HPLC 法分析30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂含量

谭正莹，龚会琴，杨鸿波，代前冲

(1.贵州省分析测试研究院，贵阳 550000；2.贵州医科大学 公共卫生学院 环境污染与疾病监控教育部重点实验室，贵阳 550025，3.贵州省检测技术研究应用中心，贵阳 550000)

戊唑醇(tebuconazole)是由德国拜耳公司开发、生产的一种高效、广谱、内吸性三唑类杀菌剂，其可抑制病原菌麦角甾醇的生物合成，从而影响病原菌细胞膜的结构和功能，达到抑制病原菌生长发育的作用。戊唑醇主要通过种子处理或叶面喷洒等施用方式用于防治锈病、根腐病、白粉病和黑穗病等多种病害[1]。肟菌酯(trifloxystrobin)是由诺华公司研制、拜耳公司开发的具有高效、低毒、广谱特性的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，是一种呼吸作用抑制剂[2]。肟菌酯能有效控制真菌病害，对子囊菌、半知菌、担子菌、卵菌等多个纲的真菌有效，可以防治锈病、稻瘟病和白粉病等多种真菌病害[3]。按适当比例将戊唑醇和肟菌酯进行复配使用，不仅可以提高杀菌效果，同时还可降低病害对单一有效成分的抗性风险。

目前有关戊唑醇和肟菌酯单剂或与其他有效成分复配而成的制剂的分析方法报道较多，主要包括液相色谱法[410]和气相色谱法[1113]，但戊唑醇和肟菌酯的复配制剂仅有水分散粒剂剂型的分析方法报道[10,13]，2 者复配的悬浮剂剂型的分析方法研究尚属空白，本文建立了高效液相色法同时测定30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂中有效成分的分析方法，方法具有操作简单、灵敏度高、快速准确等特点。

1 材料与方法

1.1 试剂

甲醇(上海安谱实验科技有限公司，色谱纯)；超纯水(实验室自制，电阻率18.2 MΩ×cm，25 ℃)；戊唑醇标准品(上海市农药研究所有限公司，质量分数为99.6%)；肟菌酯标准品(国家农药质量监督检验中心，质量分数为99.2%)；30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂(浙江中山化工集团股份有限公司，戊唑醇质量分数为20%、肟菌酯质量分数为10%)；0.45 μm 有机滤膜(上海安谱实验科技有限公司)。

1.2 仪器

岛津LC 2030C 3D Plus，具有PDA 检测器(岛津公司)；XSE205DU 型电子天平(梅特勒 托利多公司)；明澈超纯水制备系统(默克公司)；液相色谱柱：ZORBAX SB C18(安捷伦公司，250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.3 液相色谱操作条件

进样体积：5 μL；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；运行时间：15 min；流动相：甲醇+水=80+20(体积比)。在上述色谱条件下，戊唑醇保留时间约为6.3 min，肟菌酯保留时间约为7.7 min。

上述操作条件是典型操作参数，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。戊唑醇和肟菌酯标样色谱图见图1，30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂色谱图见图2。

图1 戊唑醇和肟菌酯标样色谱图

图2 30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标准工作溶液的配制

分别称取0.078 48 g 戊唑醇标样和0.040 64 g 肟菌酯标样于同一50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得到戊唑醇和肟菌酯质量浓度分别为1 563.32、806.30 mg/L 的混合标样母液；分别移取上述母液0.5、1.0、2.5、5.0 mL 置于4 个10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得到系列梯度浓度的标准工作溶液。

1.4.2 试样溶液的配制

称取约含0.02 g 戊唑醇的30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂试样于50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，过膜待测。

1.4.3 测定

在1.3 节仪器操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2 针戊唑醇(肟菌酯)峰面积响应值相对变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4.4 计算

将测得的2 针试样溶液以及试样前后2 针标样溶液中目标物(戊唑醇、肟菌酯)峰面积进行平均，试样中目标物的质量分数X1(%)按下式计算：

式中：A1为标样溶液中目标物峰面积的平均值；A2为试样溶液中目标物峰面积的平均值；m1为标样的质量(g)；m2为试样的质量(g)；ω1为标样的质量分数(%)。

2 结果与讨论

2.1 特异性测定

采用HPLC PDA 进行扫描测定，戊唑醇和肟菌酯的最小峰纯度均大于2 个峰的最小峰纯度阈值，表明2 个峰在此区域具有光谱一致性，峰纯度满足试验需求，色谱峰纯度图见图3。

图3 30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂中戊唑醇和肟菌酯峰纯度图谱

2.2 分析方法的线性相关性

按1.3 节仪器操作条件对1.4.1 节中配制的标准工作溶液进行分析测定。以戊唑醇质量浓度为横坐标，戊唑醇峰面积为纵坐标，得戊唑醇线性方程为y=9 502x+116 725，R2=0.999 2；以肟菌酯质量浓度为横坐标，肟菌酯峰面积为纵坐标，得肟菌酯线性方程为y=43 183x-7 091，R2=0.999 9。表明戊唑醇和肟菌酯在对应的质量浓度范围内具有良好的线性关系。

2.3 分析方法的精密度

从同一悬浮剂产品中准确称取5 个试样，按1.3节仪器操作条件进行分析测定，测得戊唑醇和肟菌酯的变异系数分别为0.48%和0.50%，表明分析方法的精密度良好，见表1。

表1 分析方法的精密度测定

2.4 分析方法的准确度

从已知质量分数的30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂中称取5 个试样，分别加入一定量的戊唑醇和肟菌酯标样，按1.3 节仪器操作条件进行分析测定，测得戊唑醇和肟菌酯的平均回收率分别为100.4%和100.3%，表明分析方法的准确度良好，见表2、3。

表2 戊唑醇准确度测定

表3 肟菌酯准确度测定

3 结 论

本文建立了一种同时检测30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂中有效成分的分析方法。戊唑醇和肟菌酯在测试质量浓度范围内线性关系良好，方法精密度和准确度高，说明该方法具有操作简单、灵敏度高、快速准确等特点，是检测30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂中有效成分含量的理想方法。