全自动妇科分泌物分析系统在阴道微生态评价中的应用效果分析*

黄宇飞,马 芬,刘 琛,张咪咪

1.广东省深圳市光明区妇幼保健院检验科,广东深圳 518107;2.中国科学院大学深圳医院(光明)检验科,广东深圳 518107

正常情况下,阴道内存在着多种微生物,与宿主阴道环境间互相依赖、制约,形成动态生态平衡,而在体内外各种因素的影响下,阴道微生态的平衡被打破、菌群发生变化,可引发各种阴道炎症。白带异常、阴道瘙痒、灼痛、异味等为阴道炎的主要临床表现[1]。阴道炎常见类型为外阴真菌性阴道炎、细菌性阴道炎(BV)、滴虫性阴道炎、需氧菌性阴道炎等,也可能存在合并感染,临床常通过阴道分泌物检查进行诊断。随着临床检验技术的发展,妇科分泌物检测趋向全自动化,全自动妇科分泌物分析系统可对有形成分进行自动镜检,并使用干化学法对pH值、过氧化氢、乳酸、唾液酸苷酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、白细胞酯酶(LE)等进行检测来反映阴道微生态的改变。而通过形态学和功能学综合评价阴道微生态能提升阴道炎的检出率[2-3]。本研究通过对全自动妇科分泌物分析系统与镜检法进行比较,评估全自动妇科分泌物分析系统在阴道微生态评价中的应用价值,以期为临床诊治阴道炎提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2021年9月至2022年4月于深圳市光明区妇幼保健院和中国科学院大学深圳医院进行全自动妇科分泌物检查的307例患者为研究对象,年龄19～48岁,平均(32.24±4.52)岁。研究对象自述有阴道白带增多或异常、阴道瘙痒等症状。排除血性标本,经期和绝经期女性。研究对象检查前1周内无口服和阴道用药,检查前3 d未使用阴道润滑剂、无性生活及阴道灌洗。两所医院医学伦理委员会批准本研究且患者知情同意。

1.2仪器与试剂 迪瑞GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统及其配套试剂、日本奥林巴斯CX-43生物显微镜、上海三爱思试剂有限公司的pH值为3.8～5.4的精密试纸、珠海贝索生物技术有限公司的革兰染色液。

1.3方法 由妇科门诊医生以清洁、干燥的专用无菌拭子于阴道后穹窿采集两份标本,一份分泌物置入专用的稀释液试管中用于全自动妇科分泌物分析系统检测,另一份直接放置于试管中用于湿片镜检和干片革兰染色镜检(立即送检)。检验人员将标本制成厚薄适宜的涂片,理想浓度为25～30个细胞/高倍镜,细胞分布均匀。使用显微镜进行湿片镜检,具体操作严格参照《全国临床检验操作规范(第4版)》[4]执行。待涂片干燥固定后,进行革兰染色,再次镜检。人工镜检由两名具有丰富镜检经验的检验人员独立判定,结果不一致时由第3人进行镜检,取3人中2人一致的结果作为最终结果。

1.4判断标准

1.4.1镜检法 镜检法评估标准:(1)白细胞、杆菌、上皮细胞用于阴道清洁度判断。Ⅰ度为有大量的杆菌及满视野上皮细胞,无球菌,白细胞0～5个/高倍镜;Ⅱ度为中等量杆菌及1/2视野上皮细胞,白细胞>5～15个/高倍镜;Ⅲ度为少量杆菌及上皮细胞,较多球菌,白细胞>15～30个/高倍镜;Ⅳ度为未发现杆菌及上皮细胞,大量球菌,白细胞>30个/高倍镜。将Ⅰ度和Ⅱ度判定为阴性,Ⅲ度和Ⅳ度判定为阳性。(2)真菌、滴虫阳性为分别查见真菌孢子或菌丝、滴虫。(3)白细胞阳性为白细胞>15个/高倍镜。(4)乳酸杆菌阳性为乳酸杆菌样革兰阳性杆菌≥6个/高倍镜。

BV的诊断标准:(1)革兰染色镜检法下,采用Nugent评分判定(0～3分为阴道菌群正常,>3～6分为中间型,>6分为BV阳性)[5]。(2)湿片镜检法在阴道分泌物中见到线索细胞且符合下述条件中任意两项者,可诊断为BV[6]。①稀薄均质的阴道分泌物,黏附于阴道壁但易于擦拭;②阴道分泌物pH值大于4.5;③氨气味试验阳性。

1.4.2全自动妇科分泌物分析系统 自动镜检为对有形成分自动识别、分类。阴道清洁度判断标准同镜检法。干化学法评估标准:(1)LE为+～+++表示阳性,提示有炎症。(2)N-乙酰氨基己糖苷酶(NAG)为(±)和(+)表示阳性;阳性且pH值≥4.8提示滴虫性阴道炎;阳性且pH值≤4.6提示真菌性阴道炎。(3)唾液酸苷酶或脯氨酸氨基肽酶为(±)和(+)表示阳性,提示BV。(4)过氧化氢或乳酸为(-)或(±)表示有大量或中量乳酸杆菌存在,过氧化氢或乳酸(+)提示阴道菌群失调。

1.5观察指标 比较全自动妇科分泌物分析系统、革兰染色镜检、湿片镜检的检测结果,比较清洁度结果、对病原体检出情况以及准确性。以革兰染色镜检为金标准,对湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统在外阴真菌性阴道炎、BV、滴虫性阴道炎中的诊断效能进行分析。

1.6统计学处理 采用SPSS23.0软件进行统计分析,计数资料以例数或百分率表示,组间比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.13种方法检测阴道清洁度结果的比较 革兰染色镜检、湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统检测阴道清洁度的结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3种方法检测阴道清洁度结果的比较

2.23种方法病原微生物检出率比较 全自动妇科分泌物分析系统对白细胞、念珠菌、线索细胞、滴虫、乳酸杆菌的检出率均高于革兰染色镜检和湿片镜检,但两两组间对比,白细胞、念珠菌、线索细胞及乳酸杆菌检出率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。全自动妇科分泌物分析系统与革兰染色镜检、全自动妇科分泌物分析系统与湿片镜检的滴虫检出率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3种方法病原微生物检出率比较[n(%)]

2.3湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统对外阴真菌性阴道炎的诊断效能 以革兰染色镜检为金标准,全自动妇科分泌物分析系统对外阴真菌性阴道炎的检出率高于革兰染色镜检,而湿片镜检检出率低于革兰染色镜检。全自动妇科分泌物分析系统诊断外阴真菌性阴道炎的灵敏度、符合率、阴性预测值、误诊率较湿片镜检高,而特异度、阳性预测值、漏诊率较湿片镜检低。见表3～4。

表3 湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统对外阴真菌性阴道炎的判定结果比较(n)

表4 湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统对外阴真菌性阴道炎的诊断效能分析(%)

2.4湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统对BV的诊断效能 以革兰染色镜检为金标准,全自动妇科分泌物分析系统对BV的检出率高于革兰染色镜检,而湿片镜检检出率低于革兰染色镜检。全自动妇科分泌物分析系统诊断BV的灵敏度、符合率、阴性预测值、误诊率较湿片镜检高,而特异度、阳性预测值、漏诊率较湿片镜检低。见表5～6。

表5 湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统对BV的判定结果比较(n)

表6 湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统对BV的诊断效能分析(%)

2.5湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统对滴虫性阴道炎的诊断效能 以革兰染色镜检为金标准,全自动妇科分泌物分析系统对滴虫性阴道炎的检出率高于革兰染色镜检,而湿片镜检的检出率与革兰染色镜检相同。全自动妇科分泌物分析系统诊断滴虫性阴道炎的特异度、符合率、阳性预测值较湿片镜检法低,而误诊率较湿片镜检高,二者灵敏度、阴性预测值、漏诊率持平。见表7～8。

表7 湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统对滴虫性阴道炎的判定结果比较(n)

表8 湿片镜检和全自动妇科分泌物分析系统对滴虫性阴道炎的诊断效能分析(%)

3 讨 论

在临床阴道微生态检测中,全自动妇科分泌物分析系统可对有形成分进行自动镜检,摄制图片,与干化学法共同评价阴道微生态状况。有研究表明,显微镜湿片镜检与干化学法联合检测具有一定互补性,可提高阴道炎的检出率,避免漏检[7-9]。

本研究结果显示,全自动妇科分泌物分析系统、革兰染色镜检和湿片镜检3种方法对白细胞、念珠菌、线索细胞及乳酸杆菌检出率比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而对滴虫检出率比较,差异有统计学意义(P<0.05),值得进一步探究。检测LE的活性可间接反映白细胞的含量[10],弥补了白细胞被破坏所导致的镜下漏检,但其活性与被破坏的多个核细胞数量及破坏程度有关,当白细胞膜破坏不严重时可导致LE试验出现假阴性。可见镜检和全自动分析系统的LE检测各有优点和局限性,互补性高,因此结合全自动镜检和干化学法的结果,可提高白细胞的检出率。乳酸杆菌形态各异,与革兰阳性棒状杆菌在镜检下不易区分,通过检测过氧化氢和乳酸间接反映乳酸杆菌的数量可避免部分漏检和误检。有研究指出,5%的乳酸杆菌不产生过氧化氢,造成过氧化氢的检出率低于常规镜检染色[11],而全自动妇科分泌物分析系统通过自动镜检及过氧化氢、乳酸联合检测判断乳酸杆菌,提高了检出率。

拟杆菌和普雷沃菌产生的唾液酸苷酶和加德纳菌、动弯杆菌产生的脯氨酸氨基肽酶是BV、外阴真菌性阴道炎的间接反映指标[12]。本研究以革兰染色镜检结果为金标准,将全自动妇科分泌物分析系统与湿片镜检对BV的诊断效能进行比较,前者的灵敏度较高、特异度较低,符合率较高、阳性预测值较低、阴性预测值较高、误诊率较高、漏诊率较低。需要注意,血性物质在脯氨酸氨基肽酶作用下产生胺类物质,使干化学法检测结果出现假阳性[13],而全自动妇科分泌物分析系统采用自动镜检与唾液酸苷酶及脯氨酸氨基肽酶两种酶联合诊断BV,有效弥补单一酶检测应用缺陷以及血性标本的检测问题。

本研究中全自动妇科分泌物分析系统与湿片镜检对外阴真菌性阴道炎的诊断效能,与二者对BV的诊断效能相近。NAG为白色念珠菌和滴虫分泌的特异性酶,二者的判别是根据NAG结合pH值,pH值对其判定影响大,使特异度受到影响,本研究结果与王岩等[14]研究的外阴真菌性阴道炎患者存在阴道pH值升高的观点相符。分析原因为外阴真菌性阴道炎合并BV、需氧菌性阴道炎等导致pH值升高。另一原因为外阴真菌性阴道炎患者以非产过氧化氢为主的革兰阳性杆菌为优势菌,产过氧化氢的能力显著下降导致乳酸杆菌对致病菌抑制能力减弱影响阴道内环境。NAG的判断受不同念珠菌的影响,白色念珠菌和热带念珠菌产生NAG,而光滑念珠菌和克柔念珠菌等不产生NAG[15],而镜检中受细胞碎片、小红细胞、镜下白细胞和上皮细胞过多的影响导致结果不准确。结合以上原因,全自动妇科分泌物分析系统联合镜检和NAG诊断外阴阴道假丝酵母菌,互补性高,有效提高灵敏度和特异度。

在307例标本中,革兰染色镜检和湿片镜检均检出滴虫7例,符合率为100.00%,与邓晶荣等[16]研究的革兰染色对滴虫的检出率略低于生理盐水法的结果不同,可能原因为本研究中滴虫检出例数较少且镜检由2～3名检验人员进行判定,提高了符合率。本研究中,全自动妇科分泌物分析系统与湿片镜检对滴虫性阴道炎的诊断效能比较,特异度较低、符合率较低、阳性预测值较低,误诊率较高。滴虫的活动性使得滴虫在镜下更容易检出,而全自动妇科分泌物分析系统不能取代湿片镜检。有研究表明,干化学法可不受分泌物标本温度和离体时间的影响,可以弥补镜检在温度低和离体时间长时滴虫检出率下降的欠缺[17]。因此,全自动妇科分泌物分析系统自动镜检与干化学法中依据NAG和pH值判定滴虫性阴道炎的结果不一致时,应进行人工复检,以镜检结果为金标准,综合分析,提高符合率。

综上所述,全自动妇科分泌物分析系统操作简便、快速,通过形态学和功能学综合评价阴道微生态,与镜检结果的一致性较好,省时省力,且降低主观因素的影响,为阴道炎的诊断、分型、治疗及预后评价提供有效的临床依据。当自动镜检和干化学法结果不一致时,特别是在滴虫的判断上,要进行人工镜下复检,保证临床检测结果的准确性。