ABO溶血症患儿实验室结果与溶血 贫血程度的相关性分析

李娲　吴旭良　聂锦标　单款玲

【摘要】  目的    探討新生儿ABO溶血症（ABO-HDN）患儿不同性别、确诊日龄、母婴血型类别、直接抗人球蛋白试验（DAT）凝集强度与新生儿患儿的溶血、贫血程度的关系。方法    对2020年1月—2021年10月期间确诊的255例ABO-HDN病例进行分析，检测所有患儿的溶血三项和红细胞计数（RBC）、血红蛋白浓度（HB）、血小板计数（platelet count，PLT）、总胆红素（total bilirubin，TBIL）、间接胆红素（indirect bilirubin，IBIL）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH），根据患儿性别、确诊日龄、血型类别、DAT凝集强度等分成不同组别，比较各组间RBC、HB、PLT、TBIL、IBIL、LDH差异，并分析病例临床资料与溶血、贫血之间的关系。结果    不同性别患儿HDN溶血程度比较差异无统计学意义（P>0.05）；确诊日龄为1～2 d组患儿的PLT、TBIL、IBIL水平低于确诊日龄为3 d及以上组，LDH水平高于确诊日龄为3 d及以上组（P<0.05）；O-A组患儿RBC、HB水平高于O-B组（P<0.05），TBIL、IBIL、LDH水平低于O-B组（P<0.05）；O-AB组患儿TBIL、IBIL水平低于O-A组和O-B组（P<0.05），RBC计数高于O-B组（P<0.05）；不同DAT凝集强度的患儿相比较其溶血程度差异无统计学意义（P>0.05）。结论    HDN患儿的贫血溶血程度与性别差异关联度较小、与DAT凝集强度无关，与HDN确诊日龄、不同母婴血型关联度较大，对于确诊日龄≤2 d、母婴血型为O-A、O-B的患儿，应尽早做溶血三项试验以明确诊断，密切关注RBC、HB、TBIL和IBIL水平的变化情况。

【关键词】  ABO溶血症； 溶血程度； 贫血

Correlation analysis between laboratory results and degree of hemolysis in children with ABO-HDN

Li Wa，Wu Xuliang，et al.The Guangzhou Zengcheng Maternal and Child Health Hospital，Guangzhou，Guangdong  511300

【Abstract】  Objective    To explore the relationship between different gender， age of diagnosis，maternal and infant blood group， direct antiglobulin test （DAT） agglutination intensity and the degree of hemolysis and anemia in newborns with ABO hemolysis （ABO-HDN）. Methods    255 cases of ABO-HDN diagnosed from January 2020 to October 2021 were analyzed.The hemolysis， erythrocyte count （RBC）， hemoglobin concentration （HB）， platelet count （PLT）， total bilirubin （TBIL）， indirect bilirubin （IBIL） and lactate dehydrogenase （LDH） were measured according to the sex， age of diagnosis， blood type Dat agglutination intensity was divided into different groups. The differences of RBC， Hb， PLT， TBIL， IBIL and LDH among the groups were compared， and the relationship between clinical data and hemolysis and anemia was analyzed. Results    there was no significant difference in the degree of HDN hemolysis between children of different genders （P>0.05）. The levels of PLT， TBIL and IBIL in 1-2D group were significantly lower than those in 3D and above group， and the level of LDH was higher than those in 3D and above group （P<0.05）. The levels of RBC and Hb in O-A group were higher than those in O-B group （P<0.05）， the levels of TBIL， IBIL and LDH in o-ab group were lower than those in O-A group and O-B group （P<0.05）， and the RBC count in o-ab group was higher than that in O-B group （P<0.05）. There was no significant difference in hemolysis degree between children with different dat agglutination intensity （P>0.05）. Conclusion    the degree of anemia and hemolysis in children with HDN has nothing to do with gender differences and DAT agglutination intensity. It is closely related to the age of HDN diagnosis and the incidence of different maternal and infant blood groups.

【Key Words】  ABO-HDN； Laboratory results； Degree of hemolysis； Anemia Relevance

中图分类号：R722.18        文献标识码：A        文章编号：1672-1721（2023）23-0100-04

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.23.033

新生儿溶血症（hemolytic disease of thenewborn，HDN）是指由于母亲怀孕时，母体内的不同血型IgG类抗体通过胎盘进入胎儿血液循环[1]，引起的一系列免疫性溶血性反应[2]。临床常见ABO血型系统引起的新生儿溶血症，即ABO-HDN[3]。其主要的临床症状为新生儿早期出现轻度黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大[4]等，及时治疗一般不会发展为危重病例；但当溶血程度较重时，胎儿可出现水肿、心力衰竭、高胆红素血症，甚至发展为胆红素脑病，造成中枢神经系统的功能障碍，更为严重者则可出现胎儿早期自然流产或中晚期死胎[5]。随着近年来二孩、三孩政策的放开，越来越多的新生儿将面临这一疾病，因此，重视HDN的发生，早预防、早诊断、早治疗非常重要。为了能更高效地为HDN的诊疗过程提供依据，本文回顾分析了2020年1月—2021年10月广州市增城区妇幼保健院255例ABO-HDN患儿不同性别、确诊日龄、血型分类、直抗试验凝集强度与患儿溶血程度的关系，现报告如下。

1    资料与方法

1.1    对象    选取2020年1月—2021年10月广州市增城区妇幼保健院确诊的255例ABO-HDN病例为研究组，其中男性121例，女性134例。

1.2    仪器与试剂    仪器：RBC、HB、PLT由希森美康XN-1000全自动血細胞分析仪检测；TBIL、IBIL、LDH由日立7180全自动生化分析仪检测；离心机为湖南湘仪实验室仪器有限公司制造，离心机型号为CTK12OC；凝胶卡孵育器和DG-SPIN血型卡专用离心机由长春博研科学仪器有限公司生产。

试剂：抗人球蛋白检测卡由西班牙戴安娜公司生产，RBC、HB、PLT为Sysmex公司配套试剂，TBIL、IBIL、LDH试剂由迈克生物提供。

各检测严格按照说明书进行操作，且检测前已确保当日仪器质控在控。

1.3    方法

1.3.1    用微柱凝胶法鉴定新生儿血型，具体步骤按照《全国临床检验操作规程》[6]中的指导。

1.3.2    所有患儿进行新生儿溶血三项检测，包括直接抗人球蛋白试验（direct antinglobulin test，DAT）、血清游离抗体试验、红细胞放散试验，记录DAT凝集强度。RBC、HB、PLT用紫色EDTA-K2管采静脉血1.8 mL混匀。TBIL、IBIL、LDH用黄色分离胶管采静脉血3 mL，3 000 r/min离心10 min。所有检测需在抽血后2 h内成。

1.3.3    HDN诊断标准    当新生儿溶血三项试验中的任意2项阳性或3项均阳性时，诊断为HDN阳性，若只有释放试验单独1项阳性时也诊断为HDN阳性[7]。

1.4    统计学方法    采用SPSS 23.0统计学软件分析数据。计量资料以x±s表示，采用t检验；计数资料以百分比表示，采用χ²检验；呈正态分布的数据，组间比较采用独立样本t检验和单因素ANOVA检验；非正态分布数据，采用非参数K-W检验；P<0.05为差异有统计学意义。

2    结果

2.1    不同性别的患儿HDN溶血、贫血程度比较    在ABO-HDN的255例患儿中，男性患儿121例（47.5%），女性患儿134例（52.5%），2组PLT相比差异有统计学意义（P<0.05），其余研究指标比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2    不同确诊日龄患儿的溶血、贫血程度比较    确诊日龄为1～2 d组患儿的PLT、TBIL、IBIL水平均明显低于确诊日龄为3 d及以上组，LDH水平明显高于确诊日龄为3 d及以上组，差异具有统计学意义（P<0.05）；2组间RBC及HB差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3    不同母婴血型的患儿溶血、贫血程度比较    O-A组患儿RBC、HB水平明显高于O-B组，TBIL、IBIL、LDH水平明显低于O-B组，差异均有统计学意义（P<0.05）；O-AB组患儿TBIL、IBIL水平显著低于O-A组和O-B组，RBC数量高于O-B组，差异有统计学意义（P<0.05）。3组之间PLT数量比较差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

2.4    不同DAT凝集强度的患儿溶血、贫血程度比较    在本次收集数据中，没有出现DAT结果为阳性（4+）的强阳性标本，所以强阳性标本的比较结果缺如。而在阴性、阳性（≤1+）、阳性（2+）、阳性（3+）几组中，各实验室结果比较差异无统计学意义（P>0.05），见表4。

3    讨论

HDN原理为胎儿通过基因遗传获得不同于母体的血型抗原，这些抗原通过脐带激活了母体的免疫系统，使母体产生了对应的免疫性IgG抗体，IgG抗体进入胎儿血液循环，胎儿红细胞被来自母亲的IgG抗体所包被并遭到破坏，出现新生儿黄疸、溶血、肝脾肿大等溶血症症状。母体产生的IgG为抗-A或抗-B时称为ABO-HDN。目前临床上常用新生儿溶血三项试验来诊断ABO-HDN[8]。直接抗人球蛋白试验（DAT）用来检测母体渗透的IgG抗体是否令新生儿的红细胞致敏，新生儿红细胞抗原点位少、密度低，抗原性较弱，能结合的母体IgG抗体也相应较少，DAT结果可出现弱阳性或阴性。血清游离抗体试验主要检测来自母体的IgG抗体是否存在于新生儿血清中，若血清中出现未结合到红细胞的多余抗体，则不停产生的新红细胞仍会致敏，病程持续时间较长，为疾病的严重程度提供了参考依据。以上2种试验阳性并不能确诊HDN，而红细胞抗体释放试验可分别检测放散液中和酶处理的患儿红细胞血型IgG抗体，若检测结果为阳性，则表明患儿红细胞与来自母体的IgG抗体相结合，可直接诊断新生儿溶血症[9]。本次研究结果中，直接抗人球蛋白阳性率为14.9%（38/255），游离抗体试验阳性率为81.2%（207/255），释放试验阳性率为100%。HDN属于血管外溶血，原理为红细胞受到损伤，在肝和脾内被巨噬细胞识别并且吞噬破坏。人体胆红素主要来自血中破碎的红细胞，红细胞破碎所释放的血红蛋白在体内经过一系列的代谢，最后变成胆红素，分为直接胆红素与间接胆红素。间接胆红素在体内不与葡萄糖醛酸相结合，更能直接反映体内红细胞的破坏程度。LDH在红细胞、心肌、肝脏及肌肉中广泛存在，对溶血反应迅速。伴随溶血的进展，TBIL、IBIL、LDH不同程度的升高，HB浓度有所降低，进而导致了RBC、PLT计数的进一步改变，最终出现贫血的变化。

尹明伟等[10]研究结果显示，在HDN患病的性别差异上，女婴确诊率高于男婴，差异有统计学意义（P<0.001）。本研究罗列了男性患儿、女性患儿的RBC、HB、PLT、TBIL、IBIL、LDH水平的差异，发现除PLT差异有统计学意义外（P<0.05），其余指标女婴均较男婴有不同程度偏低，但差异无统计学意义（P>0.05）。提示HDN患儿溶血贫血的程度与患儿性别的关联度较小。分析原因，可能是由于男性女性生理上的不同，男性女性各时期指标的正常参考范围也有所不同，比如HB在各时期多是男性高于女性，这是由于生理发育不同而呈现出来的差异性。

确诊日龄为1～2 d组患儿的PLT、TBIL、IBIL水平均明显低于确诊日龄为3 d及以上組，LDH水平明显高于确诊日龄为3 d及以上组（P<0.05），而RBC、HB差异无统计学意义（P>0.05）。临床上新生儿出生24 h以内，常见黄疸出现较早，发展较为迅速，血清胆红素以间接胆红素增高较为显著，部分患儿黄疸较轻，程度接近生理性黄疸，因而及时进行实验室血型血清学检测，是临床早发现早治疗的重要措施。本次研究结果可见，HDN检出的阳性率与患儿出生时间存在较强关联，即患儿检测时日龄越小，检出的阳性率越高。新生儿刚出生时，体内仍存在较多的游离IgG血型抗体及致敏红细胞，而伴随发病时间的延长，新生儿血液中游离IgG抗体及致敏红细胞含量越来越少，大部分IgG抗体失去了反应原性，最终导致检出率降低。故而，对于疑似HDN的患儿，应尽早进行血清学检测才能减少漏诊率。

O-A组RBC、HB水平高于O-B组，TBIL、IBIL、LDH水平低于O-B组；O-AB组TBIL、IBIL水平均远低于O-A、O-B组；O-B组RBC计数低于O-AB组，以上差异均有统计学意义（P<0.05）。在血型分析中，有学者发现A型血的患儿相对于B型血更加容易发生ABO-HDN，认为新生儿红细胞上的A型抗原决定簇多，更加容易结合IgG抗体[11]；但是也有学者研究认为ABO-HDN的发病率与血型无相关性[12]。刘建朝等[13]研究显示，O-AB组TBIL均高于O-A组和O-B组，HB低于O-B组，这是因为O型孕妇可产生IgG类抗-A、抗-B、抗-AB，以上抗体均可以与AB型白细胞结合，与单一抗体相比，溶血程度更高。在本研究显示的结果中，A型血与B型血新生儿患病数量相似，但B型血患儿相对于A型血患儿，有更明显的贫血与溶血倾向；A型、B型血的患儿与AB型血患儿相比，溶血表现也更明显。本研究溶血结论与文献[11-13]中相差较大，可能是由于本次研究所选取的数量较少，病例种类较为集中，也有可能与不同研究人员纳入的标本中人群偏倚有关。

本研究结果显示，DAT阳性率为14.9%（38/255）较低，在直抗试验凝集强度为阴性、阳性1+、阳性2+、阳性3+的各组数据中，监测的各实验室结果比较，差异不具有统计学意义（P>0.05）。直接抗人球蛋白试验检测结果为阴性也不能排除HDN的可能。在本次收集数据中，没有出现DAT结果为阳性（4+）的强阳性标本，所以强阳性标本的比较结果缺如，这也可能是造成本次结果无差异性的一个客观原因，需进一步扩大标本量继续监测。

综上所述，HDN患儿的贫血、溶血程度与不同性别类型关联度较小，与直抗试验凝集强度无关，与HDN患儿检测及确诊日龄、不同母婴血型的关联性较大，对于确诊日龄≤2 d、母婴血型为O-A、O-B的患儿，应尽早做溶血三项试验以明确诊断，密切关注RBC、HB和TBIL、IBIL水平的变化情况，做好ABO-HDN早期预防以及应对措施，减少ABO-HDN造成的影响，提高新生儿的生存质量。

参考文献

[1] 陈清艳，王秋实.新生儿溶血病发病机制及产前诊断研究进展[J].临床输血与检验，2021，23（5）：578-584.

[2] 刘莹，杨珍珍，刘小艳，等.O型血孕妇血清中IgG抗A（B）抗体效价与ABO新生儿溶血症的相关性研究[J].临床医学研究与实践，2021，6（15）：7-9.

[3] 王文婷，党盼玉，张保萍，等.抗-D抗体致新生儿溶血症的输血策略及其预后疗效评估分析[J].临床输血与检验，2021，23（1）：38-40.

[4] 张钰，张璐，许纪玲，等.1 300例新生儿溶血病血型血清学检测结果分析[J].中国输血杂志，2020，33（9）：922-924.

[5] MARKHAM K B，ROSSI K Q，NAGARAJA H N，et al.Hemolytic disease of the fetus and newborn due to multiple maternal antibodies[J].Am J Obstet Gynecol.2015，213（1）：68.1-5.

[6] 陈静思，裘晓乐.530例新生儿溶血病检测及危险因素分析[J].中国妇幼保健，2020，35（24）：4758-4760.

[7] 朱洁好，叶伙梅.189例新生儿ABO溶血三项试验结果的分析[J].实验与检验医学，2021，39（2）：472-473，485.

[8] 蔡大凤，荣成智，秦雪，等.新生儿溶血病患儿的实验结果及相关因素分析[J].检验医学与临床，2020，17（14）：2000-2003.

[9] 林粦梅，刘建武，王燕京.ABO新生儿溶血病与O型血孕妇IgG效价间的相关性分析[J].中国医药科学，2018，8（24）：209-212.

[10] 尹明偉，陈学军，曾智，等.母婴ABO血型不相合的高胆红素血症患儿新生儿溶血病确诊率的影响因素分析[J].国际检验医学杂志，2020，41（6）：663-666，670.

[11] 郭莹莹，霍姿含，王震，等.1 350例新生儿溶血三项试验的血清学检测分析[J].中国免疫学杂志，2016，32（9）：1357-1359，1363.

[12] 任明，强文，江梦天，等.新生儿溶血病检查在重度高胆红素血症患儿诊疗中的意义[J].临床血液学杂志，2019，32（6）：407-410，414.

[13] 刘建朝，王亚红，贺锋.新生儿溶血病患儿临床资料与溶血程度关系的研究[J].临床血液学杂志，2021，34（2）：105-108.

（收稿日期：2023-05-28）