分泌性中耳炎患儿miR-495水平与免疫失衡及炎症状态的相关性

2023-09-14闵春芳

河南医学研究 2023年17期

闵春芳

(开封市人民医院耳鼻喉科,河南开封 475002)

分泌性中耳炎是一种常见的儿童疾病,以中耳积液为特征[1]。持续的分泌性中耳炎可导致鼓膜和中耳的长期变化,造成一定程度的听力损失。既往研究表明耳咽管功能障碍、过敏、免疫失衡及细菌感染等因素是引起分泌性中耳炎的主要原因[2-3]。其中,免疫失衡是分泌性中耳炎发病的一个重要因素。T细胞亚群在机体的免疫调节中起重要作用,分泌性中耳炎患儿通常伴有腺样体肥大,报道显示腺样体肥大引起的免疫异常可能在分泌性中耳炎的发病中起着重要作用[4]。miR-495在许多疾病的炎症反应中起着重要的调节作用,如肺炎[5]、炎症性肠病[6]和强直性脊柱炎[7]。然而,miR-495在分泌性中耳炎中的研究较少。本研究分析了分泌性中耳炎合并腺样体肥大患儿及单纯腺样体肥大患儿外周血miR-495水平的差异并进一步探讨了血清miR-495失调与免疫失衡及炎症因子释放的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2020年3月至2022年3月在开封市人民医院收治的分泌性中耳炎合并腺样体肥大患儿53例为观察组,选取同期单纯腺样体肥大患儿40例为对照组。观察组中男35例,女18例;年龄5～16岁,平均(7.22±2.13)岁;病程4～13个月,平均(8.36±2.53)个月。对照组中男26例,女14例;年龄4～16岁,平均(7.16±1.96)岁;病程5～13个月,平均(8.58±2.73)个月。两组患儿一般资料相比,差异无统计学意义(P>0.05)。所有纳入本研究的患儿家属均签署知情同意书。本研究已通过医院医学伦理委员会审核批准。纳入标准:腺样体肥大经鼻咽部影像学或内镜检查确诊;分泌性中耳炎患儿的诊断符合《临床实践指南:分泌性中耳炎(更新版)》[8]中的诊断标准。排除标准:合并支气管哮喘或急性呼吸道感染;合并重要器官功能障碍;有精神疾病。

1.2 检测方法

1.2.1血液样本收集

于清晨收集患儿5 mL空腹静脉血,血液样本用于T淋巴细胞亚群水平的检测。血液样本以3 000 r·min-1离心10 min,收集上层血清检测miR-495水平及炎症因子水平。

1.2.2血清miR-495水平检测

采用Trizol试剂(Invitrogen公司)提取血清总RNA,使用MicroRNA 反转录试剂盒(Applied Biosystems公司)将RNA反转录为cDNA。按照TaqMan Fast PCR Master Mix 试剂盒(Applied Biosystems公司)的说明书配制实时定量聚合酶链反应体系对miR-495进行扩增。miR-495的水平以2-ΔΔCT法进行分析,以U6为内参基因。miR-495及U6的引物序列:miR-495上游引物为5’-TCCGATTCTTCACGTGGTAC-3’,miR-495下游引物为5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’,U6上游引物为5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’,U6下游引物为5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。

1.2.3血液T淋巴细胞亚群水平检测

使用免疫荧光法检测血液T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+及CD8+水平,流式细胞仪购自迈瑞生物医疗电子股份有限公司。

1.2.4血清炎症因子水平检测

采用酶联免疫吸附试剂盒(eBioscience公司)检测血清中白细胞介素(interleukin,IL)-8及IL-1β水平,检测过程严格按照说明书操作。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 血清miR-495在分泌性中耳炎中的诊断价值

观察组患儿血清miR-495水平(0.75±0.09)低于对照组(1.00±0.10),差异有统计学意义(t=13.240,P<0.001)。ROC曲线结果显示血清miR-495水平诊断分泌性中耳炎的曲线下面积为0.969(P<0.001),95% CI 0.937～1.000,最佳截断值为0.872,诊断价值较高。

2.2 血液T淋巴细胞亚群水平

观察组患儿血清中的CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。见表1。

表1 两组患儿血液T淋巴细胞亚群水平比较

2.3 血清炎症因子水平

观察组患儿血清IL-8及IL-1β高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。见表2。

表2 两组患儿血清炎症因子水平比较

2.4 血清miR-495水平与免疫及炎症指标水平的相关性分析

经Pearson相关性分析发现观察组患儿血清miR-495水平与T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平呈负相关(P<0.05),与炎症因子IL-8及IL-1β水平亦呈负相关(P<0.001)。见表3。

表3 观察组患儿血清miR-495水平与免疫及炎症指标水平的相关性分析

3 讨论

分泌性中耳炎是一种常见的儿童疾病,病因主要为细菌感染及免疫失衡等,主要以药物治疗(类固醇或抗生素等)和手术治疗(鼓室造瘘管或腺样体切除术)为主[9-10]。有研究显示,急性分泌性中耳炎患者血液及耳积液中的淋巴细胞数量增加,促炎因子释放,血清免疫球蛋白表达也失调[11-13]。持续性的分泌性中耳炎会导致听力损伤及鼓膜改变,因此除了接受有效的治疗外,分泌性中耳炎的早期诊断十分关键。

miRNAs是长度在19到21个核苷酸之间的非编码RNA,可调节基因表达,参与机体生理及病理过程。有研究报道miR-495是抑制肺癌细胞增殖的抑癌因子[14]。此外,miR-495可以抑制强直性脊柱炎的炎症反应[7],并通过抑制炎症小体信号通路改善心脏微血管内皮细胞的炎症反应和凋亡[15]。miR-495还能抑制高血糖性心肌成纤维细胞炎症[16]。以上研究表明miR-495参与炎症反应的调控,推测miR-495可能参与分泌性中耳炎的进展调控。本研究结果显示观察组患儿血清miR-495水平低于对照组,表明miR-495水平下调可能与分泌性中耳炎的发病相关。ROC曲线分析显示血清miR-495水平诊断分泌性中耳炎的曲线下面积为0.969,表明血清miR-495是分泌性中耳炎较为理想的诊断指标。

CD3+及CD4+是机体的T淋巴细胞、辅助性T淋巴细胞的代表。CD8+是机体的抑制性T淋巴细胞,其通过抑制免疫应答及T细胞增殖与CD4+相互拮抗,维持机体免疫平衡[17]。此外,CD4+/CD8+为评价机体免疫状态的重要指标,比值上升表示机体免疫增强,比值下降表示机体免疫力下降[18]。本研究发现与对照组患儿相比,观察组患儿血液中的CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平均升高,说明分泌性中耳炎合并腺样体肥大患儿存在免疫失衡。分泌性中耳炎的发展伴随着机体大量炎症介质的释放,且随着病情加重,机体炎症反应加剧[19]。IL-8及IL-1β可由多种细胞分泌,参与机体的炎症反应及免疫调节。本研究发现,与对照组相比,观察组患儿血清中的炎症因子IL-8及IL-1β均升高,且差异具有统计学意义。

进一步分析了分泌性中耳炎患儿血清miR-495水平失调与免疫失衡及炎症因子释放的相关性,Pearson相关性分析发现观察组患儿血清miR-495水平与T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平呈负相关,与炎症因子IL-8及IL-1β水平亦呈负相关,表明血清miR-495可能通过调控机体免疫平衡及炎症反应参与分泌性中耳炎的发病。