动物性食品中地西泮残留检测研究进展

李国烈

(南充农产品质量监测检验中心，四川 南充 637000)

1 概述

地西泮(Diazepam)又叫苯甲二氮卓，属苯二氮卓类镇静催眠药。苯二氮卓类药物具有良好的镇静催眠、抗惊厥、抗焦虑以及促食欲过盛等优点，在20世纪60年代发展起来，并逐渐取代了巴比妥类药物[1，2]。《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》(第193号公告)规定地西泮不准以抗应激、提高饲料报酬、促进动物生长为目的在食品动物饲养过程中使用。《GB 31650-2019 食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》规定允许作治疗用，但不得在动物性食品中检出地西泮。

地西泮具有能够使动物体重增加，提高出肉率，降低动物感知外界的能力，减少应激和在畜禽养殖中提高饲料转化率的作用[3，4]。因此，在生产过程中存在非法使用的情况，近年来我国多地检出动物性食品中地西泮残留。王守英等[5]对上海2018年市售水产品地西泮残留状况及其风险进行了调查分析，在市售水产品中检测出地西泮残留；四川省市场监督管理局于2020年10月9日发布关于26批次食品不合格情况的通告(2020年第42号)，3家水产店的鳙鱼和鲢鱼中检出地西泮；天津市蓟州区市场监督管理局于2020年12月8日发布2020年第7期食品安全监督抽检信息，2家水产店的鲫鱼和鲤鱼中检出地西泮[6]。地西泮不易被动物机体代谢出去，从而蓄积在食品动物体内，当长期摄入含有地西泮及其代谢物残留的食物后，会对人身体健康造成危害[7，8]，动物排泄物进入土壤和水中导致生态环境问题，同时会对人类健康产生间接危害。因此，快速高效的检测方法对动物源性食品中地西泮残留监测具有十分重要的意义。本文拟综述动物性食品中地西泮残留检测研究进展，以期为动物性食品中地西泮的残留检测提供参考。

2 检测方法

目前，动物性食品中地西泮残留检测的分析方法主要包括免疫分析方法、色谱法和色谱质谱联用法等检测方法。

2.1 免疫分析方法

免疫分析方法是利用抗原与抗体特异性结合而建立的高选择性生物化学方法，目前报道应用在动物性食品中地西泮残留检测的方法有酶联免疫吸附法和胶体金免疫层析法。该类方法不需要昂贵仪器设备，操作简单快捷，可对现场大批量样品进行快速检测。但该类方法不能准确定量，只能作为初筛方法。贾涛[9]报道了采用酶联免疫反应测试盒检测猪肝中地西泮的残留量，该方法不需要有机溶剂，并在10～30min完成提取过程，检测过程不到2h；该方法检测下限为0.01μg·kg-1，标准曲线的斜率(r值)达到0.9959，高于规定的0.98，离散系数(CV值)不高于3.9%，阳性添加回收率平均达到97.4%，检测结果准确可靠；另外，其还提出了酶联免疫法测定过程中8个方面的注意事项，对采用酶联免疫吸附法开展检测工作具有很强的指导性。

胶体金免疫层析法是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型检测方法，通过将抗原抗体特异性免疫反应和色谱层析分离技术相结合的方式实现检测目标物的快速检测，因其无需特殊设备，结果直观，操作简便，现已成为食品安全快速检测的常用方法。桑丽雅等[10]报道了采用胶体金免疫层析法快速检测水产品中地西泮残留量；该方法利用免疫磁珠选择性吸附、分离水产品中地西泮残留，操作简便，灵敏度高，特异性强，稳定性好，可在25min内完成单个样本检测；方法检出限为0.5μg·kg-1，在加标浓度为1.0μg·kg-1、5.0μg·kg-1、10.0μg·kg-1和15.0μg·kg-1时，方法的回收率为78.34%～90.40%，相对标准偏差为5.03%～8.96%，在添标检测试验和盲样检测试验中，该方法的检测结果与仪器分析方法(气相色谱-质谱法)的检测结果一致，可用于样品中地西泮残留的现场快速检测。

2.2 色谱法

色谱法是利用混合物中各组分在流动相和固定相两相间的分配系数的不同而获得分离的方法，目前报道应用在动物性食品中地西泮残留检测的方法有气相色谱法和液相色谱法。该类方法具有分离效率高，分析速度快，易于自动化等优势，但存在定性分析易受基质干扰，无法对样品进行准确的定性分析的问题，在检测过程中一般都要采用不同极性的色谱柱或改变流动相极性等方式来辅助定性。

近年来，关于采用气相色谱法和液相色谱法检测动物组织中地西泮残留量的报道较少。张玉洁等[11]报道了采用气相色谱-微电子捕获(GC-μECD)检测法测定猪肉中地西泮残留量；样品经乙腈超声提取，正己烷除脂，C18固相萃取小柱净化，甲醇-水(体积比70+30)洗脱，外标法定量；该方法在1～1000μg·L-1质量浓度范围内线性关系良好(r=0.9994)，检出限和定量限分别为0.31μg·kg-1和1μg·kg-1，对空白猪肉进行1～50μg·kg-1范围的药物添加回收试验，结果平均回收率(83.5%～94.9%)、日内变异系数(2.4%～8.1%)和日间变异系数(3.9%～6.4%)均满足分析试验要求；该报道还对提取溶剂的选择进行了试验，结果表明，相对于乙酸乙酯和乙腈-水(80+20)，乙腈的提取效果最好，且过程稳定易控制。丁宇琦等[12]采用高效液相色谱法、气相色谱-质谱法以及液相色谱-串联质谱法测定了猪肉、鸡肉、鱼肉和牛肉样品中地西泮的残留量；样品的提取溶剂和净化小柱与张玉洁等[11]方法相同，提取溶液未经正己烷除脂，洗脱溶液为甲醇-乙酸溶液(体积比70+30)，外标法定量；该方法质谱仪器的检出限为0.5μg·kg-1，HPLC的检出限为10.0μg·kg-1；在4种组织样品中添加15.0μg·kg-1、30.0μg·kg-1、60.0μg·kg-13个浓度水平下，质谱类仪器检测的回收率范围为84.6%～99.0%，精密度(RSD)均小于10%；在4种组织样品中添加100.0μg·kg-1、300.0μg·kg-1、500.0μg·kg-13个浓度水平下，液相色谱仪器检测的回收率范围为87.0%～97.3%，精密度(RSD)均小于3.5%。

2.3 色谱质谱联用法

色谱质谱联用法利用质谱的定性能力强、灵敏度高等优点克服了色谱法的不足，提高了分析的灵敏度和准确性，具有多组分同时分析和微量分析等优势，在检测工作中被广泛应用。

谭磊等[13]报道了采用UPLC-MS/MS测定猪肉中地西泮残留量，样品在全程严格避光操作的条件下，经乙酸钠溶液和β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解，用碳酸钠-酸氢钠缓冲溶液和乙酸乙酯提取净化，电喷雾离子源负离子模式，多反应监测方式进行检测，内标法定量；该方法的检出限为0.048μg·kg-1，线性范围为1～30ng·mL-1(r=0.999578)；在添加浓度为1.00μg·kg-1、2.00μg·kg-1、4.00μg·kg-13个浓度水平下，方法的变异系数分别为7.82%、4.79%和8.14%，方法的回收率范围为81.00%～96.00%、70.50%～81.50%和77.00%～89.75%。

宿书芳等[14]报道了采用超高效液相色谱串联质谱测定水产品中地西泮残留量，样品经乙腈提取，Prime HLB固相萃取小柱净化，在正离子模式下多反应监测方式检测，基质匹配标准曲线外标法进行定量；该方法在0.1～10ng·mL-1质量浓度范围内线性关系良好(r>0.99)，检出限为0.5μg·kg-1；通过在黄花鱼和虾样品中做添加回收试验，得出该方法在1.5μg·kg-1、3.0μg·kg-1、15.0μg·kg-1添加浓度水平下，回收率范围为88.2%～101.1%，方法的日内和日间精密度均小于10%；该研究还对提取方式、提取溶剂、净化方式、SPE规格和上样溶液的选择、浓缩方式和基质效应等关键因素进行了考察与评价。

何连军等[15]以通过型固相萃取柱Captiva EMR-Lipid(EMR)为净化手段，采用液相色谱-串联质谱法测定水产品中地西泮残留量；该方法通过内标法定量，检出限为0.03μg·kg-1，在2μg·kg-1、4μg·kg-1、10μg·kg-13个添加浓度水平下，草鱼、中华鳖、南美白对虾、大黄鱼和贻贝样品组织的的添加回收范围为90.9%～98.3%，相对标准偏差为0.63%～6.68%。

崔瑞霞等[16]报道了物源性食品中地西泮残留快速筛的方法，样品经乙二胺四乙酸二钠溶液螯合后，加入5mL乙腈涡旋离心，取乙腈层经Cleanert LipoNo净化后，取上清液乙腈层过滤上机，采用UPLC-MS/MS进行测定，基质配制标准曲线，内标法进行定量分析；该方法出检出限为0.05μg·kg-1，定量限为0.15μg·kg-1，在0.1～20ng·mL-1质量浓度范围内线性关系良好(r=0.9997)；在1μg·kg-1添加浓度水平下，分别对牛蛙、鸡蛋、羊肉、鲫鱼等样品进行加标回收和精密度实验，结果表明，回收率在93.1%～98.6%，相对标准偏差在3.4%～6.7%。曾军杰等[17]报道了水产品样品经分散固相萃取技术进行前处理，采用超高效液相色谱-串联质谱测定样品中地西泮残留量。该方法的检出限和定量限分别为0.5μg·kg-1和1.0 μg·kg-1，在0.5～50μg·L-1质量浓度范围内线性关系良好(r=0.997)，添加样品的平均回收率为92.5%～95.4%，相对标准偏差(RSD)为5.2%～7.3%。张璇等[18]报道了采用液相色谱-串联质谱测定水产品中地西泮药物残留量的方法，样品加入NaOH(1mol·L-1)溶液后，采用乙酸乙酯提取，C18和PSA分散固相萃取材料进行净化，基质匹配标准溶液中添加内标的方法进行定量分析；该方法地西泮药物的检出限为0.5μg·kg-1。在1μg·kg-1、5μg·kg-1、10μg·kg-1添加浓度水平下，分别对鳊鱼等14种水产品样品进行地西泮药物的加标回收和精密度试验。结果表明，该方法准确度(加标回收率)和精密度均满足分析要求，对不同种类的水产品适用性较好。

综上所述，采用液相色谱串联质谱法测定动物性食品中地西泮残留量，样品采用液液萃取、固相萃取小柱和QuEChERS分散固相萃取等方式净化，多反应监测电喷雾离子源正离子模式和负离子模式进行检测。样品的前处理方式各不不同，但方法的准确度和精密度良好，检出限高(0.03～0.5μg·kg-1)，能满足实验室残留分析检测要求。

3 小结

在地西泮残留检测过程中，快速高效的前处理方法和定性定量能力好的检测技术起着至关重要的作用。液相色谱串联质谱法因其高灵敏度、准确度和高选择性等优点，被广泛应用于动物性食品中地西泮残留检测。另外，固相萃取小柱净化和QuEChERS分散固相萃取净化方法因其操作简便，快速、高效、稳定性好，在地西泮残留检测的前处理中展现出很好的应用前景。