HPV检测与肿瘤标志物检测在卵巢癌诊断中的价值

朱大柱 程凌利 中国人民解放军联勤保障部队第90医院,福建省泉州市 36000; 泉州市第一人民医院

卵巢肿瘤是一种在临床治疗中较为常见的女性生殖疾病,近年来恶性卵巢肿瘤的发病率呈逐年升高,仅次于宫体癌和宫颈癌,且其死亡率占首位[1]。卵巢位于女性盆腔的深部,缺乏行之有效的筛查方法,大部分患者首次就诊已是晚期。研究[2]发现,卵巢癌Ⅰ期患者5年生存率高达90%,而卵巢癌晚期患者下降至30%,绝大多数患者错过了治疗时机。因此,早期的诊断与治疗有助于提高卵巢癌患者的生存率。人类乳头瘤病毒(HPV)可根据其致病性分为低危型和高危型两大类。研究[3]发现,超过90%的卵巢癌患者与HPV的高危型有关。肿瘤标志物通常在正常组织中低表达或不表达,以此特性用于早期肿瘤疾病的诊断、治疗及预后评估等。目前临床出现较多的肿瘤标志物用于诊断卵巢癌,其准确性及特异性也各不相同。基于此,本研究通过HPV检测和肿瘤标志物糖链抗原125(CA125)、血清人附睾蛋白4(HE4)、癌胚抗原(CEA)、糖链抗原199(CA199)的检测在卵巢肿瘤患者的诊断中探究其诊断价值,报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2019年1月—2021年12月期间就诊的卵巢肿瘤患者89例为研究对象,根据手术病理检查结果按肿瘤的良恶性分为恶性组38例和良性组51例。纳入标准:(1)患者临床资料齐全者;(2)意识清晰,可配合研究者;(3)恶性组患者经病理学检查为卵巢癌,且明确其病理组织分型;(4)患者手术前均经HPV及相关肿瘤标志物的检测;(5)知悉本研究内容且签署知情同意书。排除标准:(1)合并有全身感染者;(2)合并有智力、精神障碍,不能沟通者;(3)合并有严重的其他恶性肿瘤者;(4)哺乳或妊娠期患者;(5)合并有严重的心脑血管病者;(6)已放化疗或手术治疗的卵巢癌患者;(7)依从性差,不能配合本研究者。本研究通过我院伦理委员会审批。

1.2 方法

1.2.1 收集患者的一般资料。包括体重、年龄、糖尿病、身高、高血压、饮酒吸烟史等。

1.2.2 血清样本的采集。在89例患者治疗前分别抽取其在空腹时的静脉血5ml,静置1h后经离心机以3 000r/min的速度离心,持续离心10min,并分离其上清液保存于-70℃的冰箱中备用。

1.2.3 肿瘤标志物的检测。采用美国Abbott Architect i2000SR免疫检测仪以化学发光免疫法对肿瘤标志物CA125、HE4、CEA、CA199、AFP指标水平进行检测,其中以Abbott试剂检测所选患者的血清中有关的肿瘤标准物,严格以本院仪器操作的SOP及试剂盒上的说明书进行操作。

1.2.4 HPV检测。采用潮州凯普生物化学有限公司生产的试剂盒以基因扩增技术和导流杂交理论,再通过PCR-反向点杂交法检测扩增及与包被的特异性的探针膜的杂交结果,最后以碱性磷酸酶系统进行定性检测,同时对21种HPV的基因型分型,其中出现任一种基因型被确认为阳性就可定性为阳性。可根据HPV的基因分型的致病性进行分类,分为高危型和低危型两大类。

1.3 观察指标 (1)分析两组患者的一般资料,包括患者的体重指数(BMI)、年龄、合并高血压、吸烟饮酒史、糖尿病等;(2)对两组患者体内的肿瘤标志物CA125、HE4、CEA、CA199、AFP进行单因素分析;(3)比较两组患者的HPV检测的情况;(4)对两组患者的HPV检测和各肿瘤标志物的单因素分析中存在明显统计学差异的指标进行二元Logistic回归分析,并进行受试者工作特征曲线(ROC)的绘制。

2 结果

2.1 两组患者临床资料比较 两组患者的年龄、BMI、合并高血压、糖尿病、饮酒、吸烟史等一般临床资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。见表1。

表1 两组患者临床资料比较

2.2 两组患者各肿瘤标志物指标单因素分析比较 恶性组患者的肿瘤标志物CA125、HE4、CEA、CA199指标水平比良性组患者高(P<0.05),见表2。

表2 两组患者各肿瘤标志物指标单因素分析比较

2.3 两组患者HPV检测情况比较 恶性组患者的HPV检查中高危型HPV阳性率比良性组患者高(χ2=58.234,P=0.000<0.05),其中良性组患者的HPV检查中76.47%的患者未感染HPV,见表3。

表3 两组患者HPV检测情况比较[n(%)]

2.4 Logistic回归分析结果 对两组患者的HPV检测和各肿瘤标志物的单因素分析中存在明显统计学差异的指标进行二元Logistic回归分析,CA125、CEA、CA199水平升高及高危型HPV呈阳性是卵巢癌发生的独立危险因素(P<0.05),见表4。

表4 二元Logistic回归分析结果

2.5 ROC分析结果 以CA125、CEA、CA199、HPV作为检验变量,将恶性组和良性组作为参考标准,制作ROC曲线。CA125、CEA、CA199、HPV的AUC分别为0.840、0.822、0.841、0.764,而四个指标联合预测概率AUC为0.963,相较于每个指标均提升(P<0.01),见表5和图1。

图1 CA125、CEA、CA199、HPV预测卵巢癌的ROC曲线下面积

表5 各因素的ROC曲线下面积比较

3 讨论

卵巢疾病是女性常见的生殖器疾病,包括卵巢癌、卵巢上皮内瘤变等。卵巢癌是一种恶性肿瘤,早期症状不明显,且目前临床上缺乏有效的早期诊断技术,其复发率及死亡率为妇科恶性肿瘤首位,严重威胁女性的生命健康[4]。而早期诊断对降低卵巢癌患者的死亡率具有重要意义,医学科研者也一直致力于对早期卵巢癌诊断的研究。而肿瘤标志物发生异常通常要比影像学早[5]。因此对于不能明确诊断的早期卵巢肿瘤患者可借助肿瘤标志物提高其检出率。

傅志勤等[6]研究发现,患者手术前CA125水平可对卵巢癌FIGO分期进行评估,也可术前协助预测患者的5年生存率。石慧等[7]研究发现,CA125与其他指标联合检测能提高对卵巢癌患者的诊断灵敏度,上述研究与本研究结果一致。然而,血清CA125在对卵巢癌的诊断中也存在争议。相关研究[8-9]发现,卵巢癌晚期患者的CA125水平与阳性率均较高,但在早期卵巢癌患者检测的CA125水平与阳性率变化不大,同时也检测到CA125水平在良性卵巢肿瘤、子宫内膜异位症、盆腔炎、胰腺癌、肺癌、乳腺癌中都有程度不一的升高。仅以CA125作为卵巢癌的诊断的单一肿瘤标志物进行检测,其检测的准确性较低。

研究[10]发现,CEA在胃肠道等相关的癌症患者血清中水平上升明显,可作为女性生殖器相关的恶性肿瘤的诊断中有很好的参考价值。本研究结果显示,恶性组患者的肿瘤标志物CEA水平比良性组患者高,证明CEA对卵巢癌的诊断与评估中可作为重要的参考指标。CA199作为一种糖类蛋白在胆管、胰腺等多器官中的上皮细胞均有表达,但在健康人群中其水平较低,目前广泛应用于诊断各种肿瘤疾病。有研究[11]发现,在卵巢癌患者的血清中CA199水平显著升高。还有研究[12]发现,血清CA199对卵巢癌患者的诊断与分期存在一定的价值。本研究结果显示,恶性组患者的肿瘤标志物CA199水平比良性组患者高,说明CA199可作为一种对卵巢癌诊断的肿瘤标志物。郑红云等[13]研究发现,卵巢癌患者的血清中CA199水平异常升高。李向荣等[14]研究发现血清CA199在卵巢癌患者的血清中呈现高表达水平,其水平与卵巢癌的疾病进展有紧密的联系。以上研究均佐证了本研究结果。

宣飞兰[15]研究发现,卵巢癌的发生可能与高危型HPV的感染有关。另一研究[16]发现,卵巢癌患者的预后也与高危型HPV的感染关系密切,尤其对病灶的发展及转移的诊断有较高的价值。本研究结果显示,恶性组患者的HPV检查中高危型HPV阳性率比良性组患者高,说明卵巢癌的发生可能与高危型HPV的感染有关,与上述结果一致。其致癌机制可能是通过基因产物E6、E7原癌蛋白对Rb蛋白和P53(细胞周期因子),进而细胞周期调控被干扰,导致细胞由无限增殖向恶性转化。而高危型HPV DNA跟机体细胞基因的连接位点通常紧靠细胞癌基因,因此,容易引起癌基因的表达。

本研究结果显示,CA125、CEA、CA199、高危型HPV的AUC分别为0.840、0.822、0.841、0.764,而四个指标联合预测概率AUC为0.963,相较于每个指标均显著提升(P<0.01),说明CA125、CEA、CA199、高危型HPV联合检测有助于提高卵巢癌诊断的预测概率。此结果与郝淑琴等[17]、伍丽等[18]研究结果一致,合理选择肿瘤标志物及指标,将其联合检测有利于提高对卵巢癌诊断的预测概率,为手术提供可靠的临床依据。

综上所述,HPV检测与血清CA125、CEA、CA199联合对卵巢癌的诊断价值较高,在一定程度上能提高对卵巢癌的检出率,可作为卵巢癌早期诊断及预后评估的重要指标。由于本研究样本量较少,有一定的数据偏倚,今后需加大样本量的收集,以进一步验证本研究的结果。