暗褐网柄牛肝菌废菌渣为主料栽培巨大口蘑试验

杨天伟，刘 静，高 锋，何明霞，许欣景，方艺伟，张春霞

（云南省热带作物科学研究所，云南景洪 666100）

暗褐网柄牛肝菌[Phlebopus portentosus（Berk.& Broome.）Boedijn]是世界上第一个能够进行菇房人工栽培的牛肝菌类食用菌，目前已实现工厂化周年栽培生产及经济林下仿生栽培［1-3］。暗褐网柄牛肝菌菌肉肥厚、味道鲜美、口感脆嫩，富含蛋白质、氨基酸、纤维素及多种矿质元素，深受国内外消费者青睐［4］。为满足市场需求，暗褐网柄牛肝菌栽培规模不断扩大，收菇后的废菌渣数量也随之增加。

暗褐网柄牛肝菌为“贵族”食用菌，对栽培生产的养分需求较高，其栽培基质由木屑和锯末60%、谷粒30%、土壤10%构成［5］。然而，暗褐网柄牛肝菌菌丝在生长过程中不能分泌降解木质素所需的漆酶、木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶等，仅能分泌少量降解纤维素的羧甲基纤维素钠酶；基因组学研究也发现，暗褐网柄牛肝菌缺乏或只含有少量降解木质素和纤维素的调控基因［5-6］。前期课题组分析了暗褐网柄牛肝菌栽培基质在出菇前后的营养成分变化情况，发现出菇前后纤维素和木质素含量没有明显变化；与原材料相比，出菇后栽培基质中的纤维素、木质素只减少了0.55%和0.34%，表明暗褐网柄牛肝菌对纤维素、木质素的利用率极低［7］。可见，暗褐网柄牛肝菌废菌渣中还存在大量富含纤维素、木质素的营养物质未被利用，其再利用值得深入研究。

巨大口蘑（Tricholoma giganteumMassee）又名大白口蘑、金福菇、络巴伊菌、大树菇、白松茸等，是珍稀美味食用菌之一［8-9］，国内主要分布于云南省的普洱市、西双版纳州、德宏州、玉溪市，广西南宁市，海南省海口市和福建省福州市等热带亚热带地区，属于高温型真菌，其菌丝最适生长温度为28～30 ℃，最适出菇温度为26～32 ℃［10-11］。巨大口蘑口感鲜美，甜而不腻，极具营养价值，深受消费者喜爱，目前已在中国、日本、韩国等有小规模栽培生产，人工栽培一般以木屑、稻草、玉米芯、甘蔗渣等作为主要原料［12-14］。本研究根据巨大口蘑人工栽培的营养需求，探索以暗褐网柄牛肝菌废菌渣为主料（占栽培料的70%以上），加入少量麸皮、锯末等原料来栽培巨大口蘑，充分利用暗褐网柄牛肝菌废菌包营养成分，提高暗褐网柄牛肝菌栽培基质的总体生物学转化率，在充分利用资源的同时产生更多的经济和生态效益。

1 材料和方法

1.1 材料

暗褐网柄牛肝菌废菌渣，锯末、麸皮、甘蔗渣、玉米面、石灰等。供试菌株为通过菌种分离筛选出的野生巨大口蘑优良菌株，编号为j003，保存于云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物利用研究中心。

1.2 方法

1.2.1 菌种制作

菌种扩繁培养基为马铃薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨2 g、硫酸镁1 g、磷酸二氢钾1 g、琼脂18 g、水1 000 mL。先将马铃薯切薄片，煮沸10 min 后用3 层纱布过滤，取汁并定容到1 000 mL，加入其余材料混合均匀，分装到试管中，经高温高压灭菌后摆成斜面，冷却备用。巨大口蘑j003菌株通过转管扩繁后得到大量试管菌种。

液体菌种培养基为马铃薯200 g、玉米粉5 g、葡萄糖20 g、蛋白胨2 g、硫酸镁1 g、磷酸二氢钾1 g、水1 000 mL。先将马铃薯和玉米粉混合煮沸10 min，用3 层纱布过滤，取汁并定容到1 000 mL，加入其余药品混合均匀，分装到500 mL 三角瓶，每瓶装250 mL，高温高压灭菌30 min，冷却备用。将巨大口蘑试管菌种转接到液体培养基中，每瓶接入6 块约5 cm2的菌种块，置于150 r/min 的摇床，28℃避光培养6～7 d，得到巨大口蘑液体菌种。

1.2.2 废菌包预处理

用脱袋、粉碎一体机将采菇后被杂菌感染或因长势不良被淘汰的暗褐网柄牛肝菌废菌包（去除塑料菌袋）粉碎成小块，粉碎后的菌渣堆放好后淋上适量的水，覆盖薄膜和遮阳网进行发酵，每隔7 d 翻堆一次，连续发酵1 个月。通过高温发酵，杀死部分细菌及暗褐网柄牛肝菌菌丝体。

1.2.3 栽培基质配制及栽培种制作

采用不同比例暗褐网柄牛肝菌废菌渣+原材料的方式制作巨大口蘑栽培菌包，其中原材料由锯末（45%）、木屑（30%）、麸皮（15%）、豆粕（5%）、玉米面（3%）、蔗糖（1%）、石灰（1%）混合均匀而成。分别按表1 的比例称取暗褐网柄牛肝菌废菌渣和原材料，将二者混合均匀，加水使培养料含水量达到60%～65%，装袋制成巨大口蘑的栽培菌包。每个处理制作20 个菌包，装袋后置于121 ℃高温高压灭菌锅中灭菌2 h，冷却备用。

表1 暗褐网柄牛肝菌废菌渣及原材料用量比例 %

1.2.4 接种

将巨大口蘑液体菌种接入栽培菌袋，每袋接种约10 mL，接种后置于28 ℃培养房中暗光培养，观察记录不同处理巨大口蘑的菌丝生长速度、菌丝满袋时间。

1.2.5 覆土

当巨大口蘑菌丝长满菌袋，其表面出现淡黄色液体时，菌丝进入生理成熟期，可进行覆土出菇。每个处理挖一条长×宽约1.2 m×1.0 m，深度约20 cm 的畦，脱袋后的菌棒直立摆放在畦床内，菌棒之间相隔8～10 cm，空隙用土壤填充，并在表面覆上4～5 cm 土壤。覆土后注意通风，适时喷水，保持土壤湿润。

1.2.6 出菇管理及采收

待土壤表面出现大量白色菌丝后，调节水、气，促使菌丝由营养生长转入生殖生长；减少喷水，增加通风，刺激菌丝倒伏、扭结。待原基形成后增加适当光照，增加空气湿度，避免直接向原基喷水。当原基长到3 cm 左右，适当增加喷水量。根据巨大口蘑菌柄长度及菌盖大小，在菌盖尚未平展时及时采收。记录每种处理巨大口蘑的鲜菇产量，计算生物学转化率，生物学转化率=鲜菇重÷栽培基质干重×100%。

2 结果与分析

2.1 废菌渣用量对菌丝生长的影响

试验结果（表2）表明，以不同暗褐网柄牛肝菌废菌渣为主料培养巨大口蘑，菌丝均能正常生长，菌丝洁白、生长整齐。70%暗褐网柄牛肝菌废菌渣+30%原材料（处理1），巨大口蘑的菌丝生长速度为（9.65±0.52）mm/d，35 d 长满菌袋，与对照相比未达到显著差异。随着废菌渣用量增加，菌丝生长速度逐渐降低，当废菌渣用量达到95%时，菌丝生长速度为（6.83±0.74）mm/d，需要41 d长满菌袋；完全用废菌渣培养巨大口蘑的生长速度最低，仅为（6.49±0.33）mm/d，需要43 d 长满菌袋，显著慢于对照和废菌渣用量较少（70%～80%）的处理（P＜0.05）。

2.2 出菇情况

覆土约26 d 后，覆土层表面出现大量原基和幼菇（图1），约33 d 后，子实体成熟（图2），需及时采收。不同比例的暗褐网柄牛肝菌废菌渣+原材料栽培巨大口蘑均能出菇，菌包覆土后出菇率为100%。然而子实体生长阶段，因受高温天气及虫害影响，少量巨大口蘑原基出现枯死或子实体被蜗牛、蛞蝓危害的现象（图3），影响巨大口蘑的最终产量。

图1 巨大口蘑原基和幼菇生长情况

图2 成熟的巨大口蘑子实体

图3 高温天气及昆虫危害的巨大口蘑子实体

2.3 产量及生物学转化率

由表3 可知，采用不同比例的暗褐网柄牛肝菌废菌渣为主料栽培巨大口蘑的平均产量为263.87±12.93～401.33±6.10 g/袋，生物学转化率在57.36%～87.25%；采用原材料栽培巨大口蘑（对照）的产量和生物学转化率分别为（410.96±7.42）g/袋和89.34%。暗褐网柄牛肝菌废菌渣为主料栽培的巨大口蘑产量和生物学转化率均低于对照组，但在成本及资源高效利用方面，以废菌渣为主料栽培巨大口蘑具有明显的优势。暗褐网柄牛肝菌废菌渣用量达到95%时（处理6），产量和生物学转化率最低，这与栽培过程中遭遇恶劣气候环境造成部分原基枯死有一定关系。

表3 巨大口蘑的产量及生物学效率

3 结论与讨论

本研究采用不同比例暗褐网柄牛肝菌废菌渣+原材料的方式成功栽培出巨大口蘑，菌丝生长速度为6.49±0.33～9.65±0.52 mm/d，鲜菇产量为263.87±12.93～401.33±6.10 g/袋，生物学转化率为57.36%～87.25%，表明巨大口蘑可以充分利用暗褐网柄牛肝菌废菌渣中的营养物质，实现了资源高效利用。

暗褐网柄牛肝菌已实现工厂化周年栽培，每天产生的菌渣数量庞大［2］，而暗褐网柄牛肝菌的生物学转化率低，收菇后的废菌渣中余留了丰富的营养物质。许欣景等［15］发现，暗褐网柄牛肝菌废菌渣作为有机肥能够有效促进蔬菜生长，增加蔬菜产量。采用暗褐网柄牛肝菌废菌渣为主料栽培的巨大口蘑的产量和生物学转化率虽略低于采用原材料栽培的对照组，但成本投入低，实现了农业废弃资源再次利用，对产业可持续发展有重要意义。

在巨大口蘑栽培生产中，应综合考虑菌种培养周期、鲜菇产量及生物学转化率，建议将暗褐网柄牛肝菌废菌渣用量控制在90%以内，这样可以保证菌丝生长速度快、生物学转化率高，栽培效益好。同时需注意，巨大口蘑为高温型食用菌，在西双版纳的适宜栽培时期为4—10 月，这期间高温多雨，出菇管理十分重要。尤其是原基分化到幼菇生长阶段，既要保证土壤湿润，有散射光，又要避免雨水冲刷和阳光直射；水分过量、温度过高及阳光直射都会影响到原基生长，甚至造成原基死亡，最终影响鲜菇产量及品质。另外，蜗牛、蛞蝓、白蚁等昆虫危害是影响巨大口蘑产量和品质的重要原因，其中蜗牛、蛞蝓会啃食出菇后的子实体，白蚁危害土壤中的菌棒，影响菌丝生长及出菇。因此，人工栽培巨大口蘑建议选择大棚设施或菇房栽培。