胸腺五肽对AA肉鸡免疫器官发育的影响

许辉 张乐 刘小琬 张晶晶 王寒

摘 要：本试验旨在研究胸腺五肽对AA肉鸡免疫器官发育的影响。选用125只14日龄健康AA肉鸡，按体重、性别随机分为5个处理，每个处理25只。从第14天开始，对照组注射生理盐水，4个试验组分别通过胸大肌注射50、150、300、500 μg/kg体重的胸腺五肽，1次/d，连续注射5 d。试验分别于用药5 d（19日龄）及停药5 d（24日龄）测定各组肉鸡的胸腺、脾脏和法氏囊的干湿比。结果表明：在19日龄，各处理组间肉鸡脾脏及法氏囊干湿比无显著差异，但50、150 μg/kg 组肉鸡胸腺g干湿比显著高于300、500 μg/kg组及对照组（P<0.05）。在24日龄，各处理组间肉鸡脾脏及法氏囊干湿比仍无显著差异，而50、150 μg/kg 组肉鸡胸腺干湿比依旧显著高于300、500 μg/kg组及对照组（P<0.05）。高剂量胸腺五肽（500 μg/kg）并未对肉鸡胸腺、法氏囊、脾脏、肝脏及肾脏造成损伤。综上所述，注射低剂量（50、150 μg/kg）胸腺五肽可促进肉鸡胸腺发育，增强机体免疫，且对脾脏和法氏囊无不良影响。

关键词：胸腺五肽；AA肉鸡；免疫器官发育

中图分类号：S831 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2023）08-0009-06

胸腺肽是由胸腺组织分泌的具有生理活性的一组多肽，可通过诱导淋巴细胞的分化、增殖促进T细胞的成熟，提高巨噬细胞的抗原呈递及吞噬功能，增强细胞免疫，从而提高机体抵抗病原的能力[1]。1949年，胸腺肽粗提液首次被制备出来，此后国内外学者们一直致力于胸腺肽的研究，并在提取、分离、纯化及功能探究等方面均取得极大进展[2]。当前在临床上，胸腺肽已广泛应用于辅助治疗各种肿瘤性疾病[3]。此外，胸腺肽无明显的种属特异性，对多种动物也均有增强免疫的功能。

近年来，随着人们对动物疾病预防、治疗的重视程度不断提高，胸腺肽在兽医临床上逐步被研究、应用及推广，为病毒性疾病的治疗带来新的希望[4]。有研究表明，胸腺肽可以用于治疗患有新城疫及传染性喉气管炎双重强毒感染的小鸡；而且饲粮中添加或肌注胸腺肽，能促进肉鸡抗体生成，提高免疫功能和生长性能[5-6]。然而，目前胸腺五肽在肉鸡上的应用研究多集中在对饲料转化率、生化指标及血常规等影响方面，而关于胸腺五肽对肉鸡胸腺、脾脏等免疫器官发育的影响还没有相关研究报道。胸腺及脾脏是禽类最重要的免疫器官，其发育状态及机能直接决定禽类机体的免疫水平。免疫器官指数可在一定程度上反映药物对器官的影响，是毒性的重要指标。免疫器官指数增加则说明器官可能有充血、水肿、肥大等变化，免疫器官指数下降表明器官可能有萎缩、退行性变化等。因此，本试验旨在探究胸腺五肽对肉鸡免疫器官干湿重比及其组织形态学的影响，为胸腺五肽在兽医临床上的应用提供一定的理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料和动物

本试验中注射用胸腺五肽（50 mg/瓶）购自河北征宇制药有限公司（石家庄）。试验动物购自正大公司的1日龄健康AA肉仔鸡。

1.2 试验设计

选用125只1日龄健康AA肉鸡，正常饲养14日后随机分为5个处理（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V组），每个处理25只。I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别通过胸大肌注射50、150、300、500 μg/kg体重的胸腺五肽，而V组（阴性对照组）注射等体积的生理盐水。每日注射1次，连续注射5 d。

1.3 饲养管理

试验鸡采用高床平养，鸡舍内通风良好，温度、湿度等按饲养规程控制，并按常规程序进行卫生清理与消毒。所有鸡饲喂相同的饲料，饲料按NRC（1998）肉鸡营养需要标准配制，不添加任何药物添加剂。试验期间所有鸡自由采食和饮水。第7天，鸡群进行首免鸡新城疫-传染性支气管炎二联苗免疫。第14天，鸡群进行传染性法氏囊疫苗免疫。每日观察并记录鸡群的临床表现（包括注射部位红肿、痛、坏死等）。

1.4 测定指标

1.4.1 免疫器官干湿比测定 于用药5 d（19日龄）及停药5 d（24日龄），分别从各组AA肉鸡随机选取5只解剖，收集胸腺、脾脏、法氏囊并称重，随后将其置于100℃干燥箱干燥再称其干重，计算干湿比。

1.4.2 组织病理学检查 试验结束后选择阴性对照组和Ⅳ组的鸡只，采集肝脏、肾脏、脾、胸腺、法氏囊等组织，10%中性福尔马林固定24 h后，进行石蜡包埋、切片、HE染色、镜检，进行组织病理学检查。

1.5 统计分析

采用EXCEL对试验数据进行初步整理，用SPSS 22.0软件中ANOVA程序进行单因素方差分析，差异显著时采用Duncan氏方法进行多重比较，结果以平均数±标准差（Mean±SD）表示，以P<0.05为差异显著。

2 试验结果

2.1 胸腺五肽对肉鸡免疫器官干湿比的影响

表1为胸腺五肽对肉雞免疫器官干湿比的影响。由表1可知，在19日龄（即注射胸腺五肽5 d后），各处理组间肉鸡脾脏及法氏囊干湿比无显著差异（P>0.05）。但是，Ⅰ组和Ⅱ组胸腺干湿比显著高于Ⅲ、Ⅳ及V组（P<0.05），而Ⅲ、Ⅳ组和对照组之间差异不显著（P>0.05）。结果说明注射低剂量胸腺五肽（50、150 μg/kg）可能促进胸腺发育，显著提高肉鸡胸腺干湿比，但对脾脏、法氏囊无显著影响；而使用高剂量胸腺五肽（300、500 μg/kg）对肉鸡胸腺、脾脏、法氏囊干湿比无显著影响。

在24日龄（即停止注射胸腺五肽5 d后），观察到的结果同19日龄相似。各处理组间肉鸡脾脏及法氏囊干湿比仍无显著差异（P>0.05）。Ⅰ、Ⅱ组肉鸡胸腺干湿比仍显著高于Ⅲ、Ⅳ及V组（P<0.05），而Ⅲ、Ⅳ组胸腺干湿比和V组间依旧差异不显著（P>0.05）。结果表明，停药5日后低剂量胸腺五肽（50、150 μg/kg）对肉鸡胸腺的发育仍具有一定的促进效果。

2.2 胸腺五肽對肉鸡组织器官组织形态学的影响

在19 d（即注射胸腺五肽5 d后）和24 d（即停止注射胸腺五肽5 d后），Ⅳ组（500 μg/kg胸腺五肽注射组）肉鸡胸腺、法氏囊、脾脏、肝脏各器官均未观察到明显的病理组织学变化。胸腺细胞无明显变化，染色均质，内有大量淋巴细胞正在分化（图1）。法氏囊细胞均一、干净，颗粒感明显，有大量正在分化的B淋巴细胞和巨噬细胞（图2）。脾脏组织有少量的充血、出血，部分细胞核碎裂，可能与剖杀鸡只过程中的操作不当有关（图3）。肝脏核大而圆、居中，胞浆染色质丰富，胞质嗜酸性，少量炎细胞浸润（图4）。肾脏细胞结构完整，细胞核清晰可见，胞质、胞浆对比鲜明，有小部分的细胞脱落、肿胀，细胞分布不均一（图5）。

3 讨论

近年来，随着养禽业向规模化、集约化不断发展，禽病也越来越多样化，如何提高家禽的免疫功能、减少病毒性疾病及其他免疫抑制性疾病的发生，是当前兽医工作者们热切关心的问题，各种免疫调节剂在临床上的使用是大势所趋。因此，研究免疫调节剂在雏鸡胸腺、法氏囊、脾脏等免疫器官的影响意义重大。

3.1 胸腺五肽对AA肉鸡免疫器官干湿比的影响

在实际生产过程中，肉鸡抗应激能力较差，受刺激后极易发生脂质过氧化，产生过量的自由基，进而造成氧化应激，影响免疫系统功能，造成鸡群抵抗力下降。王志强等[5]研究表明200 μg/kg胸腺五肽能拮抗环磷酰胺对T淋巴细胞增殖的抑制作用，促进免疫雏鸡胸腺的生长发育，促进外周T淋巴细胞的增殖和脾淋巴细胞分泌IL-2，显著提高免疫抑制雏鸡血清中的新城疫抗体效价。邓梦玲[7]研究表明注射高剂量的胸腺五肽可能增强AA肉鸡的免疫力，对其他各项血常规指标没有明显的不良影响。本试验中，注射50、150 μg/kg胸腺五肽能促进肉鸡胸腺的发育，对脾脏、法氏囊等免疫器官的增重无显著影响；注射500 μg/kg胸腺五肽对正常肉鸡免疫器官及肝肾组织无明显的病理损害作用。本试验中仅观察到胸腺五肽对胸腺发育的积极作用，可能与其靶向性有关，胸腺五肽主要作用于胸腺，诱导和促进T淋巴细胞的成熟，因此对法氏囊、脾脏等免疫器官发育影响和调节作用有限。

3.2 胸腺五肽对AA肉鸡免疫器官功能的影响

胸腺是重要的淋巴器官，是T细胞发育分化和成熟的场所，可以分泌多种激素，有增强细胞免疫功能、调节免疫平衡、抗感染等作用[8]。免疫器官的发育状态和机能强弱，是对禽类免疫水平判定的一项重要指标[9]，家禽的淋巴器官包括胸腺、法氏囊、淋巴结和脾脏等，淋巴器官的发育和机体免疫力均离不开T淋巴细胞的参与，胸腺作为最重要的细胞免疫中枢器官，为外周淋巴器官正常发育和机体免疫所必需。研究发现胸腺五肽能刺激特异性淋巴细胞的活性[10]，能替代胸腺的功能，诱导前体淋巴细胞转变为具有免疫功能的T细胞。同时老龄动物的胸腺萎缩及功能退化，胸腺五肽可以提高胸腺的抗氧化酶活力，降低氧自由基和脂质过氧化物的生成，从而提高动物机体抗氧化能力，延缓部分老年性疾病的出现，故其在抗衰老方面有着极其广阔的前景[11]。

目前已有胸腺肽制剂在兽医临床的应用报道，有研究表明，胸腺五肽注射浓度分别为0.2、0.4、0.8 mg/kg时，对正常大鼠的脾脏、胸腺进行病理组织学观察无明显影响，说明其没有免疫毒性[12]。而本试验中注射高剂量（500 μg/kg）胸腺五肽对正常肉鸡免疫器官及肝肾组织无明显的病理损害作用，与上述结果相一致。

4  小结

在本试验条件下，注射剂量为50、150 μg/kg时，胸腺五肽可促进肉鸡胸腺发育，增强机体免疫，且对脾脏和法氏囊无不良影响，有作为免疫增强剂的潜力。

参考文献：

[1]  李洁，王晓杰，邹素兰.胸腺肽的临床应用与研究进展[J].中国药房，2008，19（14）：1108-1109.

[2]  Chandratilleke D，Marsh J A.The effect of thymulin on avian IL-2 receptor expression[J]. International journal of immunopharmacology， 2000， 22（11）：887-896.

[3]  麻铭川.胸腺五肽类药物在化疗期间对老年恶性肿瘤患者免疫功能的影响[J]. 中国医学工程， 2019（6）：57-58.

[4]  杨玲媛，谢青梅，毕英佐.胸腺五肽研究进展[J].动物医学进展，2008，29（10）：57-60.

[5]  王志强，张斌，陆宏，等.人工合成胸腺五肽对雏鸡免疫功能的影响[J].中国兽医科学，2009， 39（6）：555-560.

[6]  张春莉，刘照惠，王妍，等.胸腺五肽固相合成及免疫增强作用的研究[J].中国生物制品学杂志，2003，16（2）：87-89.

[7]  邓梦玲.胸腺肽对AA肉鸡血液常规指标的影响[J].畜禽业，2019（12）：1-3+5.

[8]  黄凌凌，谢婷，梁宁生.胸腺五肽对大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响研究[J].内科，2016， 11（3）：347-349+3.

[9]  程相朝，张春杰，李银聚，等.中药免疫增强剂对肉仔鸡免疫器官生长发育及免疫活性细胞影响的研究[J].中兽医学杂志，2002（3）：6-8.

[10]刘红，孙长岗，杜峰.胸腺五肽对肿瘤恶病质小鼠免疫调节作用的实验研究[J]. 潍坊医学院学报， 2013，35（2）：91-93.

[11]左朋飞，韩香，刘璐．胸腺五肽的合成及临床应用进展[J].天津药学，2008，20（1）：53-57．

[12] 李久立.胸腺五肽的固相合成及免疫學初步研究[D].上海：上海交通大学，2008.

Effects of Thymopentin on Immune Organs Development

in Arbor Acres Broilers

XU Hui1， ZHANG Le2， LIU Xiaowan1， ZHANG Jingjing1， WANG Han1

（1.Sichuan Water Conservancy Vocational College， Sichuan  611200， China;

2.Qilu Animal Health Products Co.， Ltd.， Jinan  250100， China）

Abstract： This experiment was conducted to study the effects of thymopentin on immune organ development of AA broilers. A total of 125 14-day-old healthy AA broilers were randomly divided into 5 groups according to body weight and sex， with 25 broilers per group. At age of 14 days， the control group was injected with normal saline， and the 4 experimental groups were injected with 50， 150， 300， 500 μg/kg body weight thymopentin once a day in the pectoral major muscle， respectively， for consecutive 5 days. The organ indices of thymus， spleen and bursa of fabricius were determined at age of 19 days and 24 days. The results showed that there was no significant difference in spleen and bursa of fabricius index among treatments at age of 19 days. But 50 μg/kg and 150 μg/kg thymopentin significantly increased the thymus index compared with other treatments （P<0.05）. At age of 24 days， there was also no significant difference in spleen and bursa index among treatments. The thymus index of broilers in treatments of 50 μg/kg and 150 μg/kg thymopentin was still significantly higher than those in other treatments. Besides， high dose of thymopentin （500 μg/kg） did not damage thymus， bursa of fabricius， spleen， liver and kidney of broilers. In conclusion， low dose （50，150 μg/kg） of thymopentin can promote the development of thymus， enhance the immune function， and has no adverse effect on spleen and bursa of fabricius.

Keywords： Thymopentin; Arbor Acres broilers; Immune organ development