高效液相色谱法测定食品中三氯蔗糖的含量

2023-07-17王振雷

现代食品 2023年8期

◎ 王振雷，王影，张威，姜珊

（辽源市食品质量安全检测中心，吉林辽源 136200）

三氯蔗糖，别称蔗糖素，甜度是蔗糖的600~800倍，其凭借纯正的甜味与无热量的优点，在各类食品中广泛应用[1]。《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）中明确规定，食品中使用的三氯蔗糖的添加量在0.25~1.5 g·kg-1。虽然在规定剂量范围内使用三氯蔗糖不会对人体构成危害，但超出规定量后会危害人体健康，所以有必要严格监控三氯蔗糖含量[2-4]。其中，高效液相色谱法具备良好的准确性与较高的普及率，其应用相对更广泛[5]。现行相关标准明确可用的检测方法包含液相色谱-示差检测等，本文以该标准为根据，以测定食品中三氯蔗糖为目的，建立高效液相色谱法。

1 材料与方法

1.1 材料

超纯水（电导率＞18 MΩ）；三氯蔗糖标准品（纯度≥99%）；甲醇（分析纯）；乙腈（德国色谱纯）。

超声波清洗器（KQ-500B型）；配示差折光检测器（RID-20A型）的高效液相色谱仪（LC-20A型）；分析天平（MP5002型）；氮吹仪（AutoEVA-60型）。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm）；水温：35 ℃；柱温：35 ℃；流动相：超纯水-乙腈（V∶V=89∶11）；采用示差检测器；进样量：10 μL；流速：1.0 mL·min-1。

1.2.2 样品前处理

精准量取均匀研磨的样品2.0 g并移至离心管（50 mL）内，添加蒸馏水（5 mL）后持续2 min涡旋振荡，添加15 mL甲醇，继续振荡30 s，然后超声处理20 min，用4 500 r·min-1的条件离心5 min，将上清液移入蒸发皿内。残渣加入10 mL 75%甲醇进行一次提取，上清液与提取液合并（如果是含较多脂肪的样品，可针对提取液展开一次净化处理，处理时采用30 mL正己烷，处理完成后提取下层液），并通过提前活化处理的固相萃取小柱，1 mL水淋洗，待所有液体从柱中流出后进行洗脱（3 mL甲醇），收集洗脱液[6]。50 ℃氮吹至近干，残留物内添加15%乙腈并定容至1 mL，溶液进行20 s涡旋振荡处理，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤滤液，待测。

1.2.3 三氯蔗糖标准溶液配制

精密量取100.0 mg三氯蔗糖标准品于10 mL容量瓶内，加水溶解并定容至刻度，完成三氯蔗糖标准储备液的制备，浓度为10 mg·mL-1，保存至4 ℃冰箱[7]。精密吸取0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL、4.00 mL和6.00 mL三氯蔗糖标准储备液置于10 mL容量瓶内，依次加水定容至刻度，完成浓度分别为0.02 mg·mL-1、0.05 mg·mL-1、0.10 mg·mL-1、0.40 mg·mL-1和0.60 mg·mL-1的标准工作液的配制。

2 结果与分析

2.1 校准曲线绘制

由图1可知，当三氯蔗糖标准工作液浓度在0.02~0.60 mg·mL-1，三氯蔗糖线性关系良好，回归方程为Y=171 857X-178.077，检出限为2.0 mg·kg-1，相关系数为0.999 7。

图1 三氯蔗糖标准曲线图

2.2 加标回收率测定

称取样品适量，依照线性范围分别添加0.030 mg·mL-1、0.060 mg·mL-1、0.150 mg·mL-1、0.300 mg·mL-1、0.450 mg·mL-1、0.500 mg·mL-1、三氯蔗糖标准物质，参照1.3.2方法展开处理，连续6次进行加标回收实验，结果见表1。由表1可知，三氯蔗糖标准物质的平均回收率为99.32%，相对标准偏差为0.66%，结果可靠准确，与相关标准要求相符合。

表1 加标回收率测定结果表

2.3 精密度测定

选择0.60 mg·mL-1标准工作液，参照1.3.1实验条件连续进行6次测试，三氯蔗糖保留时间、峰面积等见表2。

表2 精密度测定结果表

2.4 样品测定

在本地超市等场所采购饼干共计50份样品，经检测发现，样本配有三氯蔗糖标识时，均有三氯蔗糖检出，而未标识有三氯蔗糖的样本检测结果并未超过0.25 g·kg-1的检出限，无过量添加情况。

2.5 条件优化

本试验条件优化内容仅选择前处理条件。GB 22255—2014中提及制备样品时持续10 min离心（3 000 r·min-1），本实验尝试4 500 r·min-1离心处理5 min，经固相萃取小柱对样品上清液进行萃取时，小柱不易堵塞，缩短了前处理时间。同时，该标准中提及沸水浴蒸干样品，本实验尝试用氮吹仪吹干，结果表明能提高工作效率，减少检测成本支出。