次复发,通过临床表现、血清肿瘤标志物测定、超声或CT检查确诊。临床数据资料见表1。

表1 上皮性卵巢癌病例临床资料和病理特征

1.2 免疫组织化学法检测

手术切除标本经福尔马林固定和石蜡包埋,常规将标本均制备成厚度为4 μm的切片,按流程脱蜡至水,使用3%过氧化氢20 min阻断内源性过氧化物酶,随后进行抗原修复,一抗孵育过夜,温度4 ℃。复温后PBS洗涤3次, 3 min/次,加入二抗孵育,使用DAB盒显色,苏木素进行复染,氨水返蓝后冲洗,脱水、透明以及封片。PAX8蛋白定位于细胞核中,其染色阳性表现为棕黄色或褐色颗粒。波形蛋白阳性染色为细胞质内出现淡黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。使用PBS替代一抗为阴性对照。严格按照试剂盒说明书进行操作,试剂盒由福州迈新生物技术开发有限公司提供。本研究获本院伦理委员会批准。

1.3 结果判读

高倍镜视野下根据细胞染色强度与阳性细胞百分比进行综合评分。① 细胞染色强度评分:无色为0分; 淡黄色为1分; 棕色为2分; 棕褐色为3分。② 根据阳性细胞百分比进行评分: 阳性细胞<10%为0分, 10%～50%为1分, >50%～75%为2分, >75%为3分。③ 计算阳性细胞百分比得分与着色强度得分乘积, ≥3分为阳性表达,<3分为阴性表达。结果判读由苏北人民医院2名高年资的病理医师在双盲情况下共同完成。

1.4 观察指标

根据门诊随访结果,通过临床症状评估、影像学检查和糖类抗原125(CA125)水平等来评估肿瘤复发情况。满足下列5项指标中的任意2项可定义为肿瘤复发[6]: ① 肿瘤标志物升高, CA125>35 U/mL为阳性,人附睾蛋白4(HE4)>72 pmol/L为阳性; ② 影像学检查发现肿块; ③ 查体发现肿块; ④ 原因未明的肠梗阻; ⑤ 胸腔积液或腹水。

1.5 统计学方法

使用SPSS 26.0软件进行统计学分析,计数资料用[n(%)]表示,组间差异比较采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 PAX8、波形蛋白在卵巢癌中的表达情况

PAX8定位于细胞核中,其染色阳性者细胞核染成棕黄色(图1); 波形蛋白染色阳性表现为细胞质内出现淡黄色、棕黄色或棕褐色颗粒(图2); 本研究纳入的86例卵巢癌组织中, PAX8呈阳性表达70例,波形蛋白呈阳性表达48例,阳性率分别为81.4%、55.8%。

A: 上皮性卵巢癌中PAX8表达阳性; B: 上皮性卵巢癌中PAX8表达阴性。图1 上皮性卵巢癌中PAX8阳性及阴性表达(免疫组化法,放大100倍)

A: 上皮性卵巢癌中波形蛋白表达阳性; B: 上皮性卵巢癌中波形蛋白表达阴性。图2 上皮性卵巢癌中波形蛋白阳性及阴性表达(免疫组化法,放大100倍)

2.2 PAX8、波形蛋白表达与临床病理特征关系

PAX8、波形蛋白阳性表达均与肿瘤临床分期、腹水、淋巴结转移相关(P<0.05), 见表2、表3。

表2 PAX8在上皮性卵巢癌中表达情况

表3 波形蛋白在上皮性卵巢癌中表达情况

2.3 PAX8、波形蛋白与上皮性卵巢癌化疗后复发关系

截至随访日期,上皮性卵巢癌患者化疗后复发40例,未复发46例,复发率46.5%。复发患者中, PAX8、波形蛋白阳性表达率高于阴性表达率,差异均有统计学意义(P<0.05)。PAX8、波形蛋白共同表达阳性与上皮性卵巢癌复发有显著相关性(P<0.001), 见表4。

表4 PAX8、波形蛋白表达与上皮性卵巢癌化疗后复发的关系[n(%)]

3 讨 论

卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤,尽管近年来卵巢癌的检测方法和治疗手段在不断进步,但由于肿瘤异质性,仍缺乏可靠的早期诊断方法,且治疗后复发率高仍是一个全球性的问题[7-9]。PAX8具有促进细胞增殖、抑制凋亡和终末分化的作用,与胚胎发育、器官的分化有关[10]。同时, PAX8是Mullerian系统组织的重要转录因子,参与了输卵管和子宫上皮的形成过程,在子宫颈和子宫内膜上皮细胞中可见广泛弥散的强染色,而在正常卵巢上皮细胞中几乎不表达[3, 11-12]。相关研究[13-14]表明, PAX8可以与卵巢癌中突变的p53基因结合,导致细胞质p21积累,发挥促癌增殖作用。而敲除PAX8可抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进凋亡的发生。

波形蛋白是一种可以维持细胞骨架的完整性的中间纤维蛋白,是EMT典型标志之一,可使内皮细胞的增生能力增强,血管内皮细胞持续增殖、分裂,促进肿瘤的生长[15-16]。肿瘤侵袭性表型与波形蛋白过度表达呈正相关,并且在体外敲除波形蛋白后这些肿瘤侵袭性特征会下降[17]。本研究发现,上皮性卵巢癌中PAX8、波形蛋白阳性表达与上皮性卵巢癌进展的严重程度和侵袭性生物学行为具有密切联系,提示PAX8、波形蛋白不仅可作为病情诊断的有效指标,还可用作上皮性卵巢癌患者化疗后复发的预测指标。

综上所述,上皮性卵巢癌组织中PAX8和波形蛋白表达与肿瘤临床分期、腹水、淋巴结转移及化疗后复发关系密切,可用于评估病情进展,预测复发,有助于个体化指导临床治疗,临床应加强随访,以期降低复发率,延长患者生存期。但本研究纳入的样本量较少,各层样本筛选的占比差异较大,仍需要进行更深入细致的研究。