血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测研究*

杜 丽,程 佳△,欧阳龙,万凤超

1.宜宾市第二人民医院妇产科,四川宜宾 644000;2.宜宾市中医院检验科,四川宜宾 644000

妊娠合并甲状腺功能减退(简称甲减)是妇产科常见疾病,其发病机制主要是母体甲状腺素合成和分泌减少,从而造成机体的代谢功能衰退[1]。妊娠合并甲减易诱发流产、胎儿生长受限、胎盘剥离、胎儿心肌损害等并发症,严重影响妊娠结局[2]。伴随生活方式的改变,妊娠合并甲减的发病率呈上升趋势,不利于孕妇及胎儿健康。目前,临床多采用药物治疗妊娠合并甲减,可调节孕妇甲状腺激素水平[3],改善妊娠结局,但经药物治疗后仍有部分妊娠合并甲减患者存在子代心肌损害的情况,因此,及时有效地预测妊娠合并甲减子代心肌损害情况以制订有效治疗方案至关重要。近年来,微小核糖核酸(miRNA)逐渐受到临床研究关注,有研究报道,miRNA可通过调控靶基因表达水平进而参与心血管疾病的发生、发展过程[4]。hsa-miR-34a-3p和hsa-miR-206是miRNA家族的重要成员,相关研究表明,二者水平变化异常与心率失常及冠状动脉病变关系密切[5-6]。但目前关于hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206与妊娠合并甲减患者子代心肌损害的关系报道较少,故本研究通过分析血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206在妊娠合并甲减患者血清中的表达水平,探讨二者对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测价值,以为临床病情评估及干预提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年8月至2021年8月宜宾市第二人民医院收治的妊娠合并甲减患者248例作为观察组,另选取同期健康体检孕妇236例为对照组。观察组年龄为22～41岁,平均(31.08±2.21)岁;孕周27～36周,平均(31.42±2.36)周;孕产史:初产妇152例,经产妇96例。对照组年龄为23～39岁,平均(30.35±2.47)岁;孕周28～35周,平均(31.15±2.24)周;孕产史:初产妇138例,经产妇98例。两组年龄、孕周、孕产史比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。纳入标准:(1)观察组均符合妊娠期合并甲减临床诊断标准[7],均遵医嘱用药;(2)孕妇年龄均>18岁;(3)所有研究对象均为单胎妊娠。排除标准:(1)合并妊娠期糖尿病、妊娠期高血压等妊娠期合并症;(2)基因遗传病孕妇;(3)既往有甲状腺相关病史;(4)宫内感染;(5)精神疾病孕妇;(6)近1个月内服用过免疫抑制剂、糖皮质激素。本研究已通过医院伦理委员会审批(批号:201906-002),受试者或家属均知晓情况并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平检测 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平,分别采集对照组体检当天及观察组入院时静脉血5 mL,分别保存于抗凝试管中,常温静置血液30 min后采取离心处理,于10 min后分离上清液,-80 ℃保存以待使用。使用miRNA提取试剂盒(北京百奥莱博科技有限公司)提取血清中miRNA,用cDNA合成试剂盒(北京天根生化科技公司)进行反转录。采用实时荧光定量PCR法对hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206表达量进行检测,条件为95 ℃反应5 min、95 ℃反应30 s、58 ℃反应30 s、72 ℃反应30 s,共循环40次;以U6为内参,采用2-ΔΔCt法计算每个miRNA的相对表达量,为保证数据准确,每个样本重复3次。引物序列见表1。

表1 hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206引物序列

1.2.2治疗方法 妊娠合并甲减患者入院后采用左甲状腺素钠片治疗,并根据患者甲状腺激素功能情况调节用药剂量。

1.3随访情况 两组均随访至妊娠结束,观察两组子代心肌损害发生情况。其中心肌损害判定标准参照文献[8]:超声心动图检查显示新生儿左心室舒末端内径或者左心房内径大于同龄新生儿,或者新生儿右心室内径或右心房内径大于同龄新生儿,或新生儿右心室心肌收缩峰速度、右心室舒张期峰值速度降低,或者收缩期峰值应变、收缩期峰值应变率降低;心电图检查可发现Q-T间期延长,或ST段水平压低,或异常Q波,或T波倒置,或窦性心动过缓/过速,或频发室早,或QT离散度增大,或房室传导阻滞等;血清心肌酶谱检查可发现磷酸肌酸激酶、磷酸肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶、α-羟丁酸脱氢酶水平较正常同龄新生儿明显升高;或伴随气促气急、呼吸困难、心律不齐(心跳加快、心跳节律紊乱)等临床表现。根据观察组子代心肌损害发生情况将观察组患者进一步分为发生组52例和未发生组196例。

1.4观察指标 (1)观察组与对照组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平比较。(2)观察组与对照组子代心肌损害发生情况。(4)发生组、未发生组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平比较。(5)分析妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素:比值比(OR)、95%可信区间(95%CI)。(6)血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206单独及联合检测对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测价值:最佳截断点(cut-off值)、灵敏度、特异度、曲线下面积(AUC)、95%CI,其中联合预测阳性以任一指标预测阳性为准。

2 结 果

2.1对照组和观察组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206表达水平比较 观察组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 对照组和观察组血清hsa-miR-34a-3p、hsa- miR-206表达水平比较

2.2观察组与对照组子代心肌损害发生情况 随访至妊娠结束,对照组子代心肌损害的发生率为1.69%(4/236),观察组子代心肌损害的发生率为20.97%(52/248)。

2.3发生组、未发生组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平比较 发生组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 发生组和未发生组血清hsa-miR-34a-3p、 hsa-miR-206表达水平比较

2.4妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素 发生组与未发生组年龄、孕周、孕产史及甲状腺家族史占比比较无统计学意义(P>0.05),发生组促甲状腺激素(TSH)高于未发生组(P<0.05),游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)低于未发生组(P<0.05)。见表4。收集影响妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素,如年龄、孕周、孕产史、甲状腺家族史、TSH、FT3、FT4、TT3、TT4、血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平将其作为自变量,另将子代心肌损害发生情况作为因变量,对变量进行赋值,见表5。经Logistic回归分析可知hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206、FT3、FT4、TSH、TT3、TT4是妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素(P<0.05),见表6。

表4 发生组和未发生组一般资料比较或n(%)]

表5 变量赋值

表6 多因素Logistic回归分析

2.5血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平单独及联合检测对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测价值 血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平联合预测妊娠合并甲减患者子代心肌损害的灵敏度均高于单独预测(χ2=7.386,P=0.007;χ2=5.283,P=0.022),AUC也高于单独预测(Z=2.420,P=0.015;Z=2.332,P=0.019),特异度与单独预测比较差异无统计学意义(χ2=2.024,P=0.155;χ2=0.690,P=0.406)。见图1、表7。

图1 血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206单独及联合预测妊娠合并甲减患者子代心肌损害的ROC曲线

表7 血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206单独及联合检测对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测价值

3 讨 论

妊娠合并甲减是妊娠期一种常见并发症,且发病率较高,约占妊娠期合并症的5.6%[9],严重威胁孕妇及胎儿健康。临床多采用左甲状腺素钠片等药物治疗妊娠合并甲减,其可有效调节患者甲状腺激素功能,但仍有部分患者在接受治疗后出现子代心肌损害的情况。本研究结果显示,观察组子代心肌损害的发生率为20.97%,发病率较高,可能与所纳入的妊娠合并甲减患者病情严重程度、个体特性及对药物的耐受性等有关。因此早期预测妊娠合并加减患者子代心肌损害的发生情况以制订有效干预措施意义重大,但目前尚缺乏早期预测妊娠合并加减子代心肌损害的有效指标。

本研究结果显示,观察组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于对照组,提示妊娠合并甲减患者体内hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平异常表达。hsa-miR-34a-3p与动脉粥样硬化具有相关性,其水平高表达可加重冠状动脉粥样硬化程度,这与hsa-miR-34a作用机制相同[10]。妊娠期合并甲减可使机体内脂代谢紊乱,进而使内皮细胞功能损伤,并通过氧化应激反应加重冠状动脉粥样硬化[11],进而使hsa-miR-34a水平升高。有研究发现,hsa-miR-206在患有甲减的小鼠中的表达高于甲状腺功能正常的小鼠[12]。相关研究指出,桥本氏甲状腺炎患者血清hsa-miR-206显著高于健康对照人群,证实hsa-miR-206可能与甲状腺功能的调节作用密切相关,且hsa-miR-206参与了甲状腺功能减退的发生过程[13]。另有研究显示,甲状腺功能亢进患者miR-206水平降低[14],本研究中妊娠合并甲减患者miR-206水平降低,与其研究结果具有相似性。

近年来研究发现,miRNA参与多种疾病的发病进程,与心肌损害密切相关,异常表达的miRNA可预测心肌损害发生情况[15-16]。另有研究指出,hsa-miR-34a-5p在心肌纤维化的大鼠中表达上调,进一步提示miRNA与心肌损害具有相关性[17]。本研究结果显示,发生组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于未发生组,经Logistic回归分析可知hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206高表达是妊娠合并甲减患者子代心肌损害的独立危险因素。hsa-miR-34a-3p可通过减少心肌细胞凋亡而减轻心肌损害,抑制hsa-miR-34a-3p表达可减少心肌细胞肥大、凋亡,改善心肌损害。有研究显示,hsa-miR-34a-3p水平升高可增加冠状动脉粥样硬化进程,进而造成心肌细胞损伤[18]。hsa-miR-206是一种肌源性miRNA,心肌肥大以及心肌细胞存活密切相关,在心脏的发育及心血管疾病中可发挥重要作用[19]。DING等[20]研究发现,hsa-miR-206可通过抑制自噬相关基因的表达,进而降低心肌细胞的凋亡,使心肌损害减轻。另有研究证实,炎症性心肌病患者hsa-miR-206异常高表达,本研究结果与其具有一致性[21]。母体血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206可通过胎盘进入胎儿体内,进而对胎儿心肌细胞发育产生影响,导致子代心肌损害。本研究ROC曲线分析显示,血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平联合预测的灵敏度和AUC均高于单独预测,且二者均对妊娠合并甲减患者子代心肌损害具有预测价值。因此,临床应加强监测血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平,从而指导临床工作者及时采取相应干预措施,进而降低妊娠合并甲减患者子代心肌损害发生率。另本研究结果显示,FT3、FT4、TSH、TT3、TT4亦均是妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素,可能是TSH水平越高,FT3、FT4、TT3、TT4越低,妊娠合并甲减患者病情越严重,子代心肌损害的概率越大[22]。

综上所述,妊娠合并加减患者血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平呈现高表达,此两项血清指标对妊娠合并加减患者子代心肌损害具有一定的预测价值,对临床防控可能有指导意义。但本研究存在一定的局限性,未能深入研究血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206影响妊娠合并加减患者子代心肌损害的具体作用机制,缺少细胞/分子层面的研究,后续需进一步对此展开探索分析。