一起疑似肉鸭坦布苏病毒与沙门氏菌混合感染诊疗体会

魏雨欣

（山东农业大学，山东 泰安 271018）

鸭坦布苏病毒病又称黄病毒病，是肉鸭常见疾病，10～20 日龄雏鸭多发，产蛋鸭也常见发病，一年四季均可发病，夏秋季多发。以突然发病，精神沉郁，口鼻充满分泌物，采食量和产蛋量大幅下降为主要特征，发病后期会导致共济失调和瘫痪，但该病致死率不高[1]。鸭流感是由A型流感病毒引发的病毒病，主要特征为张口呼吸、咳嗽等呼吸道症状，也可见鼻腔内有粘性或卡他性鼻液。高致病性禽流感表现神经症状并发生急性死亡。鸭腺病毒病是近几年雏鸭常发疾病，易与坦布苏病毒病、流感发生混淆或存在混合感染。鸭从1～40 日龄均可发病，且4 周龄为发病高峰。感染病禽死亡率低，但生长发育不良，且终身带毒。

三种疾病临床特征相似，且易继发大肠杆菌、里莫氏杆菌、沙门氏菌等细菌感染，对山东省肉鸭业造成了严重危害。笔者对一例13 日龄肉鸭的发病情况、临床症状、病理剖检病变进行分析，结合进一步的实验室分子生物学诊断及细菌培养鉴定，病鸭确诊为鸭坦布苏病毒与沙门氏菌混合感染。

1 病例介绍

2022 年11 月，山东某肉鸭养殖场突然发病，其中以2 周龄雏鸭较为严重。病鸭主要表现为精神萎靡，羽毛松散，腹泻，共济失调，眼鼻周围有粘稠分泌物，采食量大幅下降，并有肉鸭死亡。养殖场怀疑鸭群发生禽流感、腺病毒病、鸭坦布苏病毒病或沙门氏菌病，紧急送检，要求对上述疾病进行检测[2]。11 月19 日收录该养殖场病鸭，13 日龄，编号H221118D1。

2 诊断

2.1 病理剖检病变

剖检一只13 日龄肉鸭后，发现雏鸭肝脏肿大发黄，表面有大量出血点、出血斑和针尖样灰白色坏死灶，心内膜条纹状出血且伴随轻微水肿，脾脏肿大变硬。肉鸭鼻腔黏膜上有少量出血点，鼻腔内凝结大量淡黄色粘稠分泌物，少部分析出鼻腔形成结晶，肠道黏膜附有大量粘液且肠黏膜肿胀充血，肠道内有黄绿色内容物，味腥臭。

2.2 坦布苏病毒RT-PCR 检测

取病鸭气管分泌物、肝、脾等组织病料保存备用。将采集病料加入生理盐水后放入高通量组织研磨仪中充分研磨后，置于台式高速冷冻离心机中离心处理，取上清液用以提取核酸。使用FineMag 快速磁珠法病毒DNA/RNA 共提取试剂盒，第二孔加入200 μL 上清液以及20 μL 蛋白酶K，启动核酸提取仪程序 Gf-Y503-G16-VIR，25 min 后从最后一孔中取核酸。配置对应PCR体系后，将体系分为三份，分别加入样品核酸、阴性及阳性对照，通过RT-PCR/PCR 仪扩增，产物通过1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像仪照相。结果显示，坦布苏病毒（DTMUV）检测结果判定为阳性，片段大小483 bp，确诊感染坦布苏病毒。

2.3 腺病毒和禽流感qPCR 检测

与坦布苏病毒核酸提取方法相同，利用快速磁珠法病毒DNA/RNA 共提取试剂盒，加入对应荧光PCR 试剂，通过light cycle 96 型荧光定量PCR 仪扩增，检测CT 值及S 形曲线。结果显示，AIV-H9 及FADV-4 检测结果为阴性，CT 值＞40，且无典型增值曲线。

2.4 细菌分离与培养

无菌条件下，用接种环取病料肝脏组织研磨液，使用三Z 法将接种环涂抹于DHI 培养基上。将培养基放置于37.5 ℃ 恒温培养箱内恒温培养24～36 h，观察是否生长黑色菌落[3]。

图1 结果初步表明此肉鸭感染沙门氏菌。取细菌在胆盐硫乳琼脂平皿培养24 h 后，生长出光滑针尖样大小黑色菌落，符合沙门氏菌特点。取黑色菌落接种于沙门氏菌属显色培养基上，混合色素分别与沙门氏菌和大肠菌群所对应的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在淡黄色平板上沙门氏菌产生品红色的菌落，进一步确定为沙门氏菌感染。

图1 沙门氏菌在DHI 培养基上培养结果

2.5 药敏试验

接种单菌落于生理盐水中混匀，吸取100 μL接种于普通培养基上，用涂布棒涂抹均匀，用K-B 纸片法进行试验[4]，选取氟氧沙星、恩诺沙星、氯霉素、新霉素、头孢喹肟、林可霉素、四环菌素、链霉素八种常用抗生素做药敏试验，测定抑菌环直径。

测定结显示，氟氧沙星抑菌环直径21 mm、恩诺沙星 15 mm、氯霉素 12 mm、新霉素13 mm、头孢喹肟20 mm、林可霉素12 mm、四环菌素3 mm、链霉素2 mm，表明分离细菌对氟苯尼考和头孢喹肟高度敏感，对恩诺沙星、氯霉素、新霉素、林可霉素四种抗生素中度敏感，对四环菌素、链霉素不敏感。

3 分析与防治

3.1 病因分析

根据检测结果，诊断该病例确诊为鸭坦布苏病毒和沙门氏菌混合感染[5]，分析该病发生原因，主要是雏鸭早期未进行鸭坦布苏病毒疫苗免疫，同时秋季气温骤降，导致雏鸭抵抗力下降。除此之外，养殖场进一步检测后发现，雏鸭存在沙门氏菌垂直感染。

3.2 加强管理

鸭坦布苏病毒病发病具有明显的季节特征，6～8 月的夏季发病较少，9～11 月的秋季发病较多。主要原因是鸭坦布苏病毒靠节肢动物（蚊子、蜱）传播，秋天正是蚊子和蜱繁殖生长的高峰期，鸭坦布苏病毒喜冷，病毒繁殖力增强，以致病原多、传播能力强[7]。为预防秋季禽类发病，各地应加强保暖措施，及时通风，加强饲养管理以增强动物抵抗力，同时严格进行消毒，杀灭养殖场周围蚊虫及野鸟野鼠，防止野生动物将病毒传染给鸭群。针对发病养殖场，建议采用鸭坦布苏病毒灭活疫苗或活疫苗紧急免疫，对发病鸭群隔离，及时淘汰病残鸭、重症鸭，并进行无害化处理。加强卫生消毒，可以采用0.025%的百毒杀、0.3%的过氧乙酸、0.1%的新洁儿灭或0.1%～0.2%的聚维酮碘带禽消毒。

3.3 药物治疗

对未感染及轻度病症的鸭进行紧急免疫，雏鸭接种病毒后能快速产生中和抗体以抵抗感染并迅速清除病毒。同时在饲料或饮水中添加敏感抗生素和黄芪多糖治疗[6]，抗生素建议使用氧氟沙星和头孢喹肟。5 d 后回访得知，养殖场及时对病残鸭进行无害化处理并隔离，使用氟氧沙星治疗轻、中度症状鸭群。经过紧急免疫，鸭群病情已明显好转，未造成重大损失。

4 体会

近年来，鸭坦布苏病毒在我国东南沿海地区呈现发展蔓延趋势，应引起高度重视。研究结果表明，坦布苏病毒对雏鸭危害很大，雏鸭感染病毒后食欲明显下降，腹泻，排黄白色稀粪，第5天时出现神经症状，部分雏鸭急性死亡，死亡率高达22.5%[8]。除此之外，鸭坦布苏病毒也对蛋鸭行业产生巨大冲击。据统计，感染鸭坦布苏病毒的高产蛋鸭平均产蛋量下降至原产蛋量的20%～30%[9]，经过治疗也难以达到之前水平，给养殖户造成巨大经济损失。因此对于规模化养殖场，建议早期进行免疫，做好免疫预防工作。同时建立完善监测体系，尽早发现，尽早采取措施，以防止疾病导致鸭群免疫力大幅下降，从而继发感染其他病菌。

对已经继发感染其他病菌的群体，一定要结合实际生产经验，选择敏感药物治疗并定期更换药物，以防产生耐药性。药物防治只能减少发病情况，无法清除病原，存在垂直感染的鸭场应尽量选择全群淘汰，减少后续损失。对病禽及其粪便进行无害化处理后，需要对禽舍喷淋消毒；淘汰畜禽时使用的转运车、转运筐等也要清洗后彻底消毒或废弃，以防病原传播造成传染病暴发。