COX-2、MSS表达与结直肠癌临床病理特征及其预后的相关性研究

陈晓静

结直肠癌为临床常见病,且近年因人们生活结构与饮食习惯的不断转变,促使该病的发生率呈逐年上升趋势[1-2]。结直肠癌的发病机制较为复杂,临床尚未完全明晰,通常认为该病是遗传、环境等多种因素共同作用而引发[3-4]。结直肠癌病死率较高,及时明晰本病的发病机制,指导临床施行针对性的治疗,对于改善患者预后至关重要。伴随分子生物学与遗传学的持续发展,临床在分子水平致癌机制的研究中愈发深入。环氧化酶-2(COX-2)能够于病理条件下被多种损伤迅速激活,尤其是在恶性肿瘤中表现为高表达[5]。微卫星不稳定性(MSI)是该病的发病原理之一,但临床关于微卫星稳定性(MSS)与结直肠癌发生的关系并不明确[6]。MSS说明肿瘤发生的过程无错配修复基蛋白(MMR)参与,存在其他分子机制。基于此,本研究分析两者表达与结直肠癌临床病理特征以及预后之间的联系,以及时明晰结直肠癌患者的发病机制,指导临床进行针对性的治疗。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取本院2018年2月至2019年2月收治的64例结直肠癌患者,采集所有患者的病灶组织新鲜样本(病灶组)与正常肠黏膜(距癌组织≥5 cm)新鲜标本(对照组)。纳入标准:所有患者的病历有关资料齐全;患者经实验室相关检查证实。排除标准:存在酒精、药物依赖史者;合并凝血功能异常者;存在免疫系统病症者;严重电解质紊乱者;合并严重的脑器质性疾病者;存有心肝肾等重要脏器功能不全者;合并血液系统疾病者;存有精神疾病,无法配合进行研究者。所有患者中男性38例,女性26例;年龄34～75岁,平均年龄(61.48±2.39)岁;肿瘤直径3～9 cm,平均直径(6.45±0.87)cm;分化程度:25例高分化,18例中分化,21例低分化;临床分期:35例Ⅰ+Ⅱ期,29例Ⅲ+Ⅳ期。

1.2 方法

标本采集:采集全部患者病灶组织新鲜样本与正常肠黏膜(距癌组织≥5 cm)新鲜标本,全部样本均经由10%福尔马林固定,脱水、净蜡、包埋,切成4 μm切片,之后评分为两份,于-80 ℃冰箱内保存。COX-2、MSS检测:采用免疫组化法检测COX-2表达,应用3%过氧化氢(H2O2)室温赋育10 min去除过氧化物酶,微波炉内高温抗原修复10 min;二甲苯脱脂后,行免疫组织化学染色,COX-2滴加抗COX-2单克隆抗体(稀释度1∶200,北京中杉金桥生物计数有限公司),阴性对照组以磷酸盐缓冲液(PBS)替代一抗,于4 ℃环境下过夜,之后以PBS反复清洗3次,5 min/次,苏木精染色,封片镜检。阳性判断标准:严格按照染色强度、阳性细胞所占百分比乘积判定,其中染色强度:0分:无色;1分:淡黄色;2分:棕黄色;3分:棕褐色。阳性细胞所占百分比计分:计数1000个肿瘤细胞,阳性表达率10%之下提示无明显阳性反应,10%以上提示阳性反应,其中阳性表达率≤5%为0分,6%～25%为1分,26%～50%为2分,>50%为3分;两者相乘为最终评分,其中阴性为0～1分,阳性为2分及以上。MSS检测:采用免疫组化法测定病灶组织内错配修复蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2的表达,固定病灶组织,包埋,石蜡切片;考片、脱蜡后,以PBS清洗3次,3 min/次,之后以30%H2O2-甲醇混合液浸泡切片10 min,放进染缸(柠檬酸钠),煮沸10 min,恢复到室温;之后依据1∶300稀释兔抗MLH1、MSH2、MSH6、PMS2,50 μL滴至切片组织之上,于4 ℃环境下过夜;完毕后室温平衡0.5 h,PBS洗涤3次,二抗于组织之上,并以室温温育0.5 h;染色、水洗、吹干,封片镜检。阳性判断:MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均不见表达缺失(即染色均为阳性)判定为阳性;阴性判断:4个修复蛋白内任意1个或1个以上表达缺失则判断为阴性。

1.3 观察指标

(1)病灶组与对照组COX-2、MSS阳性表达率对比。(2)COX-2、MSS表达与患者临床病理特征的关系。(3)COX-2、MSS阳性表达与患者预后的关系。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 病灶组与对照组COX-2、MSS阳性表达情况对比

病灶组COX-2、MSS阳性表达率显著高于对照组,有统计学差异(P<0.05),见表1。

2.2 COX-2、MSS表达与患者临床病理特征的关系

COX-2、MSS阳性表达与结直肠癌患者年龄、性别无关(P>0.05);与肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期以及肿瘤直径密切相关(P<0.05),见表2。

表2 COX-2、MSS表达与患者临床病理特征的关系(例,%)

2.3 COX-2、MSS阳性表达与患者预后的关系

Kaplan-Meier结果显示:COX-2、MSS阳性表达患者的3年生存率明显低于COX-2、MSS阴性表达患者,有统计学差异(P<0.05),见图1～2。

图2 MSS阳性表达者Kaplan-Meier生存曲线分析

3 讨论

结直肠癌具有较高的患病率、致死率,亦是影响人们身心健康的重大常见疾病[7-8]。结直肠癌早期确诊、治疗后患者预后较为好,但结直肠癌早期无明显特异性症状,导致多数患者经临床诊断时已位于中晚期,且多伴有转移,难以完全根治,预后较差[9-10]。因此,需探寻具有特异性的生物标志物,以尽早诊断结直肠癌,从而指导临床施行更为规范的个体化治疗,以提高生存率。

COX-2为前列腺素合成所需酶之一,正常组织内其较少表达,但在胃癌等恶性肿瘤中呈现为高表达。相较于MSI,MSS指的是MLH1、MSH2、MSH6 3个MMR均无表达缺失,存在其他分子机制致癌。但临床关于COX-2、MSS与结直肠癌患者的关系尚未探明,还需进一步探究。本研究结果显示,病灶组的COX-2、MSS阳性表达率显著高于对照组,表明COX-2、MSS与结直肠癌的发生、发展联系紧密。其原因为COX-2存在原癌基因活性,可参与细胞生长、侵袭并阻碍细胞凋亡,并会加快肿瘤增殖[11-12]。而MMS能够激活下游TGF-β/Smads信号通路,从而加快肿瘤恶化[13-14]。本研究结果显示,结直肠癌患者的COX-2、MSS阳性表达与分化程度、淋巴结转移、临床分期以及肿瘤直径密切相关,说明COX-2、MSS的阳性表达与结直肠癌恶性程度有关。其原因在于COX-2可加快肿瘤细胞增殖,增强癌细胞入侵功能,并阻碍机体中的抗肿瘤免疫反应。COX-2还可通过刺激肿瘤细胞分泌前列腺素,加快内皮细胞生长,促使血管形成,并通过提高血管内皮生长因子浓度,诱导肿瘤血管形成,促使病情加重[15]。本研究Kaplan-Meier结果显示:COX-2、MSS阳性表达患者的3年生存率明显低于COX-2、MSS阴性表达患者,差,提示COX-2、MSS阳性表达的患者预后较差,临床需予以积极的重视。

综上所述,COX-2、MSS在结直肠癌患者机体内表达水平较高,COX-2、MSS与患者的临床病理特征及预后密切相关,且表达水平越高则患者预后越差,临床可通过检测COX-2、MSS水平为患者后续治疗的开展提供参考。