ERCC1蛋白的表达在胃癌患者病理诊断中的意义研究

闵 文，杨丽英，闵 洁，屠云娇

（云南省红河州第一人民医院病理科，云南 红河 661199）

胃癌是消化系统常见、高发的恶性肿瘤之一，起源于胃黏膜细胞。早期胃癌患者无典型临床表现，随着病情进展可出现腹痛、厌食、呕血、黑便等症状，且患者随着出血量的增加可继发失血性休克，威胁生命安全[1]。统计显示，近年来随着我国居民生活习惯、饮食结构的变化，胃癌的发病率持续升高并趋于年轻化[2]。手术是目前临床治疗胃癌的主要方案，但不同时期开展手术的治疗效果不同，其中早期胃癌患者术后5 年生存率高达90% ～100%，而晚期胃癌缺乏有效的治疗手段，经综合治疗患者的5 年生存率不足30%。因此，临床需采取有效措施及早对胃癌进行诊断，确保患者尽早得到科学治疗[3]。剪切修复交叉互补修复缺陷偶联因子1（excision repair cross-complementation group 1，ERCC1）蛋 白 是 一种高度保守的DNA 核酸内切酶，是核苷酸切除修复（Nucleotide excision repair，NER）过程中的关键部件，但临床对其在胃癌病理诊断中的研究较少。为进一步分析ERCC1 蛋白的表达在胃癌患者病理诊断中的意义，本文特进行如下研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

遵循随机原则，选择2020 年5 月至2022 年5 月在我院确诊为胃癌的50 例患者为观察组，并选择同期的健康体检人群50 例作为对照组。纳入标准：（1）观察组患者的病情经病理学检查确诊为胃腺癌；（2）年龄≥20 岁；（3）精神及心理状态正常；（4）病理及随访资料完整。排除标准：（1）存在认知、精神或语言障碍；（2）观察组患者术前实施放疗或靶向治疗；（3）标本中组织蛋白降解，导致免疫组织化学（免疫组化）染色结果不满意；（4）临床病理及随访资料缺失；（5）观察组患者合并其他恶性肿瘤；（6）观察组患者无法耐受手术治疗；（7）观察组患者的肿瘤发生转移；（8）存在严重的心、肝、肾等器官功能不全。观察组中，男32 例，女18 例，中位年龄57（42，72）岁，中位病灶直径5.0（1，9）cm ；肿瘤分化程度：16 例高分化、20 例中分化、14 例低分化；肿瘤分期：30例Ⅰ～Ⅱ期、20 例Ⅲ～Ⅳ期；病变部位：10 例胃体癌、40 例胃窦癌。对照组中，男33 例，女17 例，中位年龄57.5（41，74）岁。两组的性别、年龄对比差异无统计学意义（P＞0.05），可对比。

1.2 方法

检测方法：（1）取对照组正常胃部组织及观察组病灶组织、癌旁组织（距离病灶边缘＞5 mm），将石蜡切片脱蜡至水，加入浓度为3% 的H2O2，室温下孵育10 min，以消除内源性过氧化物酶的活性。蒸馏水冲洗，PBS 缓冲液浸泡3 min×3 次，将最终获得的切片放置在0.01 mol/L 的枸橼酸盐缓冲液（pH 为6.0）中。高压锅加热至煮沸后，将玻片放入高压锅中，加上加压阀，高压锅达到最大压力（喷气）2 min 后关闭电源，常温下自然冷却处理。取出玻片，采用PBS缓冲液洗涤2 次，每次洗涤时间均控制为5 min。（2）洗涤结束后加入5%BSA 封闭液，甩干后加入一抗（人兔抗人ERCC1 蛋白抗体），置于湿盒中室温孵育2 h。（3）PBS 缓冲液冲洗3 min×3 次。（4）甩干玻片，加入生物素标记二抗工作液，室温孵育30 min，PBS缓冲液冲洗3 min×3 次。（5）DAB 显色3 ～10 min，以苏木素复染后封片，光学显微镜下观察，每份标本测定3 次后取均值。阳性判断方法[4]：参考奥尔雷德评分标准，分别从细胞的阳性数量、染色强度进行免疫组化染色评分，总分16 分，4 ～12 分为阳性，得分越高则阳性表达越强。其中阳性细胞数≤25% 为0分、26% ～50% 为1 分、51% ～75% 为2 分、＞75%为3 分；染色后不着色为0 分，黄色为1 分，棕黄色为2 分，黄褐色为3 分。

1.3 观察指标

比较两组ERCC1 蛋白的阳性率。分析ERCC1 蛋白在不同病理中的表达。分析ERCC1 蛋白与胃癌患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度的相关性。

1.4 统计学方法

研究涉及数据采用SPSS 23.0 软件分析，计数资料以±s或中位数（用四分位数间距）表示，行t或非参数检验，计数资料以% 表示，行χ² 检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。采用Pearson 相关性检验对ERCC1 蛋白与胃癌患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度的相关性进行分析。

2 结果

2.1 两组ERCC1 蛋白阳性率的对比

观察组病灶组织中ERCC1 蛋白的阳性率（70.00%）相较于癌旁组织（4.00%）、对照组（2.00%）均更高（P＜0.05）；观察组癌旁组织中ERCC1 蛋白的阳性率与对照组相比无明显差异（P＞0.05）。详见表1。

表1 两组ERCC1 蛋白阳性率的对比[例（%）]

2.2 ERCC1 蛋白在不同病理中的表达情况

观察组胃癌组织中ERCC1 蛋白的阳性率与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度密切相关，肿瘤大、有淋巴结转移、肿瘤分期Ⅲ～Ⅳ期、分化程度高的患者ERCC1 蛋白的阳性率更高，与肿瘤小、无淋巴结转移、肿瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、分化程度低或中等患者相比差异显著（P＜0.05）。详见表2。

表2 ERCC1 蛋白在不同病理中的表达情况

2.3 ERCC1 蛋白阳性率与胃癌患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度的相关性

Pearson 程序中输入50 例胃癌患者的ERCC1 蛋白阳性率，分析ERCC1 蛋白阳性率与患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度的相关性，结果显示，ERCC1 蛋白阳性率与患者的年龄、性别无关，与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度呈正相关。详见表3。

表3 ERCC1 蛋白阳性率与胃癌患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度的相关性

3 讨论

胃癌是起源于胃黏膜上皮细胞的恶性肿瘤，统计显示该病的发病率居恶性肿瘤首位[5]。胃癌可发生在胃的任何部位。本病的发生与幽门螺杆菌感染、遗传、环境、饮食、慢性胃炎等因素密切相关。大部分胃癌患者在发病早期均无明显症状，少数患者可出现轻微饱胀不适、消化不良等症状，因此患者的重视程度不高。在疾病进展过程中患者可出现上腹部疼痛、体重下降等症状，疾病晚期可出现贫血、厌食等症状，导致患者体重持续下降，形成恶病质[6]。近年来随着我国经济的发展，人们对自身健康的关注度越来越高，如何在胃癌早期实现诊断与治疗成为当前临床亟待解决的问题[7]。临床研究发现，NER 途径是修复DNA 损伤的途径之一，而ERCC1 为NER 途径中的重要分子[8]。从生理角度分析，ERCC1 蛋白位于染色体19q13-2 中，含有10 个外显子，该蛋白单独存在时并不十分稳定，但可以有效识别并切除损伤的DNA链5 端[9-10]。其次，ERCC1 蛋白可参与双链断裂修复途径，同时对链间交联进行修复。此外，有研究发现ERCC1 蛋白在机体中的表达可准确反映恶性肿瘤患者瘤体内DNA 损伤的修复能力。为进一步了解RCC1蛋白的实际应用价值，本文遴选50 例胃癌患者进行研究，结果显示，观察组病灶组织中ERCC1 蛋白的阳性率相较于癌旁组织、对照组均更高，但观察组癌旁组织中ERCC1 蛋白的阳性率与对照组相比无明显差异；Pearson 相关性分析显示，ERCC1 蛋白阳性率与胃癌患者的年龄、性别无关，与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度呈正相关。可见，ERCC1蛋白在胃癌组织中呈现高表达情况，可准确反映本病的发生、进展情况，为临床评估患者的病情提供参考。研究发现，基因损伤程度主要取决于致癌物的剂量及细胞修复受损基因的能力，细胞受损多比细胞受损少的患者更容易出现免疫逃逸现象，可避开正常免疫监管，因此肿瘤增殖速度越快其恶性程度越高[11]。ERCC1 转录、翻译的蛋白质可及时对受损的DNA 进行修复，确保机体内突变的基因得到修复，达到预防癌细胞持续进展的目的，从而可降低肿瘤的发生率或延缓肿瘤的进展[12-14]。查阅资料[15]发现，临床关于ERCC1 蛋白在癌症患者预后评估中的价值存在分歧，但近年来随着相关研究的深入，发现ERCC1 在辅助化疗中的预测效果理想，且在非小细胞肺癌中获得了良好的预测效果，因此后期可就ERCC1 蛋白预测胃癌患者预后的价值进行系统分析。

综上所述，ERCC1 蛋白在胃癌组织中呈高表达，可反映胃癌的严重程度、分期、分化程度等，为本病的临床诊治提供参考。但本研究设计方案较为简单，存在纳入样本数量有限、观察指标少等问题，通过对比虽可证实ERCC1 蛋白在胃癌病理诊断中的应用价值，但无法规避研究偏倚性，鉴于此，后期需优化研究设计方案，为相关研究及临床治疗提供参考和指导。