北苍术不同炮制品挥发油体外抗氧化比较研究

陈城剑　于妮娜　耜华兵　杨湘浙　宁锡隆

北苍术不同炮制品挥发油体外抗氧化比较研究

陈城剑于妮娜耜华兵杨湘浙宁锡隆

（吉林农业科技学院吉林吉林132109）

试验运用古法炮制，通过炒黄、炒焦、蒸制、土炒、麸炒五种不同炮制方法对北苍术进行处理，利用DPPH法、邻苯三酚法、水杨酸法对北苍术不同炮制品挥发油提取物的抗氧化能力进行测试，结果表明：北苍术不同炮制品挥发油提取物均具有一定的抗氧化能力，并随着浓度不断增大呈现一定的量效关系。其中，生品的抗氧化性要强于其他炮制品。由此可见，北苍术挥发油提取物可以作为中药抗氧化剂应用于化妆品、食品等领域。

北苍术；炮制品；挥发油；抗氧化

北苍术［(DC.)Koidz］是一种菊科苍术属多年生草本植物，别名山刺草、枪头菜，通常以干燥根茎入药。北苍术属于化湿类药物，其药性辛、苦、温，临床研究发现该药物具有燥湿健脾、祛风除湿、发表、明目等一系列功效。作为常用药之一的北苍术，最早被记载于东汉时期的《神农本草经》中，该药被列为上品。《本草备要》《名医别录》《医方集解》《普济方》《炮炙大法》等著作中均有相关记载。北苍术野生资源较多，主要产地有河北、吉林、内蒙古等地。北苍术挥发油主要含有苍术多糖、β-桉叶醇、苍术酮、倍半萜类物质等化学成分[1]。近年来，药理研究表明北苍术挥发油有降血压、利尿、抗菌、解痉、镇痛、抗病毒等诸多优点。北苍术主要炮制手段有土炒苍术、米泔水制苍术、清炒苍术、焦炒苍术、炭炒苍术、麸炒苍术、盐苍术、醋苍术、蒸制苍术等多种方法。2020年版《中华人民共和国药典》中主要收录麸炒苍术[2]。目前国内对苍术麸炒制品研究较多，而其他炮制方法研究甚少，本试验选取五种炮制方法对北苍术进行炮制，并进一步探索其挥发油在炮制前后抗氧化作用的变化，为开发北苍术的相关产品提供一定的理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

试验所用北苍术采自吉林市左家镇吉林农业科技学院药植园；试剂包括1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、无水乙醇、三羟甲基氨基甲烷、浓盐酸、乙二胺四乙酸二钠、邻苯三酚、水杨酸、过氧化氢、硫酸亚铁，均为符合国家标准的分析纯试剂。

试验仪器包括新型密闭式粉碎机（西安宝正实业有限公司）、电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）、DZTW调温电热套（北京市永光明医疗仪器有限公司）、超声波清洗机（宁波新艺超声设备有限公司）、紫外分光光度计（上海奥谱勒仪器有限公司）、二号筛（绍兴市上虞华丰五金仪器有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 不同北苍术炮制品的制备

称取北苍术样品100 g，去除杂质，清洗干净，浸润透彻，切等厚片，干燥后得北苍术片备用。

麸炒苍术：按麸炒法规定进行炮制。热锅中加入适量麦麸，麦麸起烟时投入北苍术片，表面炒至深黄色，具有焦香气味时取出，过筛，放凉备用。

焦苍术：称取适量北苍术片放入炒锅中，中火加热炒至表面焦褐色，喷淋少许清水再文火炒干，过筛，放凉备用。

土炒苍术：炒锅中放置适量土粉，中火加热投入北苍术片，炒至表面呈黄褐色，取出过筛，晾凉备用。

炒黄苍术：称取适量北苍术片放入炒锅中，小火加热炒至表面黄褐色，取出过筛，晾凉备用。

蒸制苍术：取适量北苍术片置于蒸制容器中蒸制20 min，取出晾凉备用[3-4]。

1.2.2 不同北苍术炮制品挥发油的提取

精确称量40 g经过炮制的北苍术样品，置于500 mL圆底烧瓶中，加入300 mL蒸馏水后加入沸石振荡摇匀。连接挥发油提取器，圆底烧瓶置于恒温加热套中加热至微沸状态，持续提取5 h至挥发油体积不变，进行准确读数，之后放入避光、密闭、低温环境保存。试验以北苍术生品为对照，按前述方法同样提取挥发油并保存。

1.3 体外抗氧化能力测定

1.3.1 DPPH自由基清除能力检测

采用DPPH法测定不同北苍术炮制品挥发油提取物清除DPPH自由基的能力[5]。

用无水乙醇配制浓度分别为7 mg/mL、14 mg/mL、21 mg/mL、28 mg/mL、35 mg/mL的北苍术挥发油样品溶液。各取2 mL样品溶液，加入0.05 mg/mLDPPH乙醇溶液1 mL，混合均匀，在室温（25 ℃）下避光放置20 min，充分反应。于517 nm处测定其吸光度值，以VC为阳性对照，无水乙醇为空白对照。DPPH自由基清除率按照式（1）计算。

清除率=（0－）/0×100% （1）

式（1）中，0为无水乙醇的吸光度；为样品溶液吸光度。

1.3.2 超氧阴离子自由基清除能力检测

采用邻苯三酚法测定不同北苍术炮制品挥发油提取物清除超氧阴离子自由基的能力[6]。

邻苯三酚溶液：量取1.95 mLTris-HCl缓冲液，加入0.05 mL邻苯三酚溶液，于325 nm处测定吸光度，每隔30 s读数一次，直到300 s为止。此时的△为△0。

样品溶液：配制浓度为5 mg/mL、10 mg/mL、15 mg/mL、20 mg/mL、25 mg/mL的北苍术挥发油样品溶液。取1 mL样品溶液，依次加入1.95 mLTris-HCl缓冲液、0.05 mL邻苯三酚溶液，于325 nm处测定吸光度，每隔30 s读数一次，直到300 s为止。以VC为阳性对照组。此时的△为△样。超氧阴离子自由基清除率按照式（2）计算。

清除率=（△0－△样）/△0×100% （2）

式（2）中，△0=0,325nm,300s－0,325nm,30s，△样=样,325nm,300s－样,325nm,30s。

1.3.3 羟基自由基清除能力检测

采用水杨酸法测定不同北苍术炮制品挥发油提取物清除羟基自由基的能力[6]。

取样品溶液mL（=0.05、0.1、0.15、0.2、0.25），加入（0.4－）mL无水乙醇，再加入0.2 mL乙醇-水杨酸缓冲液、0.2 mLFeSO4溶液、0.2 mLH2O2溶液，迅速混合均匀，于510 nm处测量吸光度，以VC为阳性对照，无水乙醇为空白对照。羟基自由基清除率按照式（1）计算。

2 北苍术不同炮制品挥发油提取物抗氧化能力测定结果分析

2.1 北苍术不同炮制品挥发油提取物对DPPH自由基的清除能力

北苍术不同炮制品挥发油提取物对DPPH自由基的清除作用测定结果如图1所示。

图1　DPPH法不同炮制品挥发油提取物清除率的比较

由图1可知，在7 mg/mL～35 mg/mL范围内，北苍术不同炮制品挥发油提取物的浓度与清除率呈良好的量效关系，当浓度达到35 mg/mL时，不同炮制品展现的DPPH自由基清除率也差异明显，生品清除率为72%，与VC清除率83%较接近。不同炮制品清除DPPH自由基的能力为：VC＞生品＞麸炒＞炒黄＞蒸制＞土炒＞炒焦。

2.2 北苍术不同炮制品挥发油提取物对超氧阴离子自由基清除能力

北苍术不同炮制品挥发油提取物对超氧阴离子自由基清除作用测定结果如图2所示。

图2　邻苯三酚法不同炮制品挥发油提取物清除率的比较

由图2可知，北苍术的不同炮制品对超氧阴离子自由基均具有一定的清除能力，且其清除率在一定的浓度范围内（5 mg/mL～25 mg/mL）呈良好的量效关系，随着北苍术不同炮制品挥发油样品液浓度的依次递增，所展现的超氧阴离子自由基清除率也均是出现上升趋势。不同炮制品挥发油提取物对超氧阴离子自由基清除能力大小为：VC＞生品＞麸炒＞蒸制＞炒黄＞炒焦＞土炒。

2.3 北苍术不同炮制品挥发油提取物对羟基自由基清除能力

北苍术不同炮制品挥发油提取物对羟基自由基清除作用测定结果如图3所示。

图3　水杨酸法不同炮制品挥发油提取物清除率比较

由图3可知，北苍术的不同炮制品对羟基自由基均具有一定的清除能力，且其清除率在一定的浓度范围内（5 mg/mL～25 mg/mL）呈良好的量效关系，随着北苍术不同炮制品挥发油样品液浓度的依次递增，所展现的羟基自由基清除率也均是呈现上升趋势。且生品对羟基自由基的清除能力，随着浓度的不断升高，要优于阳性对照品VC。不同炮制品挥发油提取物对羟基自由基清除能力大小为：生品＞VC＞麸炒＞蒸制＞炒黄＞土炒＞炒焦。

3 结论

本文通过三种方法将北苍术不同炮制品和生品的挥发油提取物与VC对自由基的清除效果进行比较。试验结果表明：北苍术挥发油提取物清除自由基所体现的抗氧化能力随着其浓度的增大而不断增强。DPPH法中，各炮制品和生品的挥发油提取物对DPPH自由基的清除能力不如VC，同时，生品对DPPH自由基的清除能力要强于炮制品，炒焦最弱。邻苯三酚法中，北苍术不同炮制品和生品的挥发油提取物对超氧阴离子自由基清除能力不如VC，其中生品最强，土炒最弱。在水杨酸法中，生品对羟基自由基的消除作用要强于VC，炒焦最弱。同时可以发现，北苍术不同炮制品与生品比较下，生品抗氧化能力最优。北苍术中主要含有挥发油成分，炮制后其所含挥发油中的苍术素、苍术素醇的含量均有所降低，对其功效具有一定的影响，这可能是生品的抗氧化性强于炮制品的原因之一。综上所述，研究北苍术的抗氧化作用宜优先选用生品。

[1]李涵,金香环,赵百慧,等.北苍术的化学成分及药理活性的研究进展[J].吉林农业,2019(3):72-73.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2020年版一部[M].北京:中国医药科技出版社,2020.

[3]赵娟,王科,杨帆.不同炮制方法对苍术中苍术素含量及苍术特征图谱的影响[J].中南药学,2021,19(4):719-723.

[4]樊志强.不同炮制方法对苍术中有效成分的影响[J].农业科技与装备,2021(2):59-60.

[5]范琳,王苗,马馨桐,等.葛根抗氧化活性有效部位的筛选研究[J].食品研究与开发,2021,42(6):119-123.

[6]李昕,张海容.穿地龙提取液清除氧自由基能力比较研究[J].广州化工,2017,45(23):100-102.

10.3969/j.issn.2095-1205.2023.08.02

R284.1

A

2095-1205(2023)08-05-03

吉林省高等学校大学生创新创业训练计划项目（SJ2022078）

陈城剑（2002—），男，汉族，浙江台州人，本科在读，研究方向为中药分析。

于妮娜（1984—），女，汉族，吉林长春人，硕士研究生，讲师，研究方向为中药分析。