非小细胞肺癌患者Ezrin和Moesin表达及其临床意义

宋 璐 李红燕 王少芳

肺癌为常见恶性肿瘤疾病之一,发病率高、死亡率高,属于肿瘤死亡的主要原因之一[1-2]。其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中常见的疾病类型之一,主要特点为肿瘤细胞分裂及转移较晚,早期阶段症状不具有特异性,待确诊后大部分患者处于中晚期阶段[3-4]。目前主要采用手术、放化疗等方式治疗,但是临床实践发现,此类患者总生存率较低。因此,积极加强对NSCLC疾病标志物的研究对于制定相应治疗方案尤为重要。膜突蛋白(Ezrin)属于一类膜细胞骨架连接蛋白,主要通过与细胞表面相关受体或者黏附分子等相互结合,进而调节细胞黏附性,最终调节肿瘤细胞的侵袭以及转移程度[5]。膜结构伸展刺突蛋白(membrane structure stretched spike protein,Moesin)属于ezrin-radixin-moesin(ERM)家族中关键成员之一,主要功能为连接肌动蛋白细胞骨架及跨膜受体[6]。Moesin、Ezrin在多种肿瘤细胞中存在异常表达现象,主要参与肿瘤细胞的转移、浸润等,属于关键潜在靶分子。本次研究主要探讨NSCLC患者Ezrin、Moesin表达及其临床意义,为此类疾病患者预后及治疗提供指导意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.1.1 纳入标准 均符合《NCCN 2008年非小细胞肺癌临床实践指南更新》中关于NSCLC的诊断标准[7];均以术后病理学检查作为金标准;年龄18～60岁;均无放化疗治疗史;均无其他合并症;可见转移灶(≥2 cm)。

1.1.2 排除标准 全身性感染性疾病;严重肝脏、肾脏类重要脏器功能障碍;长时间免疫抑制剂的患者;其他恶性肿瘤疾病史者;入院资料不完整。

1.1.3 研究对象 获取2017年1月至2020年12月在我院就诊的NSCLC患者120例为研究对象,所有研究对象均同意术中留取病灶组织标本及癌旁组织。其中男性88例,女性32例;年龄≥55岁66例,年龄<55岁54例;组织学类型:腺癌92例,鳞状细胞癌28例;临床分期:Ⅰ期20例,Ⅱ期76例,Ⅲ期24例;淋巴结转移:有96例,无24例;吸烟史:有吸烟史77例,无吸烟史43例;分化程度:未分化+低分化患者76例,高分化患者44例。

1.2 研究方法

1.2.1 主要试剂来源 抗Ezrin蛋白单克隆抗体(生产厂家:福州迈新生物技术开发有限公司,型号:MAB-0351);抗Moesin蛋白单克隆抗体(生产厂家:上海亿欣生物科技有限公司,型号:MRM-009);DAB底物试剂盒(生产厂家:上海炎熙生物科技有限公司,规格:500 ml)。

1.2.2 免疫组织化学染色法 获取上述NSCLC组织、癌旁组织标本,予以石蜡包埋,切片厚度为3 m,60 ℃烤片,1 h后脱水处理,加EDTA修复,再分别予以蒸馏水、10%过氧化氢溶液,孵育半小时后,再予以PBS溶液清洗,3次×3 min,分别加入Ezrin单克隆抗体(1∶50)及Moesin蛋白单克隆抗体(1∶200),37 ℃环境下孵育,1 h后,加入PBS溶液清洗,3次×3 min,再加入二抗抗体(1∶2000),37 ℃环境下孵育,20 min后再加PBS溶液清洗,复染、脱水。

结果判定[8]:结果判定:选取5个视野,每个视野包括100个细胞,记录阳性细胞占比,根据着色细胞比例计分,阳性细胞占比低于5%记为0分,阳性细胞占比为5%～25%记为1分,阳性细胞占比为26%～50%记为2分,阳性细胞占比超过50%记为3分。根据着色的强度计分,不着色记为0分,浅黄色记为1分,棕黄色记为2分,棕褐色记为3分。阴性表达表示着色细胞占比与着色强度的乘积得分低于4分;阳性表达表示着色细胞占比与着色强度的乘积得分超过4分。

1.2.3 随访 采用电话的形式进行随访,术后每3个月随访1次,共随访1年,随访过程中无失访的患者。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 Ezrin、Moesin在NSCLC组织及癌旁组织中的表达

NSCLC组织Ezrin、Moesin阳性表达率均显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(χ2=26.696,P=0.000;χ2=28.254,P=0.000),见表1。

表1 Ezrin、Moesin在NSCLC组织及癌旁组织中的表达(例,%)

2.2 Ezrin、Moesin阳性表达与临床病理参数的关系

Ezrin、Moesin在不同临床分期、淋巴结转移中进行比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Ezrin、Moesin阳性表达在不同性别、年龄、组织学类型、分化程度方面比较,差异无统计学意义(P>0.05),且Ezrin、Moesin阳性表达与吸烟史无关(P>0.05),见表2。

表2 Ezrin、Moesin阳性表达与肺癌临床病理参数的关系(例,%)

2.3 Ezrin、Moesin表达间的关系

Ezrin、Moesin蛋白表达间呈正相关关系(γ=0.527,P=0.005),见表3。

表3 Ezrin、Moesin表达间的关系/例

2.4 随访12个月的生存情况

随访1年,Ezrin、Moesin阳性表达患者生存率均显著低于对应阴性表达(χ2=5.099,P=0.024;χ2=12.485,P=0.000),见表4、图1、图2。

图1 Ezrin表达与NSCLC患者的生存曲线

图2 Moesin表达与NSCLC患者的生存曲线

表4 随访1年的生存情况

3 讨论

Ezrin属于细胞骨架蛋白,主要功能为将细胞外信号分子传递至细胞内骨架蛋白的分子。多项研究均表示[9-10],Ezrin蛋白主要通过放大或者协同细胞表面转移信号分子,信号转导平衡受到影响,进而促进肿瘤细胞发生转移,最终参与细胞转移。Ezrin蛋白异常高表达可以促进肿瘤细胞的转移,由此,其可能成为潜在分子靶点。本次研究发现与癌旁组织比较,NSCLC组织中Ezrin蛋白阳性表达均显著更高。且还发现其与临床分期、淋巴结转移等有关。另外在Lee等[11]研究中,研究也发现Ezrin在不同临床分期、淋巴结转移中的表达异常上升,表明Ezrin与肿瘤分期及淋巴结转移存在关系,进一步证实本研究结果。Ezrin阳性表达患者生存率明显低于阴性表达者,表明Ezrin可作为预测NSCLC患者预后指标。

Moesin在多种恶性肿瘤疾病中表达均异常,如胃癌、喉癌及肝癌等,其主要通过调节粘附分子表达,进而调节肿瘤细胞的转移和浸润程度,最终对患者预后恢复产生不良影响[12]。本研究发现Moesin在NSCLC组织表达显著高于癌旁组织,且还发现Moesin表达与临床分期及淋巴结转移有关。表明Moesin参与了NSCLC疾病发生和发展,且与肿瘤细胞侵袭、转移有关。本研究结果与目前研究报道具有一致性。本次研究结果还显示,Moesin阳性表达患者生存率明显低于阴性表达者,表明临床上可通过检测Moesin水平评估患者预后恢复情况及治疗效果。

国外一项研究称[13],Moesin、Ezrin常共同表达在细胞膜表面,主要参与维持细胞形态及运动过程,且还表明Moesin、Ezrin表达存在较好的相关性,进一步参与多种肿瘤疾病的发生和发展。而本次研究研究结果也发现,Ezrin、Moesin蛋白表达之间呈现正相关关系(γ=0.527,P=0.005)。说明Ezrin和Moesin可能共同参与NSCLC进展,但具体机制有待深入研究。

综上所述,Ezrin和Moesin在NSCLC组织中均呈现高表达,均与NSCLC临床分期、淋巴结转移存在关系,通过联合检测上述指标可用于预测患者预后,具有一定指导意义。但本研究也存在局限性,样本量偏少,且Ezrin和Moesin蛋白在NSCLC中的具体分子机制还需深入探讨。