高寒地区欧拉羊超数排卵效果初探

谢秀梅,莫延新,周 倩

(青海省畜禽遗传资源保护利用中心,青海 西宁 810003)

欧拉羊主要分布在青海省黄南州河南县和甘肃省玛曲地区,青海省泽库县和久治县也少有分布。欧拉羊头稍长,呈锐三角形,鼻梁隆起,公、母羊绝大多数都有角,角形呈微螺旋状向左右平伸或略向前,尖端向外。四肢高而端正,背平直,胸、臀部发育良好,尾呈扁锥形。成年公羊体重75.85kg,成年母羊58.51kg。欧拉羊适应性强、抗病力强、耐粗饲而且肉质优良,素以个体高大、肌肉丰满、产肉量高而著称,也是藏系绵羊中产肉性能最好的羊种,是进行肉用杂交改良的优秀种质资源。通过超数排卵措施收集并冷冻保存胚胎,可以保存该品种的全部基因,避免了由各种原因造成的优良基因流失问题,在保护动物遗传资源方面发挥了重要的作用[1]。

1 材料与方法

1.1供体羊

本项目供体羊从河南县引进,供体母羊等级为一级以上,供体公羊为特级,均符合品种标准,3代以内无血缘关系,系谱清楚,健康、无传染性疾病和遗传疾病,有检疫证明。母羊均为2岁以上,自然繁殖产过1胎。

1.2主要药品与器械

1.2.1药品 加拿大产促卵泡素Follitropin FSH,400 mg/支;促黄体素释放激素A3(促排3号),宁波三生药业有限公司生产,20 μg/支;氯前列烯醇(PG),上海市计划生育科学研究所生产,0.2 mg/2 mL·支;黄体酮阴道缓释剂(CIDR),新西兰DEC国际有限公司生产,1.9 g/支;普鲁卡因,北京市永康药业有限公司生产,40 mg/2 mL·支。

1.2.2器械 体视显微镜;羊用二通式冲卵管;滞留针;集卵杯;恒温水浴锅;手术器械;手术架等。

1.3超数排卵方案

用阴道栓CIDR对母羊进行同期发情处理,于第0 d放置阴道栓CIDR并注射维生素ADE 3 mL/只。加拿大产FSH每支为400 mg,将其稀释为20 mL溶液(20 mg/mL),从第9 d开始,每天上、下午间隔12 h采用逐渐减量的方法进行肌肉注射,连续注射4 d,具体剂量见表1。在注射第6针时同时注射PG 0.2 mg,注射第7针后取出阴道栓。

表1 超数排卵处理方案

1.4重复超数排卵

用阴道栓CIDR对母羊进行同期发情处理,采用逐渐减量的方法肌注FSH进行超数排卵,每次胚胎采集结束后间隔2个月进行重复超排处理。

1.5输精或配种

在第12 d注射完成后即对供体母羊进行发情鉴定,待观察到第1次站立发情后12 h配种,间隔10～12 h再配一次,连续配种2～3次。配种时注射促排3号15 μg、维生素ADE 3 mL/只。

1.6胚胎的采集与质量鉴定

以发情之日为第0 d计算,于第7 d采用手术法回收胚胎。用含1%血清的杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗母羊两侧子宫角,每侧用液20～30 mL。子宫回流液静置3～5 min后在体视显微镜下检出并收集胚胎,置于保存液中。根据农业行业标准《牛、羊胚胎质量检测技术规程》对取出的胚胎进行分级,为了保证种用需求,冻存B级以上胚胎。

1.7数据处理

采用SPSS 17.0软件对试验数据进行统计分析,结果以“平均值±标准差”表示,采用单因素方差分析对各组数据进行差异显著性分析。超数排卵有效而冲卵失败的个体不计入个体数。

2 结果与分析

2.1FSH不同剂量效果比较

本次试验采用加拿大产FSH,设计216 mg(Ⅰ组)、256 mg(Ⅱ组)、276 mg(Ⅲ组)3个剂量组,分别处理26、24、25只欧拉羊。利用同期发情和超数排卵,手术收集卵子数和胚胎数进行对比研究。

由表2可知,加拿大产FSH的适宜注射量为256 mg,此剂量下只均黄体数、只均回收卵数、卵子回收率、只均有效胚数和有效胚率分别为7.87个、6.40个、81%、4.87枚和76%,与其他组相比较,综合效果最佳。

表2 加拿大产FSH不同剂量超数排卵效果的比较

2.2重复超数排卵效果的比较

从试验羊只中挑选出17只做好标记,进行重复超排,每只羊超排3次,每次超排间隔2个月,对不同次数的超排结果进行对比研究。

由表3可知,对欧拉羊进行3次重复超排后,第2、3次的只均黄体数极显著高于第1次(P<0.01);第2次的只均回收卵数极显著高于第1次(P<0.01),显著高于第3次(P<0.05),只均有效胚数、有效胚率显著高于第1次和第3次(P<0.05);第1、2次胚胎受精率高于第3次(P>0.05);第3次时子宫粘连率显著高于第1、2次(P<0.05),说明重复实施超数排卵会增加供体母羊子宫粘连的风险。

表3 重复超数排卵效果的比较

3 小结

3.1超数排卵对于机体来说是一个复杂的生理过程,超数排卵处理方法要根据供体母羊本身激素水平的变化而设计,品种、个体水平、生长环境以及选择的药物和处理方法均会影响超数排卵效果,适宜的FSH剂量是超数排卵取得良好效果的关键因素之一。朱芳贤等[2]报道,兰州大尾羊获得A级胚胎平均为5.0枚/次。本试验只均黄体数为7.87个,只均有效胚数为4.87枚,可能与欧拉羊的生长环境以及饲养管理方式有关,建议在进行胚胎冷冻工作前,强化供体羊饲养管理,按照个体水平分组饲养、组群。

3.2刘广振[3]认为较强的激素应答反应使部分个体优势卵泡排卵过早,黄体功能不全,分泌孕酮水平较低,从而造成胚胎退化。谭景和等[4]、范必勤等[5]也认为较强的激素应答反应使卵巢过度增大、卵泡过度增多,可能造成卵母细胞质量下降,排卵后卵子未能进入输卵管中而是直接掉入腹腔,最终导致卵子回收率低,未受精卵多,可用胚率也很低,A、B级胚胎更少。本试验中加拿大FSH 276 mg组卵泡发育多,但回收到的卵子少,尤其

是有效胚胎少,可能是卵子质量差,造成受精率低和退化胚胎多。建议实施大规模超数排卵前进行必要的预试验,确定最佳的FSH剂量,避免增加生产成本。

3.3本次试验超数排卵间隔时间短,使得供体母羊产生了抗外来促性腺激素的抗体,对激素应答反应不敏感,同时重复多次的技术操作也会增加生殖道受损伤和感染的机会。此次试验表明,随着重复超排次数增加,供体母羊的子宫粘连率升高,子宫粘连也可能是造成获卵数、有效胚数、有效胚率及胚胎受精率降低的主要原因之一。此外,技术人员要加强业务训练、提高操作能力,减少对母羊子宫的刺激,避免操作过程中的出血,尽可能做到无菌操作, 可大大提高供体母羊的重复利用率。