潍坊地区肉鸡场料袋和料线中微生物污染的调查分析

袁东芳

（山东畜牧兽医职业学院，山东 潍坊 261061）

饲料的安全和卫生状况直接影响鸡群的健康，随着养鸡业规模化、标准化发展，饲料污染问题日益受到养殖者的重视。但受现有认知水平和技术的局限，饲料的微生物污染现象仍然普遍存在[1]。致病微生物污染饲料是影响饲料质量安全的重要因素[2]，微生物污染会使饲料形状发生变化，降低鸡群的采食量，减缓鸡群的生长速度，还会破坏鸡体的肠道菌群平衡，致使有害菌损害肠道黏膜发育，引起鸡体免疫功能下降，甚至会导致鸡体发生腹泻和免疫低下，诱发鸡群发生疾病，严重者直接引起鸡只死亡[3]。已有学者和机构对饲料原料、动物饲料霉菌毒素的污染现状作了研究[1-5]，本研究针对采集于潍坊不同地区的商品肉鸡场料袋和料线中480 份饲料样品的细菌总数、霉菌总数、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌以及黄曲霉毒素B1、伏马毒素、呕吐毒素、玉米赤酶烯酮含量进行系统分析，阐明料袋和料线中饲料微生物污染与饲料储存时间、储存条件及料线管理的关系，以引起肉鸡场对鸡饲料质量安全的关注。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验鸡场情况 在潍坊高密、寒亭、安丘地区的3 个肉鸡场了解鸡场规模、鸡的品种、饲料类型、用料方式、饲料管理、料线管理及是否做过饲料卫生监测等情况（表1），高密鸡场记为1 场、寒亭鸡场记为2 场、安丘鸡场记为3 场，分别对每个鸡场在进鸡后的第1 天、第30 天进行料袋和料线中饲料样品的采集。

表1 鸡场基本情况

1.1.2 主要试剂及仪器 营养琼脂培养基、察氏琼脂培养基、缓冲蛋白胨水（BPW）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、氯化镁孔雀绿（RV）增菌液、沙门氏菌显色培养基，均购自北京陆桥有限责任公司；AgraQuant 真菌毒素酶联免疫检测试剂盒，购自Romer Labs；DHP-9272B 恒温培养箱，购自上海一恒科学仪器有限公司；SPX-150B-Z 生化培养箱，购自上海博迅医疗生物仪器股份有限公司；iDplus Confidence 基质辅助激光电离飞行时间质谱仪，购自日本岛津；Multiskan Fc 酶标分析仪，购自赛默飞世尔科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 样品采集及检测试验设计 随机采样，每次每场料袋样品20 份、料线样品60 份，共计采集样品480 份；其中对所有样品均进行细菌、霉菌检测，料袋样品再进行霉菌毒素检测。

1.2.2 样品的采集及处理 饲料样品按照GB/T 14699.1[6]标准采集，避免样品污染。进行细菌、霉菌数目检测的样品按照GB/T 20195-2006[7]标准处理；进行霉菌毒素检测的样品按照AgraQuant真菌毒素酶联免疫检测试剂盒的要求处理。

1.2.3 饲料细菌、霉菌数目的测定 按照GB/T 13093、GB/T 13092、GB 4789.10[8-10]标准检测饲料中细菌总数、霉菌总数和金黄色葡萄球菌；按照GB/T 13091[11]进行沙门氏菌检测的前期增菌和初步鉴定，利用基质辅助激光电离飞行时间质谱仪进一步鉴定沙门氏菌。

1.2.4 霉菌毒素含量的测定 利用AgraQuant 真菌毒素酶联免疫检测试剂盒检测饲料中黄曲霉毒素B1、伏马毒素、呕吐毒素、玉米赤酶烯酮的含量。

1.2.5 统计分析 利用SPSS Statistics 19.0 统计分析软件进行数据分析，多重比较用LSD 法进行，试验数据用平均值表示，并进行差异性分析。

2 结果

2.1 饲料中细菌总数、霉菌总数、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的检测

同一鸡场同一类同一次样品中的细菌总数、霉菌总数、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌检测结果见表2。分析可知，1 场30 d 料袋样品中细菌总数、霉菌总数明显高于1 d 料袋样品；1 d 料袋样品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均未检出，30 d料袋样品中检出金黄色葡萄球菌1 CFU/g。30 d料袋样品2 场细菌总数、霉菌总数明显低于1、3场。1、2、3 场30 d 料线样品中细菌总数、霉菌总数明显高于1 d 料线样品，并且1 d、30 d 料线样品中细菌总数、霉菌总数均明显高于料袋样品；2 场1 d、30 d 料线样品的细菌总数、霉菌总数均明显低于1、3 场。

表2 不同鸡场饲料中细菌、霉菌检测结果（CFU/g）

2.2 饲料中黄曲霉毒素B1、伏马毒素、呕吐毒素、玉米赤酶烯酮的含量

同一鸡场同一次样品中的黄曲霉毒素B1、伏马毒素、呕吐毒素、玉米赤酶烯酮的含量检测结果见表3。结果显示，1、3 场30 d 黄曲霉毒素B1、伏马毒素、呕吐毒素和玉米赤酶烯酮含量均明显高于1 d；2 场30 d 样品中4 种毒素含量与其1 d 样品无差异；1 d 样品2 场黄曲霉毒素B1、玉米赤酶烯酮含量明显低于1、3 场，30 d样品2、3 场4 种毒素含量均明显低于1 场，30 d样品2 场4 种毒素含量均明显低于3 场。

表3 饲料中霉菌毒素含量

3 讨论

目前对肉鸡场全价饲料中细菌总数、霉菌总数和沙门氏菌含量没有明确的规定，但是GB 13078-2017[12]饲料卫生标准规定了饲料原料中细菌总数要小于2×106CFU/g，霉菌总数小于2×104CFU/g，饲料中沙门氏菌不得检出。1、2、3 场料袋饲料细菌总数、霉菌总数均符合标准，但料线30 d 样品细菌总数、霉菌总数均超过此标准；1 场30 d 料袋样品，1、3 场1 d 料线样品，3 个场30 d 料线样品中沙门氏菌均超标；对于细菌总数、霉菌总数没有超标的样品，其检测结果还是需要引起养殖场的高度注意，因为细菌、霉菌的大量繁殖会分泌多种毒素协同加剧对畜禽消化系统、生殖系统等的危害[13]，影响畜禽健康，给畜禽业造成巨大损失[14]。

1 场30 d 料袋样品中细菌总数、霉菌总数明显高于1 d 样品，2、3 场差异不明显，可能与1场料袋饲料一直在场内储存，没有经过定期卫生监测，2、3 场饲料是定期运送进场的，未经过长时间储存有关；2 场30 d 料袋样品中的细菌总数、霉菌总数明显低于3 场，是因为2 场非常重视饲料的管理，饲料储存在通风良好、不潮湿、不漏雨的仓库内[3,15-16]，定期进行饲料卫生监测，3 场饲料储存条件相对较差，储存环境潮湿、易结块；1、2、3 料线样品中细菌总数均明显高于其料袋中的样品，由于舍内料线清洁消毒不彻底，造成饲料污染，1、2、3 场30 d 料线样品中细菌总数、霉菌总数分别明显高于1 d 料线样品，是由于在养殖过程中料线未定期及时清洁、消毒处理，所以随着养殖时间的延长，微生物污染更为严重；2 场1 d 料线样品细菌总数、霉菌总数明显低于1、3 场，是由于2 场对料线的管理严格，上鸡前料线清洁消毒彻底，并进行严格的饲料管理[15-16]；2 场30 d 料线样品细菌总数、霉菌总数明显低于1、3 场，由于1 场饲料已储存较长时间、饲料本身已被污染，加之养殖期间1、3 场不定期清洁料线，而2 场定期进行饲料卫生监测，定期清洁料线，从而减少了料线对饲料的污染。

GB 13078-2017 饲料卫生标准对饲料中霉菌毒素的含量作了明确规定，1、2、3 场1 d 样品中4 种霉菌毒素均不超标，1 场30 d 样品中4 种霉菌毒素均超标，3 场30 d 样品中玉米赤酶烯酮含量超标；1 场30 d 样品中4 种霉菌毒素含量明显高于1 d，由于饲料贮存时间太久，霉菌大量繁殖，产生大量霉菌毒素；3 场30 d 样品中4 种霉菌毒素含量明显高于1 d，由于场区对饲料管理不重视，饲料储存在较潮湿的环境下，在贮存使用过程中，加重了霉菌的污染[3]；2 场1 d 样品黄曲霉毒素B1、玉米赤酶烯酮含量明显低于3场，与2 场对饲料管理的高度重视、饲料的储存条件密切相关[3,15-16]。

4 结论

1 场饲料储存30 d 微生物污染情况比2、3场饲料储存10 d 严重，说明肉鸡场饲料储存时间过久，严重增加了微生物对饲料的污染；1、3 场比2 场饲料微生物污染严重，说明对饲料管理的重视程度、饲料的储存条件非常重要，要定期开展饲料卫生监测，选择通风良好、不潮湿、不漏雨、不渗水的仓库储存，避免饲料受潮发生霉变；3 个场料线随着养殖时间的延长，对饲料的污染加重，2 场料线饲料微生物污染情况明显低于1、3 场，说明在养殖过程中不能忽视料线的管理，定期对料线进行清洁消毒非常重要。