WISP2和Slug表达与早期低危子宫内膜腺癌远处转移及预后的关系

李月霞 任艳霞 杨晓艳 李琨琨

子宫内膜癌(Endometrial cancer)作为常见的妇科恶性肿瘤,已呈现总体发病年龄提前和发病率稳步上升的趋势[1-2]。根据国家肿瘤中心的数据显示,2015年中国新出现子宫内膜癌病例63 400例,死亡21 800例[3]。早期低危子宫内膜癌预后较好,一般术后无需辅助治疗,但仍有部分患者术后发生远处转移,预后较差[4]。寻找预测早期低危子宫内膜癌未来发生远处转移可能性的生物学指标成为近年来研究的热点。WISP-2是结缔组织生长因子/富含半胱氨酸的肾母细胞瘤过表达(CCN) 家族的分泌蛋白成员,也称为CCN5[5]。在多数研究中,WISP-2的表达与乳腺癌、胰腺癌和结肠癌的侵袭性呈负相关,表明具有肿瘤抑制样活性[6-7]。WISP-2表达由雌激素以及雌激素受体阳性细胞中的表皮生长因子和胰岛素样生长因子诱导[8]。Slug (Snail2) 是一种 C2H2 型锌指转录因子,也是一种EMT标志物,已在侵袭性癌症中得到鉴定,并且与结肠癌和卵巢癌的较差临床结果相关[9-10]。本研究采用免疫组化方法对早期低危子宫内癌患者癌组织中的WISP2和Slug进行了检测,探讨其表达变化与早期低危子宫内膜腺癌远处转移及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2013年2月至2018年2月于本院接受全面分期手术治疗的早期低危子宫内膜腺癌患者56例。纳入标准:①符合《子宫内膜癌诊治规范》[11]中关于子宫内膜样腺癌的诊断标准,术后病理诊断为子宫内膜样腺癌,且患者行手术治疗;②患者术前未行放、化疗等其他治疗;③病理分期根据国际妇产科联盟(FIGO,2009)子宫内膜癌术后病理分期标准分为ⅠA期;④患者及家属已签署知情同意书。排除标准:①合并患有妇科炎症患者;②合并其他恶性肿瘤;③合并处于妊娠状态患者。

1.2 免疫组化分析WISP2和Slug水平

应用免疫组织化学检测WISP2和Slug表达,以鼠抗人WISP2和Slug单克隆抗体为一抗,用已知阳性切片作阳性对照,PBS代替一抗作阴性对照,用苏木精复染细胞核,参考文献标准判断,WISP2和Slug阳性产物均位于细胞核,视野中出现粗细一致的棕黄色为阳性染色,无棕色反应为阴性染色。在阳性颗粒密集部位随机选取10个200倍视野,计数每个视野中细胞的染色情况,取平均值。根据阳性细胞占全部细胞数的百分数对其进行分级,阴性为阳性细胞数<10%;阳性为阳性细胞数> 10% 。根据上述标准将患者分为WISP2阳性组(n=21)和WISP2阴性组(n=35);Slug阳性组(n=25)和Slug阴性组(n=31)。

1.3 收集临床资料以及随访资料

采用电话及门诊或住院复查等方式进行随访3年,随访至2021年2月,随访中的相关检测包括妇科检测、超声、胸部X线片、阴道残端细胞学检查及血清CA125检测等,根据是否发生远处转移(FIGO 分期Ⅳ期)分为两组,无远处转移组(n=32)和远处转移组(n=24)。了解患者生存情况。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 WISP2和Slug与早期低危子宫内膜腺癌患者远处转移的关系

根据结果发现,WISP2在无远处转移者中阳性表达率为53.13%(17/32),WISP2在远处转移者中阳性表达率为16.67%(4/24),差异具有统计学意义(P<0.05);Slug在无远处转移者中阳性表达率为25.00%(8/32),Slug在远处转移者中阳性表达率为70.83%(17/24),差异具有统计学意义(P<0.05),具体见表1。

表1 WISP2和Slug与早期低危子宫内膜腺癌患者远处转移的关系/例

表2 生存组与死亡组WISP2和Slug表达情况比较/例

2.2 生存组与死亡组 WISP2和Slug表达情况比较

生存组WISP2表达水平明显高于死亡组(P<0.05),生存组Slug表达水平明显低于死亡组(P<0.05),见表 2。

2.3 影响早期低危子宫内膜腺癌患者预后多因素logistic分析

多因素logistic回归分析显示,WISP2和Slug均为影响早期低危子宫内膜腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05),见表3。

表3 影响早期低危子宫内膜腺癌患者预后的多因素logistic分析

3 讨论

子宫内膜癌是临床常见的女性生殖道恶性肿瘤,发病率在近年来呈不断上升的趋势,一般在50～70岁年龄段高发,且有年轻化发展的趋势[12]。在我国,每年子宫内膜癌的发病率为0.634%,病死率为0.218%[13]。手术为主的综合治疗可提高子宫内膜癌患者生存率,但侵袭或转移者仍预后不良[14]。癌症的发生为多机制、多因素的复杂生物学反应,子宫内膜癌的发生被认为是一个多步骤的过程,涉及激素调节、基因突变、粘附分子和细胞凋亡的协调相互作用,但是目前子宫内膜癌确切的病理机制尚未明确[15-16]。

WISP2是CCN蛋白家族的一员,该家族包括6个成员,包括CCN1(CYR61)、CCN2(CTGF)、CCN3(NOV)、CCN4(WISP1)、CCN5(WISP2)和 CCN6 (WISP3)[17]。先前的研究表明,CCN 在不同的组织、器官和肿瘤中表现出不同的表达谱和转录水平[18]。 CCN 成员与许多细胞功能以及病理状况有关[19]。WISP2 是富含半胱氨酸的 CCN 细胞外基质相关蛋白家族的成员[20]。在大多数研究中,WISP-2 的表达与乳腺癌、胰腺癌和结肠癌的侵袭性呈负相关,表明具有肿瘤抑制样活性[21-22]。WISP-2 在乳腺癌进展过程中显示出短暂升高的水平[23]。WISP-2 表达由雌激素以及雌激素受体阳性细胞中的表皮生长因子和胰岛素样生长因子诱导,WISP-2 是雌激素诱导和胰岛素样生长因子诱导的增殖所必需的[24-25]。在癌症中,WISP2 参与细胞增殖、迁移和转移[26]。然而,WISP2 在子宫内膜癌中的功能仍不清楚。Slug 在骨骼干/基质细胞 (SSC) 中表达[27]。Slug 在 pro-B 细胞急性白血病中异常上调,在正常造血祖细胞中起到抗凋亡因子的作用[28]。Slug 在癌症中异常表达,并调节包括细胞增殖、凋亡和细胞运动等过程[29]。本研究中WISP2在无远处转移者的阳性表达率明显高于远处转移者的阳性表达率;Slug在无远处转移者的阳性表达率高于远处转移者的阳性表达率。WISP2在抑制子宫内膜癌发生的同时还可以减少淋巴结的转移,Slug在诱发子宫内膜癌的同时,还可以增强侵袭转移,加快疾病的进展。生存组的 WISP2表达水平明显高于死亡组,生存组的 Slug表达水平明显低于死亡组。 WISP2、Slug均为影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素。这提示其和子宫内膜癌预后有一定关系,通过测定其表达情况能够辅助预后的评价。

综上所述,早期低危子宫内膜腺癌患者癌组织中 WISP2阴性、Slug阳性表达者容易发生远处转移,生存率更低,可作为子宫内膜癌预后评价的辅助指标。然而本研究存在偏移,首先是中心单一以及样本量偏少,以及随访时间短,因此未来还需要多中心以及更大扩大样本量的前瞻性试验来证实此结果。