湖北地区4 819例HPV感染亚型分布及差异分析

白 桦,申复进,姜树朋,郑红云△

武汉大学人民医院:1.检验科;2.妇产科,湖北武汉430060

人乳头瘤病毒(HPV)是一种嗜人体皮肤和黏膜组织细胞的DNA病毒,可广泛感染人类皮肤及生殖道 、呼吸道上皮组织,与多种良恶性肿瘤密切相关。其感染广泛存在于不同性别和年龄的人群中。目前已经从临床活检中检测出了大约130种HPV类型[1]。HPV是导致女性罹患宫颈上皮增生和宫颈癌的危险因素之一。HPV不仅是子宫颈的致癌物,而且一部分外阴癌、阴道癌等都可归因于高危HPV感染。男性中与HPV感染有关的疾病有尖锐湿疣、尿道感染等,甚至有研究表明 HPV感染可能降低男性精液质量,是引起男性不育的危险因素之一[2-3]。不同型别的HPV致病能力差异较大,根据不同基因型与癌发生危险性的高低可分为高危型HPV和低危型HPV,低危型HPV与外生殖器、肛周皮肤尖锐湿疣和低度宫颈上皮内瘤等良性病变有关;高危型HPV与皮肤和黏膜恶性肿瘤相关,如宫颈癌、外阴癌、阴道癌、肛门癌和阴茎癌及头颈部癌等[4]。HPV疫苗的预防性接种显著降低了宫颈癌的发生率。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2022年2-12月在武汉大学人民医院就诊并进行脱落细胞标本HPV 27种基因分型检测的患者共4 819例患者,其中男性277例,女性4 542例,男性年龄18～86岁,女性年龄16～85岁。采用流式荧光杂交分型检测方法对其进行17种高危型HPV和10种低危型HPV检测。

1.2仪器与试剂 Eppendorf基因扩增仪;美国Luminex200多功能流式点阵仪,上海透景生命科技有限公司高危型人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒(流式荧光杂交法),可检测27种亚型(高危型HPV16、26、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82,低危型HPV6、11、40、42、43、44、55、61、81、83)。

1.3方法 (1)标本采集:妇科医师采用专用采样拭子在女性患者的宫颈处反复刷取并采集脱落细胞;经培训的同一名男科医师采用专用采样拭子在男性患者的阴茎冠状沟或疣体部位反复刷取,并采集脱落细胞。(2)标本处理:在标本处理室,参照核酸提取试剂说明书进行宫颈脱落细胞标本的核酸释放。(3)PCR试剂配制和PCR扩增:按试剂盒进行PCR反应体系的配制,然后向所设定的n个PCR反应管中分别加入处理过的标本5 μL,开始进行PCR扩增。(4)杂交检测:微球杂交混合PCR扩增产物后加入链霉亲和素和藻红蛋白,48 ℃孵育15 min。(5)结果判读:Luminex200多功能流式点阵仪读取微球编码及其对应荧光强弱信号,经配套计算软件判读检测结果。

1.4统计学处理 采用 SPSS26.0软件进行数据分析。计数资料采用例数和百分比表示,HPV各型别感染率的组间差异采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1不同性别 HPV感染情况及各HPV亚型感染情况 男性HPV感染率最高的5种HPV类型分别为HPV6(35.38%)、HPV11(15.52%)、HPV52(14.08%)、HPV16(11.91%)、HPV59(7.94%);女性HPV感染率最高的5种HPV类型分别为HPV52(20.50%)、HPV58(12.55%)、HPV16(12.48%)、HPV53(11.65%)、HPV81(8.65%),有2种高感染率HPV亚型(HPV16、52)与男性重合。男性HPV感染率最高的5种HPV亚型中,有3种高危分型(HPV16、52、59),2种低危分型(HPV6、11);女性HPV感染率最高的5种HPV亚型中,有4种高危分型(16、52、53、58),1种低危分型(HPV81)。见表1。

表1 HPV分型结果及感染率[n(%)]

男性患者HPV6、11、42、52、53、58、61、68感染率与女性患者比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中HPV6、11感染率高于女性患者(P<0.05),均为低危型HPV亚型;而 HPV42、52、53、58、61、68感染率低于女性患者 (P<0.05),其中HPV52、53、58、68为高危型HPV亚型,42、61为低危型HPV亚型。见表1。

2.2不同性别HPV单重多重感染情况比较 男性单纯低危型HPV感染率、多重风险混合型HPV感染率明显高于女性,而单重单纯高危型HPV感染率、总单纯高危型HPV感染率明显低于女性,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 男性与女性HPV单重多重感染情况比较[n(%)]

2.3不同年龄段患者 HPV单重多重感染情况比较 所有年龄段患者的总单纯高危型HPV感染率高于单纯低危型HPV感染率和多重风险混合型HPV感染率。30～<40岁HPV感染率(24.32%)最高,其次是40～<50岁(22.41%),50～<60岁(22.25%),其他年龄段HPV感染率均低于20%。40～<50岁单纯低危型HPV感染率最高。见表3。单纯高危型HPV感染和多重风险混合型HPV感染以中年人感染居多。

表3 不同年龄段患者HPV单重多重感染情况比较

3 讨 论

宫颈癌是第四大最常诊断的癌症,也是女性癌症死亡的第四大原因,2020年全球估计有60.4万例新病例和34.2万例死亡[5]。宫颈癌治疗方法主要有手术治疗和放疗[6],会对患者的正常生活带来极大负担。HPV感染是子宫颈癌发生的主要原因之一。HPV感染非常常见,且大多数感染通常是短暂的、无症状的和自限性的,但少数高危型HPV感染在没有及时筛查和干预的情况下会持续存在,并有进展为2/3级宫颈上皮内肿瘤并最终发展为宫颈浸润性癌的风险[7]。高危HPV感染宿主细胞后,促进E6 和E7基因转录,产物通过结合和灭活肿瘤抑制蛋白、细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶来解除其对宿主细胞生长周期的调节从而导致宫颈癌的发生。除了病毒转染细胞特性外,最新研究提示HPV感染的细胞积极地指导局部环境并创造一个支持性感染后微环境,这被认为是病毒持久性、传播和恶性进展的关键因素[8]。HPV感染后微环境是通过病毒感染细胞、免疫细胞和宿主基质及其衍生成分(包括趋化因子、细胞因子、细胞外囊泡和代谢物)之间的复杂相互作用启动和建立的。

国际癌症研究机构通过对全球数据分析得出结论[9],12种HPV类型(HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58和HPV59)是宫颈癌的1A类致癌物,可覆盖全球96.5%的宫颈癌病例。8种HPV亚型HPV26、53、 66、 67、68、70、73和82,在某些罕见的宫颈癌病例中被鉴定为单一 HPV 感染,但其宫颈癌中的低患病率(每种≤1%)及在肿瘤组织中缺乏生物活性的证据,被归类为可能高危HPV类型,并被认定为2A/2B类致癌物[10]。目前预防性HPV疫苗的设计和生产主要是为了预防最常见的高危型HPV(16和18)感染,这两种HPV导致约70%的宫颈癌病例。四价疫苗可预防HPV 6型、11型、16型和18型的初步感染。美国食品药品监督管理局于2014年批准了一种新的九价HPV疫苗,除了四价疫苗中发现的4种HPV亚型(6、11、16、18)外,它还包括5种额外的致癌HPV亚型(31、33、45、52、58),这些亚型可额外导致15%的宫颈癌[11]。在开发和改进预防性 HPV 疫苗取得了很大进展,但是治疗性HPV疫苗仍有待进一步开发[12]。

本研究结果发现,男性更易感染低危型HPV而女性更易感染高危型HPV。男性患者HPV6、11型感染率高于女性患者,男性单纯低危型HPV感染率、多重风险混合型HPV感染率明显高于女性。男性HPV感染集中于低危型HPV6、11亚型,女性HPV感染集中于高危型HPV16、52、53、58。有研究报道,HPV6、11与尖锐湿疣等疾病密切相关,且男性更易患尖锐湿疣[13];在患宫颈癌及相关妇科疾病的患者中,女性病例高危型HPV检出也非常普遍[14],这些分析结论提示了,在HPV筛查与防治中,可依据不同性别和疾病对不同类型HPV有所侧重,以期在成本及条件有限的情况下更具有针对性检测HPV,对临床诊断和治疗提供更有效的帮助。

男性HPV感染也是一个重要的问题,由于HPV主要传播途径为直接性接触传播,男性在自身承担疾病负担的同时,还有传播给女性的风险[15]。来自各方面的流行病学资料显示直接或间接的证据表明男性HPV感染对女性宫颈癌的发生起重要作用。研究发现女性 HPV感染者的男性伴侣有较高的 HPV感染率,且男女双方感染 HPV的型别高度一致[16]。本研究发现女性感染率最高的5种HPV亚型中,有2种高危HPV亚型(HPV16、52)与男性前5名高感染率亚型重合,符合客观传播规律。

不同地区不同年龄段男性和女性的高危HPV感染及常见亚型不尽相同,有研究发现,中国大陆女性的主要高危HPV亚型为HPV16、52、58、53和18,中国北方女性高危HPV感染前3个亚型分别为16、58、52;西北地区女性前3个亚型分别为HPV16、58、53[17],与本研究结果存在差异。有研究报道,在女性高危HPV感染中,最常见的高危HPV基因型前3名为HPV 52、16、58[18],与本研究结果具有相似性。在男性HPV感染者中,本研究检测的最常见3种高危HPV亚型为HPV52、16、59,与文献[19]报道的男性中高危HPV感染率前3名为HPV16、51、52有一定差异。

综上所述,本研究探讨2022年湖北地区4 819例HPV感染亚型分布及差异分析。由于中国人口基数大且未接种疫苗的人口较多,男性人群HPV感染所致疾病未受到足够重视,不同年龄地区间HPV感染具有一定差异性,因此对HPV感染和亚型分布进行大标本量流行病学研究可为今后临床对HPV的预防监控及治疗提供科学依据。然而,仍有许多工作要做,例如预防性九价HPV疫苗的进一步推广和在男性群体中的宣传普及,治疗性 HPV 疫苗的开发等[20]。相信在科研人员和医护人员的不懈努力下,可以为HPV相关疾病的诊断预防治疗提供更多的解决方案。