联合测定血浆miRNA-19b及红细胞分布宽度在COPD相关肺动脉高压中的临床价值

张青 熊伟 刘明 张诚实 王妮妮 陈荣荣 赵云峰

(1上海市浦东新区浦南医院呼吸与危重症医学科,上海 200125;2上海交通大学医学院附属新华医院呼吸与危重症医学科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是我国常见的一种呼吸道慢性气道炎症疾病,流调数据显示我国40岁以上人群COPD患病率为14.1%〔1〕,按照病程分为COPD急性加重(AECOPD)和稳定期,肺动脉高压(PH)是COPD常见并发症,我国由COPD导致的PH占60%,PH是导致COPD患者死亡的重要原因。目前临床常用的诊断PH的无创方法是多普勒超声心动图,三尖瓣峰值流速>3.4 m/s可诊断为PH〔2〕。

微小RNA(miRNA)是短链非编码RNA,在血清中能够稳定表达。研究发现miRNA参与细胞增殖、凋亡、血管生成等〔3～6〕,在COPD、PH等肺部疾病、血管重塑过程中发挥重要作用。miR-17-92基因簇为一种典型的含有多顺反子启动子的高度保守的基因簇,位于人染色体13q31.3处,包含7个成员:miR-17-3p、miR-17-5p、miR-18a-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20a-5p和miR-92a-3p。研究发现血浆中miRNA-19b参与AECOPD患者PH的形成〔7〕。红细胞分布宽度(RDW)是反映红细胞体积异质性的参数,RDW的正常参考范围为11%～14%〔8〕,受年龄、种族及检测仪器等多因素影响。数值越大,反映外周血红细胞体积变化越大。近年研究表明RDW水平与PH之间密切相关。Petrauskas等〔9〕回顾性研究显示PH患者的RDW水平明显高于对照组,RDW联合B型钠尿肽(BNP)能明显提高BNP预测患者发生PH的准确性。本研究旨在探讨联合测定血浆miRNA-19b及RDW在COPD相关PH患者中的临床价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取上海市浦东新区浦南医院呼吸与危重症医学科病房2020年11月至2021年11月诊治AECOPD患者共156例。纳入标准:符合AECOPD诊治中国专家共识 (2017年更新版)制定的AECOPD标准〔10〕。排除标准:①下肢深静脉血栓慢性血栓、栓塞性肺动脉高压、肺栓塞;②肝功能不全、肾功能不全、肺间质纤维化、糖尿病;③恶性肿瘤;④心功能不全、冠心病等。本研究经浦南医院伦理委员会批准通过,患者均签署知情同意书,伦理批准号:PNYY2020-19。

1.2分组 分为AECOPD组(A组,45例)、AECOPD合并PH组(B组,111例)。A组男31例,女14例,年龄55～80岁,中位年龄69.5岁;B组男71例,女40例,年龄66～79岁,中位年龄72.7岁。两组一般资料差异均无统计学意义(P>0.05)。测定两组入院时血浆miRNA-19b、PASP、RDW,绘制血浆miRNA-19b和RDW诊断 COPD 相关PH及二者联合的受试者工作特征(ROC)曲线;应用 Logistic回归分析预测概率,并计算诊断价值。

1.3超声心动图测定肺动脉收缩压(PASP) 应用Philip IE33超声诊断检测仪在彩色多普勒引导下测定PASP〔11〕。

1.4血浆miRNA-19b、RDW测定 于入院次日早晨抽取空腹静脉血10 ml,取6 ml静置后送至检验科生化室检测;取4 ml室温静置30 min后,4 ℃下3 000 r/min离心10 min,提取血浆,移入 Eppendorf 管,置于-80 ℃冰箱保存待测。血浆miRNA-19b测定采用定量反转录聚合酶链反应法(qRT-PCR)。按 Trizol 试剂盒说明书步骤提取细胞总 RNA 并测定其浓度,结果以2-ΔΔCt法表示〔12〕。血RDW测定:采用迈瑞BC3000CT全自动血细胞分析仪测定血RDW。

1.5统计学分析 采用SPSS19.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1两组PASP、血浆miRNA-19b、RDW比较 与A组比较,B组PASP、RDW均显著升高、血浆miRNA-19b显著下降(P<0.05)。见表1。

表1 两组PASP、血浆miRNA-19b、RDW比较

2.2血浆miRNA-19b、RDW及二者联合诊断COPD相关PH的ROC曲线比较 血浆miRNA-19b、RDW联合诊断COPD相关PH的AUC(0.890)、敏感度(98.20%)、特异度(80.00%)均高于血浆miRNA-19b、RDW单独诊断COPD相关PH的AUC(0.521、0.798)、敏感度(69.37%、64.86%)、特异度(40.00%、84.44%)。见图1。

图1 血浆miRNA-19b、RDW及二者联合诊断COPD相关PH的ROC曲线比较

3 讨 论

PH是以呼吸困难、疲劳、虚弱、心绞痛等非特异性临床症状为主要表现且无法治愈的疾病,65岁以上人群中患病率约为10%,多以晕厥为常发症状,死亡率极高。当合并COPD时,常伴随严重的肺功能损伤,可增加死亡率。miR-17-92簇是控制细胞凋亡和增殖最具特征的miRNA家族之一。miR-17-92基因簇上调可导致细胞凋亡的减少和细胞增殖增加。miRNA-19b是miR-17-92基因簇中的成员,参与PH的形成〔13〕,研究发现〔7〕合并PH的AECOPD患者血浆miRNA-19b水平明显低于不合并PH的AECOPD患者。在AECOPD相关PH老年患者中,随着肺动脉压力逐渐增高,血浆miRNA-19b水平逐渐降低,血浆miRNA-19b水平与PASP呈负相关。

RDW是从标准全血细胞计数获得的生化参数,是循环中红细胞大小变异性的量度,代表红细胞大小的变异系数。当机体动脉血氧分压降低时,可激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统,促使红细胞生成素活性降低,继而影响红细胞的形态,促进RDW异常增加〔14〕。此外,炎性反应时生成的大量氧自由基可以抑制红细胞的成熟,从而导致外周血中幼稚红细胞的数量增加,导致RDW升高〔15〕。

当 COPD患者继发PH时,可造成肺循环阻力增加,从而加重机体的缺氧和二氧化碳潴留,导致骨髓造血功能亢进,同时刺激红细胞生成素生成增多,最终导致继发性红细胞增多,引起 RDW 升高〔16〕。研究发现 RDW 值随肺动脉压力的升高而升高,并且两者呈显著正相关,认为RDW 可作为 COPD继发PH的评估指标之一〔16〕。Yang等〔17〕对213例COPD 患者的研究表明,合并 PH 患者的RDW显著高于不合并 PH 患者。Xi 等〔18〕对 167 例特发性 PH 患者随访20 个月后证实,RDW升高(>13.65%)与特发性PH严重程度和全因死亡率相关。一项无假设的全症状分析研究显示,在1 364 种疾病中,与RDW最相关的临床疾病为 PH〔19〕。

本研究结果与Yang等〔17〕研究结论类似。本研究提示,联合诊断可以提高诊断的敏感度和特异度,而降低误诊率及漏诊率。本研究存在的不足之处是单中心、小样本量研究,需要进行多中心、大样本临床研究。动态监测COPD相关PH患者血浆miRNA-19b水平及RDW变化对判断COPD合并PH患者的预后将会有一定的临床价值。