探究胶体金法在检测粪便隐血中的应用

2023-09-27洪明凤

大众标准化 2023年18期

洪明凤

（厦门科威生物技术有限公司，福建厦门 361000）

粪便隐血试验是临床消化道出血性疾病常用诊断方法，可将消化道肿瘤等疾病有效筛查，当上消化道出血量较少时，外观表现无异常改变，且肉眼不能辨认，因此对于疑似上消化道出血患者需要予以粪便隐血检查。通常情况下，将联苯胺作为检测试剂，由于血红蛋白中的铁具有过氧化酶作用，可对过氧化氢中进行分解，并释放出氧，将联苯胺氧化成联苯胺蓝，并形成蓝色特征，即可检测为阳性。并可根据颜色变化速度及深度将阳性结果进行区分，包括弱阳性、阳性、强阳性。

但是此种检测方法缺乏特异性，且假阳性率较高，会受到多种因素的干扰，影响最终检测结果，因此现阶段该种检测方法未得到广泛应用。免疫学方法中包括多种方法，如胶体金法、免疫斑点法、酶联免疫法等，其中胶体金法的应用优势较为突出，具有快速、便捷、经济、干扰少、灵敏度高等优点，被各大医院广泛应用。但在实际应用中，会存在假阴性结果，需要对其综合分析，判断该检测方法的诊断效能及应用价值。基于此，以200例住院患者为研究观察对象，意在分析胶体金法在检测粪便隐血中的应用效果，具体报告下述。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取某院收治的住院患者200例，收治时间（2021年4月～2022年5月）。其中包括消化道出血者50例、溃疡性结肠炎患者50例、胃溃疡患者50例、胃炎患者50例，其中男性患者为120例，女性患者为80例，其年龄集中在37～74岁，均值（61.52±1.65）岁。此次研究不违背医学伦理委员会批准标准，纳入患者均对研究内容知情。

纳入标准：①患者接受医学诊断；②患者资料完整；③同意医学观察。

排除标准：①合并肝肾功能障碍者；②合并凝血功能障碍者；③认知/交流/精神障碍；④传染性疾病；⑤合并肿瘤/癌症；⑥资料缺失。

1.2 方法

对所有受检者行粪便隐血检测。

联苯胺法检测：选择1%联苯胺冰醋酸试剂，其中将110 g联苯胺与50%冰醋酸混合，至10 mL，待其充分溶解，并置入棕色瓶中保存。另选择3%过氧化氢溶液，其制备方法为将10 mL30%过氧化氢溶液与蒸馏水混合，至100 mL，并置入棕色瓶中保存。在邻甲苯胺法检测操作中需按照《全国临床检验操作规程》中的相关要求进行实施，并注意检测相关注意事项。

胶体金法检测：选择检测试剂由艾博生物医药（杭州）有限公司提供，产品标准编号为 YZB/浙2476-2012，确保试验在试剂有效期内使用。检测原理为：利用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上检测区（T）的抗人血红蛋白和质量控制区（C ）的相应抗体。试剂测试中，需将试剂插入样本中，并在毛细效应作用下向上层析，若样本中含人血红蛋白则判定为阳性，其检测区中出现一条紫红色条带。若样本中无人血红蛋白则为阴性，其检测区（T）内无紫红色条带。但无论人血红蛋白是否处于样本中，质量控制区（C）中均会呈现出一条紫红色带。质量控制区中呈现出的紫红色条带可用于判断样本是否充足，在层析过程中是否为正常的标准。同时，也可作为试剂中内控标准。在操作方法中，需要向检测管中加入0.5 mL蒸馏水，并用试管在粪便样本的不同部位取出粪便（火柴头大小），放置于检测管中充分混合均匀，并将试纸条插入试管中，维持5 s，在5 min后读取结果。

1.3 观察指标

观察联苯胺法及胶体金法的阳性检出率，并对比两组检查方式的诊断效能。

2 结果

2.1 临床诊断结果

200例住院患者中，经临床检验诊断确诊阳性为135例，占比67.50%。

2.2 联苯胺法及胶体金法的阳性检出率

邻甲联苯胺化学法阳性检出率为55.00%，免疫胶体金法阳性检出率为66.00%，免疫胶体金法阳性检出率高于邻甲联苯胺化学法，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 联苯胺法及胶体金法的阳性检出率比较[n（%）]

2.3 阳性患者疾病分布

联苯胺法阳性检查中，包括消化道出血38例，占比76.00%；溃疡性结肠炎35例，占比55.00%；胃溃疡22例，占比44.00%；胃炎15例，占比30.00%。联苯胺法阳性检查中，包括消化道出血42例，占比84.00%；溃疡性结肠炎37例，占比74.00%；胃溃疡30例，占比60.00%；胃炎23例，占比54.00%。见表2。

表2 联苯胺法及胶体金法的阳性检出率比较[n（%）]

2.4 诊断效能比较

灵敏度、特异度、诊断符合率数据比较，邻甲联苯胺化学法检查效能81.48%、86.15%、83.00%；免疫胶体金法检查效能：97.78%、95.38%、97.00%，灵敏度、特异度、诊断符合率均是免疫胶体金法检出效能更加理想（P＜0.05）。见表3，表4，表5。

表3 邻甲联苯胺化学法检出情况

表4 免疫胶体金法检出情况

表5 两种检查方式诊断灵敏度、特异度、准确度比较

3 讨论

粪便隐血检查也称为便潜血试验，对于上消化道出血等疾病患者来说，可通过粪便隐血检查明确疾病，并对消化道恶性肿瘤进行筛查，具有重要的临床参考价值。且在相关数据研究统计中，消化性溃疡的阳性率在40%～70%范围内，并呈现出间断阳性。而一些消化道癌症如肺癌的粪便隐血阳性检出率可高达95%，同时对于其他多种疾病导致的消化道出血患者来说，在粪便隐血检查中，均会呈现出阳性反应。因此，粪便隐血检查在临床诊疗中具有重要意义，需要提高该检查结果准确性，为患者治疗提供有力依据。需要找到一种敏感性高，特异性强的检验方法，在粪便隐血检验中发挥作用。其中包括邻甲联苯胺化学法及免疫胶体金法等，不同检测方法的操作要求及注意事项均有所不同，且得到的检验结果也存在差异。

胶体金法是一种常用的标记技术，其示踪标志物为胶体金，将其应用于抗原抗体检测中，是一种新型的免疫标记技术。其优势明显，特点显著，近年来在各种生物学中被广泛应用，临床利用免疫印迹技术均会使用胶体金标记，并且会用于流式、电镜、免疫、分子生物学及生物芯片中。需要将特异的抗体固定于酸类纤维素膜的某区带中，并在干燥的酸类纤维素一端浸入样品后，受到毛细管的作用，使得样品沿着该膜向前移动，在移动至固定抗体区域后，样品中相应抗原会与该抗体发生特异性结合。同时，利用金粒的高电子密度的特性，可在金标蛋白结合位置，当标志物在相应配体位置大量聚集时，会出现明显的斑点，斑点呈现红色，肉眼清晰可见，如图1。

图1 胶体金法检测

在试剂制备中，需要确保其生产快速且精确，其要点在于运用到的单克隆抗体、多元克隆抗体、抗原、半抗原、蛋白嵌合物及胶体金等原料的灵敏性及特异性等是否会达到最高标准。而邻甲联苯胺化学法的检测原理则不同，主要基于一些过氧化物活性的亚铁血红素中，可将过氧化氢进行还原，并形成水，将无色的供氧体邻-甲苯胺氧化成蓝色的邻-甲偶氮苯，但是会受到多种药物、食品等因素的影响产生假阳性的检测结果，并影响最终检验结果的准确性。而免疫胶体金法则不会受到相关因素的干扰。

研究对200例住院患者进行粪便隐血检测，分别实施邻甲联苯胺化学法和免疫胶体金法，免疫胶体金法阳性检出率高于邻甲联苯胺化学法（P＜0.05）；灵敏度、特异度、诊断符合率均是免疫胶体金法检出效能更加理想（P＜0.05）。结果提示，在粪便隐血样本检测中，选用免疫胶体金法检测具有较高的诊断效能。但是在实际操作中也需明确细节标准及注意事项，在实验操作时需要注意，将原包装袋中取出的试条需在1小时之内尽快使用，并在使用时将试纸条与样品稀释液恢复至室温20～30 ℃，而对于收集到的粪便样本也需在30 min内检测。同时，在试纸条箭头指向的一端浸入标本溶液中，要避免超过标记线，并当紫红色条带显现时，测试结果需在5 min内读取，而10 min后再读取结果则无效。