上皮性卵巢癌组织POSTN、COL11A1表达变化及其与临床病理特征和预后的关系

侯海侠，刘忠杰，贾卫静，杜素果，李桂芬

衡水市人民医院妇科，河北衡水053000

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，全球每年新发病例约24万例、死亡病例达到15万例［1］。上皮性卵巢癌（EOC）是卵巢癌最常见的病理类型，占90%以上。EOC起病隐匿，早期无明显症状，大多数患者就诊时已为中晚期，错过了最佳治疗时机，预后较差［2］。骨膜蛋白（POSTN）是一种分泌型细胞外基质蛋白，与整合素结合能够促进上皮细胞的黏附和迁移，从而参与组织发育和骨再生、修复等生理过程［3］。有研究发现，POSTN能够通过与肿瘤细胞表面的整合素受体结合，促进血管内皮生长因子C表达和淋巴管生成，继而引起宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移［4］。Ⅺ型胶原α1（COL11A1）蛋白是一种纤维状胶原蛋白，也是细胞外基质最重要的组成成分。近年研究发现，在宫颈癌［5］、子宫内膜癌［6］中均存在COL11A1高表达现象，并且其高表达能够促进肿瘤的侵袭和转移。但目前POSTN、COL11A1表达与EOC的关系尚不完全清楚。本研究探讨了EOC组织POSTN、COL11A1表达变化及其与临床病理特征和预后的关系。现报告如下。

1.料与方法

1.1.床资料 选择2018年1月—2019年12月衡水市人民医院妇科收治的EOC患者122例。所有患者经术后组织病理学检查明确诊断。纳入标准：①符合EOC诊断标准；②初诊，入院前未接受任何抗肿瘤治疗；③接受外科手术治疗；④临床病理资料和随访资料完整；⑤年龄＞18岁。排除标准：①合并子宫内膜异位症或多囊卵巢综合征者；②合并其他部位恶性肿瘤者；③合并严重感染性疾病或自身免疫性疾病者；④妊娠期或哺乳期妇女。患者年龄30～78（56.67 ± 6.34）岁，其中≤60岁64例、＞60岁58例；病理类型：浆液性74例，非浆液性48例；肿瘤最大径：＞3 cm 74例，≤3 cm 48例；FIGO分期：Ⅰ、Ⅱ期76例，Ⅲ期46例；组织分化程度：高中分化54例，低分化68例；有淋巴结转移46例，无淋巴结转移76例。同期另选在衡水市人民医院妇科接受输卵管切除术的输卵管妊娠患者60例，年龄28～79（56.05 ± 6.11）岁，均经术后组织病理学检查证实为正常输卵管上皮组织，并排除子宫内膜异位症、多囊卵巢综合征、严重感染性疾病、自身免疫性疾病及其他部位恶性肿瘤者。两组年龄具有可比性。本研究经衡水市人民医院伦理委员会批准（批准文号：2018-0214）。所有研究对象或其家属知情同意并签署书面知情同意书。

1.2.OSTN、COL11A1蛋白表达检测 采用免疫组化法。取术中获取的EOC组织和正常输卵管上皮组织，10%中性甲醛固定16 h，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。在65 ℃烤箱中烤片2 h，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，在柠檬酸盐抗原修复缓冲液中热修复，3% H2O2去除内源性过氧化物酶。5%正常山羊血清封闭2 h，分别滴加POSTN、COL11A1兔单克隆抗体，4 ℃孵育过夜。次日，滴加辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗，室温孵育2 h。DAB显色，苏木素复染，盐酸乙醇分化，自来水冲洗返蓝，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，显微镜下拍照观察。以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知POSTN、COL11A1蛋白阳性表达的宫颈癌组织切片作为阳性对照。

采用双盲法由两位病理科医师独立阅片，结果不一致时协商解决。POSTN、COL11A1蛋白阳性染色定位于细胞质、细胞膜或细胞核，呈棕黄色颗粒。染色强度评分：以阳性细胞呈色反应为准，无色为0分、浅棕黄色为1分、深棕黄色为2分。随机选取5个200倍视野，计数每视野阳性细胞数和细胞总数，计算阳性细胞比例。阳性细胞比例评分：无为0分，＜25%为1分，25%～50%为2分，＞50%为3分。根据染色强度和阳性细胞比例半定量分析，染色强度评分与阳性细胞比例评分乘积≥2为阳性。

1.3.访 所有EOC患者出院后采取电话或门诊复查形式定期随访3年，第1年每个月随访1次，第2年每3个月随访1次，第3年每3～6个月随访1次。随访截至2023年1月1日，随访终点为患者死亡或至随访截至日期，记录患者生存时间。

1.4.计学方法 采用SPSS23.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验。相关性分析采用Spearman秩相关分析。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比较采用Log-rank检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2.果

2.1.OC组织与正常输卵管上皮组织POSTN、COL11A1蛋白表达比较 EOC组织POSTN、COL11A1蛋白阳性表达率分别为69.67%（85/122）、67.21%（82/122），正常输卵管上皮组织分别为26.67%（16/60）、30.00%（18/60）。EOC组织POSTN、COL11A1蛋白阳性表达率均高于正常输卵管上皮组织（χ2分别为30.118、22.499，P均＜0.01）。

2.2 EOC组织POSTN、COL11A1蛋白表达的关系 Spearman秩相关分析显示，EOC组织POSTN蛋白表达与COL11A1蛋白表达呈正相关关系（r=0.722，P＜0.05）。

2.3.OC组织POSTN、COL11A1蛋白阳性表达与临床病理特征的关系 见表1。

表1.OC组织POSTN、COL11A1蛋白阳性表达与临床病理特征的关系

2.4.OC组织POSTN、COL11A1蛋白表达与预后的关系 122例EOC患者随访期间死亡41例，失访3例，3年总体生存率为65.55%（78/119）。POSTN蛋白阳性表达者与阴性表达者3年累积生存率分别为65.60%、77.30%，二者生存曲线比较差异有统计学意义（Log-rankχ2=14.291，P＜0.05）。COL11A1蛋白阳性表达者与阴性表达者3年累积生存率分别为68.80%、79.60%，二者生存曲线比较差异有统计学意义（Log-rankχ2=13.870，P＜0.05）。见图1。

图1.OC组织不同POSTN、COL11A1蛋白表达者的生存曲线

3.论

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，在我国每年新发病例达5.2万例、死亡病例达2.3万例［7］。EOC是卵巢癌最常见的病理类型，占90%以上。由于卵巢位于盆腔深部，卵巢癌早期无特异性症状，大多数患者就诊时已为中晚期，错过了最佳治疗时机，预后较差［2］。近年来，随着医疗技术进步，EOC无论是在外科手术治疗方案上还是在药物治疗方案上都在不断优化，使患者预后得到明显提升。但仍有部分患者出现肿瘤耐药或治疗抵抗，术后发生复发或转移，导致预后不良［2］。目前，临床上主要根据FIGO分期、组织分化程度等临床病理特征评估EOC患者预后，尚无有效评估EOC预后的肿瘤标志物。因此，深入研究EOC的发病机制，寻找能够预测EOC治疗结局的肿瘤标志物，具有重要的临床意义。

POSTN基因定位于人染色体13q13.3，其编码蛋白是一种可溶性细胞外基质蛋白，能够与细胞外基质结合，从而参与炎症、心血管疾病、肿瘤等病理生理过程［3］。近年研究发现，宫颈癌组织POSTN高表达，其高表达能够促进淋巴管生成以及肿瘤细胞淋巴结转移［4］。鉴于淋巴结转移是EOC较为常见的病理特征之一［8］。我们推测POSTN在EOC的发生、发展中可能发挥重要作用。本研究结果发现，EOC组织POSTN蛋白阳性表达率显著高于正常输卵管上皮组织；FIGO分期Ⅲ期、有淋巴结转移的EOC组织POSTN蛋白阳性表达率高于FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期及无淋巴结转移的EOC组织。提示POSTN能够参与EOC的发生、发展。在EOC组织中POSTN表达上调可能与转录调控异常有关。有研究报道，EOC组织转录因子TWIST1表达明显升高，TWIST1能够通过与POSTN基因启动子结合，在转录水平上促进POSTN表达［9］。LIN等［10］研究报道，POSTN还能通过自分泌作用与EOC细胞表面的整合素β受体结合，激活细胞外信号调节激酶和核因子κB，促进肿瘤细胞增殖和侵袭。此外，POSTN还能趋化THP-1细胞，促进其向M2型巨噬细胞极化，促进肿瘤细胞免疫逃逸，导致肿瘤进展［10］。本研究结果显示，POSTN蛋白阳性表达者与阴性表达者3年累积生存率分别为65.60%、77.30%，二者生存曲线比较差异有统计学意义。提示POSTN蛋白阳性表达的EOC患者预后相对较差。究其原因，POSTN蛋白表达升高能够促进EOC进展和耐药性形成，导致患者预后不良。有学者在原代浆液性卵巢癌细胞系中发现，对阿霉素和甲氨蝶呤耐药的肿瘤细胞POSTN蛋白表达明显升高，敲低POSTN后，肿瘤细胞恢复对化疗药物的敏感性［11］。因此，POSTN有可能成为评估EOC预后的肿瘤标志物，并且以POSTN为靶点的治疗有可能成为EOC新的治疗策略。

COL11A1基因定位于人染色体1p21.1，其编码蛋白属于胶原蛋白家族成员，能够参与构成细胞外基质骨架及骨形成和发育等生物学过程。研究表明，在卵巢癌肿瘤微环境中COL11A1蛋白阳性的肿瘤相关成纤维细胞浸润增加并能促进细胞外基质产生，导致肿瘤化疗抵抗形成，与患者预后不良有关［12］。本研究结果显示，EOC组织COL11A1蛋白阳性表达率显著高于正常输卵管上皮组织；FIGO分期Ⅲ期、有淋巴结转移的EOC组织COL11A1蛋白阳性表达率高于FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期及无淋巴结转移的EOC组织。提示COL11A1能够参与EOC的发生、发展。EOC组织COL11A1表达升高可能与miRNA表达调控有关。研究发现，miR-335能够结合COL11A1 mRNA的3'非编码区，降低COL11A1 mRNA稳定性，抑制COL11A1蛋白表达，而在卵巢癌细胞中miR-335表达显著降低，导致COL11A1蛋白表达升高［13］。有研究证实，在EOC中COL11A1能够激活细胞外信号调节激酶，诱导p65易位进入细胞核，p65与胰岛素样生长因子结合蛋白2启动子结合，诱导转化生长因子β表达，促进EOC细胞增殖和侵袭［14］。本研究结果显示，COL11A1蛋白阳性表达者与阴性表达者3年累积生存率分别为68.80%、79.60%，二者生存曲线比较差异有统计学意义。提示COL11A1蛋白阳性表达的EOC患者预后相对较差。究其原因，一方面是COL11A1蛋白表达升高能够通过促进EOC细胞TWIST1表达，促进肿瘤细胞发生上皮间质转化，继而导致肿瘤侵袭和转移［15］；另一方面，COL11A1蛋白表达升高能够增强EOC细胞对化疗药物的耐药性，降低化疗效果，导致患者预后不良［16］。因此，COL11A1有可能成为评估EOC预后的肿瘤标志物。

本研究Spearman秩相关分析发现，EOC组织POSTN蛋白表达与COL11A1蛋白表达呈正相关关系，提示二者在EOC的发生、发展中可能存在协同作用。PARK等［17］研究表明，在胰腺癌肿瘤微环境中肿瘤相关成纤维细胞能够分泌POSTN和酸性分泌蛋白，促进基质结缔组织COL11A1沉积，导致胰腺癌进展。但目前二者在EOC中的协同作用机制尚不清楚，有待于进一步研究。

综上所述，EOC组织POSTN、COL11A1高表达，二者表达变化与FIGO分期、淋巴结转移以及预后密切相关。但本研究尚存在一定不足之处，如样本量较小、未对不同病理类型的EOC分层分析，有待于今后进一步研究。