血清miR-205-5p、miR-219-5p诊断子宫内膜癌及预判淋巴结转移的价值分析

孙红艳，高 隽

（咸阳市第一人民医院妇科，陕西 咸阳 712000）

子宫内膜癌（Endometrial carcinoma, EC）约占女性生殖道恶性肿瘤的20%～30%，多见于围绝经期和绝经后期女性，近年来有年轻化趋势［1］。EC 恶性程度高，易发生转移，确诊时已为晚期，预后差，因此及时诊断、治疗具有重要临床意义。病理评估结合影像学可为诊断EC 肌层浸润、淋巴结转移、血管生成等提供依据，寻找与肿瘤发生、发展相关的生物标志物可改善预后［2］。近年有研究［3］指出，EC进展与微RNA（miRNA）有关。既往研究［4］发现，miR-205-5p 对肿瘤抑癌基因有抑制作用，可促进多种肿瘤的发展；而miR-219a-5p 参与了骨肉瘤、乳腺癌等的发生、转移，可用于肿瘤患者的诊断及预后评估。但目前miR-205-5p、miR-219-5p二者对EC患者淋巴结转移的影响尚未见报道。本研究拟探讨血清miR-205-5p、miR-219-5p 诊断子宫内膜癌及预判淋巴结转移的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019 年2 月到2022 年2 月我院收治的120例EC 患者为观察组。纳入标准：①经宫腔镜、诊断性刮宫检查符合《子宫内膜癌筛查和早期诊断专家共识》中EC 诊断标准：下腹疼痛、白带增多、阴道不规则出血等［5］；②患者及其家属签署检验同意书。排除标准：①严重心肝肺肾疾病者；②恶性肿瘤、感染、血液性疾病、自身免疫性疾病者；③术前行放化疗、其他抗肿瘤治疗者；④既往子宫手术史、EC复发者。本研究经我院伦理委员会同意批准。

另选取我院同期体检健康女性100 例为对照组，纳入标准：无生殖系统疾病、肿瘤者。

1.2 方法

1.2.1 血清miRNA 检测EC组术前、对照组体检时抽取空腹静脉血5 mL，3 500 r·min-1离心10 min，取上层血清，放置在-80 ℃冻存。实时荧光定量qRT-PCR 检测miR-205-5p、miR-219-5p，严格按照Trizol 试剂盒说明书提取细胞总RNA（美国Invitrogen 公司）。取2 μL 总RNA 采用紫外分光光度计检测RNA 浓度、纯度。应用Prime ScriptTM RT试剂盒（日本Takara公司）行逆转录，采用Primer 5.0软件设计引物。引物序列miR-205-5p：上游：5′-TCCACCGGAGTCTGTCTCATA-3'；下 游 ：5′-GCTGTCAACGATACGCTACG-3'。miR-219-5p引物序列：上游：5′-ACACTCCAGCTGGGTGATTGTAC-3'，下游：5′-TGGTGTCGTGGAGTCGAACGC-3'，以U6为内参：上游：5'-TGGCGGAGGCTAGCTAGTCAGTCG-3'；下游：5'-TGGGGCTAGCTGATCGTAGCTA-3'。均做3个复孔，反应条件：95 ℃预变性2 min，95 ℃ 20 s，58 ℃ 40 s，共40个循环。根据2-ΔΔCt法量化miR-205-5p、miR-219-5p相对表达。

1.2.2 临床资料收集收集患者年龄、绝经状态、病理类型（腺鳞癌/腺癌）、组织学分级（G1/G2/G3）、FIGO 分期（Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ）、肌层浸润（≤1/2、＞1/2）、淋巴结转移情况。

1.2.3 血清人附睾分泌蛋白4（HE4）、成分糖类抗原125（CA125）检测抽取空腹静脉血5 mL，4 ℃2 000 r·min-1离心15 min，取上清，-80 ℃冻存。采用酶联免疫吸附实验检测CA125、HE4，试剂盒购自瑞典康乃格诊断公司。

1.3 统计学方法数据采用SPSS 24.0 进行分析，病理类型、组织学分级、FIGO 分期、肌层浸润、淋巴结转移等计数资料以例数和百分比描述，年龄、CA125、HE4、血清miR-205-5p 和miR-219-5p 水平等以表示的定量数据采用两独立样本t检验比较，血清miR-205-5p 和miR-219-5p 水平对EC 淋巴结转移的预测价值采用受试者工作特征（ROC）曲线评估，EC 淋巴结转移的危险因素采用多因素Logistic回归分析探讨。P＜0.05为差异有统计学意义

2 结果

2.1 两组血清miR-205-5p、miR-219-5p、CA125、HE4 水平比较观察组miR-205-5p、CA125、HE4 水平均高于对照组，miR-219-5p 低于对照组（P＜0.05），见表1。

表1 两组血清miR-205-5p、miR-219-5p水平比较/

表1 两组血清miR-205-5p、miR-219-5p水平比较/

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2.2 血清miR-205-5p、miR-219-5p 水平与子宫内膜癌患者病理特征的关系EC患者血清miR-205-5p、miR-219-5p 水平与病理类型、FIGO 分期、组织学分级、肌层浸润、淋巴结转移有关（P＜0.05），见表2。

表2 血清miR-205-5p、miR-219-5p水平与子宫内膜癌患者病理特征的关系/

表2 血清miR-205-5p、miR-219-5p水平与子宫内膜癌患者病理特征的关系/

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2.3 血清miR-205-5p、miR-219-5p诊断子宫内膜癌及预判淋巴结转移的临床价值血清miR-205-5p、miR-219-5p 诊断EC 的AUC 为0.732、0.746，当miR-205-5p＞1.53、miR-219-5p＜0.92时，敏感度和特异性最高；血清miR-205-5p、miR-219-5p预判淋巴结转移的AUC 为0.753、0.787，当miR-205-5p＞1.65、miR-219-5p＜0.66 时，敏感度和特异性最高，见表3。

表3 血清miR-205-5p、miR-219-5p诊断子宫内膜癌及预判淋巴结转移的临床价值

2.4 子宫内膜癌淋巴结转移影响因素的多因素Logistic 回归分析将EC 是否淋巴结转移作为因变量（1=淋巴结转移，0=无淋巴结转移），并将年龄、绝经状态、病理类型、组织学分级、FIGO 分期、肌层浸润、血清miR-205-5p、miR-219-5p、CA125、HE4 等变量作为自变量。多因素Logistics 回归分析显示，血清miR-205-5p 高表达（OR=2.44）、miR-219-5p 低表达（OR=4.89）为EC 淋巴结转移的危险因素（P＜0.05），见表4。

表4 子宫内膜癌淋巴结转移影响因素的多因素Logistic回归分析

3 讨论

EC 为常见肿瘤类型，起病隐匿、进展迅速。近年来肥胖、高血压、糖尿病等EC 高危人群数量升高，故EC 发病率递增，防治工作严峻。根据国际妇产科联合会定义，Ⅲ级、Ⅳ级肿瘤会扩散或远处转移，预后生存率较低［6］。所以完善EC 临床特征评估指标至关重要，目前针对EC 患者主要采用超声、MRI、血清标志物诊断［7］。既往CA125、HE4 联合应用可诊断EC，但部分子宫良性疾病患者血清CA 125 异常，影响诊断结果；HE4 的敏感度较低，且受年龄影响［8］。miRNA 为内源性非编码小RNA，转录后抑制mRNA 翻译或促进mRNA 降解，降低靶基因表达［9］。既往研究［10］证实，miRNA与肿瘤细胞代谢、增殖、凋亡有关，且在血清等体液中状态稳定。血清miRNA 取样简便、可重复检测，所以其在肿瘤分期、肿瘤结局评估中具有一定的探索价值。

既往有研究［11］检测EC 组织、癌旁组织，发现miR-103a-3p在EC中呈高表达，与患者分化程度、淋巴结转移、肌层浸润深度有关。miR-219a-5p为新型抑癌基因，可与靶基因特异性结合，发挥基因调控功能［12］。既往有研究［13］发现，骨肉瘤肺转移者外周血miR-219-5p 明显上调，miR-219-5p 参与肺转移的病理进程，其可作为肿瘤诊断与预后判断的潜在指标。同时有研究［14］发现，miR-205-5p 高表达可作用于抑癌基因上游靶位点，可抑制抑癌基因水平，发挥肿瘤细胞分化、增殖、转移调控作用。但目前二者与子宫内膜癌的关联性尚未见报道。本研究结果显示，观察组血清miR-205-5p 水平高于对照组，miR-219-5p 低于对照组（P＜0.05），提示血清miR-205-5p 水平升高、miR-219-5p 水平降低与子宫内膜癌发病有关。

本研究结果表明，EC 患者血清miR-205-5p、miR-219-5p 水平与病理类型、FIGO 分期、组织学分级、肌层浸润、淋巴结转移有关（P＜0.05），提示miR-205-5p、miR-219-5p 参与EC 发生发展。分析其可能机制：①第10号染色体缺失性磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）为抑癌基因，起到调控PI3K/AKT通路、抑制细胞增殖和迁移的作用。miR-205-5p 可负调控PTEN 水平，促进肿瘤细胞增殖［15］。ESRRG为雌性激素相关受体，抑制子宫内膜细胞侵袭、增殖，miR-205-5p 可抑制ESRRG 的抑癌作用，发挥促癌作用［16］。②miR-219-5p 可抑制肿瘤细胞786-O 增殖、迁移及降低MMP-2 蛋白水平，同时促进P21 蛋白表达。NIMA 相关激酶6（NEK6）已被证实在卵巢癌、肝癌中上调表达，NEK6 为miR-219-5p 下游靶基因，miR-219-5p 直接靶向调控NEK6 表达，影响EC细胞增殖、迁移、侵袭［17］。

本研究发现，血清miR-205-5p、miR-219-5p诊断EC 的AUC 为0.732、0.746，预判淋巴结转移的AUC为0.753、0.787，提示血清miR-205-5p、miR-219-5p对EC 早期诊断、淋巴结转移预测的价值较高。淋巴结转移影响手术病理分期、EC 患者预后，需行术前预测［18］。而EC 发病机制复杂，需多指标联合检测提高诊断准确度。本研究多因素回归分析显示，血清miR-205-5p 高表达、miR-219-5p 低表达为EC 淋巴结转移的危险因素（P＜0.05），提示血清miR-205-5p 升高、miR-219-5p 下降是EC 淋巴结转移的危险因素。对于血清miR-205-5p 升高或miR-219-5p 下降的子宫内膜癌患者需重点考虑其存在淋巴结转移的可能，重点排查与治疗。

综上所述，血清miR-205-5p 在EC 患者血清中呈高表达，miR-219-5p 呈低表达，与肌层浸润、淋巴结转移有关。