淡水鱼中多兽药残留状况及风险评估

刘卫娟 管理 贾润芳 杨幸子 王静静

摘 要：为了解咸阳市淡水鱼中磺胺类和恩诺沙星的残留量水平，评估淡水鱼中兽药残留的膳食暴露风险，本研究采集100份样品，用高效液相色谱-串联质谱法对其兽药残留进行检测，结合居民膳食情况，评估残留风险。结果显示，磺胺类检出率4%，检出率低且没有超出最大残留限值；恩诺沙星检出率53%，检出率较高，有一份样品超出最大残留限值。食品安全指数法显示，磺胺类最大IFS为0.001 9，恩诺沙星最大IFS为0.032，安全状态可以接受，膳食风险低。

關键词：淡水鱼；磺胺类；恩诺沙星；风险评估

Abstract： To understand the residual levels of sulfonamides and enrofloxacin in freshwater fish of Xianyang， and to assess the dietary exposure risk of veterinary drug residues. In this study， one hundred samples were detected by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry， and the residual risk was assessed based on the dietary conditions of residents. The results showed that the detection rate of sulfonamides was 4%， which was low and didnt exceed the MRL. But the detection rate of enrofloxacin was 53%， which was high and one sample exceeded the MRL. IFS of sulfonamides and enrofloxacin were 0.001 9 and 0.032 respectively. The safety state was acceptable and the dietary risk was low.

Keywords： freshwater fish; sulfonamides; enrofloxacin; risk assessment

磺胺类和喹诺酮类药物是一类人工合成的抗菌药，因其结构稳定、抗菌谱广主要用于预防和治疗泌尿生殖系统和呼吸道细菌感染等疾病[1]。目前水产养殖常在饲料中添加药物，但过量使用药物会造成严重的兽药残留问题[2]。该类药物会给人体健康带来巨大的风险，因此开展兽药残留检测和健康风险评价工作十分必要[3]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品与试剂

采集黑鱼、草鱼、鲫鱼、鲤鱼、江团共计100份，取其皮和肉进行均质，冷冻保存；甲醇、乙腈、甲酸、正己烷（色谱纯，德国Merck公司）；超纯水系统（德国Millipore公司）；标准物质：磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、恩诺沙星、环丙沙星、磺胺邻二甲氧嘧啶-D3、磺胺间二甲氧嘧啶-D6、恩诺沙星-D5和环丙沙星-D8（美国CATO公司）。

1.1.2 仪器与设备

1290 Infinity II-6470B型高效液相色谱-串联质谱仪（美国Agilent公司）；Poroshell 120 EC-C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，2.7 μm，美国Agilent公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 样品提取与净化

样品解冻恢复至室温，称取试样5.0 g于50 mL离心管中，准确加入50 μL 1 μg·mL-1的混合内标标准工作液，涡旋混合并避光放置10 min。加入10 g无水硫酸涡旋混匀，再加入20 mL 1%甲酸乙腈涡旋混合1 min，超声波提取10 min。10 000 r·min-1冷冻离心5 min，取上清液于50 mL 梨形瓶中。用20 mL 1%甲酸乙腈重复提取一次，合并提取液，于40 ℃水浴旋转蒸发至干。加入1.0 mL 20%甲醇溶液溶解残留物，再加入2.0 mL正己烷除脂净化，取下层清液过0.2 μm滤膜，按照《水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》（农业部1077号公告-1-2008）进行检测。

1.2.2 标准溶液配制

（1）混合标准储备液配制。用甲醇溶解各标准物质配制100 μg·mL-1混合标准储备液，用甲醇溶解各内标标准物质配制100 μg·mL-1混合内标标准储备液，于冰箱冷冻避光保存，有效期6个月。

（2）混合标准工作曲线配制。用甲醇逐级稀释储备液制备1 μg·mL-1的混合标准工作液和混合标准内标工作液，用甲醇稀释成浓度分别为0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.15 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1的混合标准工作曲线，内标浓度为0.05 μg·mL-1，临用现配。

1.2.3 评价标准

参照《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》（GB 31650—2019）[4]的相关规定，鱼中磺胺类药物（兽药原型之和）的最大残留限量为100 μg·kg-1，恩诺沙星（恩诺沙星和环丙沙星之和）的最大残留限量为100 μg·kg-1。

对于未检出的样品，依据《国家食品安全风险评估报告》对兽药检测结果进行处理时，若有≤60%的检测结果实测值低于方法LOD，评估时均赋予1/2 LOD；若有≥60%的检测结果实测值低于方法LOD，评估时赋予LOD值[5-6]。

1.2.4 膳食暴露评估

膳食暴露评估是衡量由动物源食品引入兽药残留量所带来风险的有效方法之一。本文采用食品安全指数法对磺胺类和恩诺沙星的残留量进行风险评估，计算公式为

式中：EDI为每日化合物的累计暴露量，μg·（kg bw）-1；Ci为样品中化合物的残留水平，μg·kg-1；X为日均摄入量，g·d-1；bw为人群平均体重，kg；ADI为日允许摄入量，μg·kg-1；IFS为化合物的食品安全指数。

《中國居民膳食指南（2022）》[7]建议每天摄入鱼肉120～200 g，式（1）中X以200 g·d-1计；查询GB 31650—2019，恩诺沙星的ADI值为6.2 μg·（kg bw）-1，磺胺类药物的ADI值为50 μg·（kg bw）-1；成人平均体重按60 kg计算。IFS数值越低表示食品安全风险越低，当IFS＜1时，表示化合物对食品安全没有影响；当IFS=1时，表示化合物对食品安全的影响可以接受；当IFS＞1时，表示化合物对食品安全的影响不可接受。

2 结果与分析

2.1 线性范围、定量限、回收率及相对标准偏差

将配制的混合标准工作曲线溶液进行进样检测，以化合物与内标物的峰面积比值为纵坐标，化合物与内标物的浓度比值为横坐标，绘制标准曲线。以10倍信噪比作为方法的定量限（LOQ）。称取阴性试样，添加2.0 μg·kg-1、20.0 μg·kg-1、100.0 μg·kg-1 3个水平标准溶液，冷藏过夜，提取净化，重复测定7次，进行加标回收实验，结果见表1。

由表1可知，各化合物在0.01～0.20 μg·mL-1线性良好，相关系数均≥0.998，LOQ为0.05～2.00 μg·kg-1，平均加标回收率为75.3%～107.7%，相对标准偏差为3.2%～9.9%，满足兽药残留检测要求。

2.2 总体检测情况

本研究检测的100份鱼中，共检出3种化合物，分别为磺胺二甲异噁唑、恩诺沙星和环丙沙星，其他磺胺类化合物均未检出。共有54份样品检出了磺胺类、恩诺沙星药物残留，总检出率为54%；有3份样品同时检出恩诺沙星（恩诺沙星与环丙沙星，以下简称恩诺沙星）和磺胺类药物，占总体检出率的5.6%。其中共检出恩诺沙星53份，超出最大残留限量1份；共检出磺胺类4份，均未超出最大残留限量，检出率分别为53%和4%，超标率分别为1%和0%。从检出的残留水平来看磺胺类的检出浓度在0～28 μg·kg-1，平均值为2.85 μg·kg-1；恩诺沙星的检出浓度在0～588 μg·kg-1，平均值为13.0 μg·kg-1。

检测结果显示，淡水鱼中恩诺沙星的使用率较高，个别样品的检出含量超出最大残留限量，其余样品检出含量在限量范围内。养殖户为了追求经济利益，在未达到休药期就开始销售，导致恩诺沙星的超标问题突出，故恩诺沙星是需要重点监测的对象。

2.3 兽药残留健康风险评估

市售淡水鱼中磺胺类和恩诺沙星食品安全指数结果见表2。每日摄入量的平均值和最大值均小于国家标准制定的ADI。市售淡水鱼中磺胺类和恩诺沙星IFS均＜1，说明磺胺类药物和恩诺沙星的暴露量均为可接受。

3 讨论

检测结果显示，磺胺类化合物除磺胺二甲异噁唑有检出外，其他磺胺类化合物均未检出，检出率仅为4%且都未超过限量，其IFS远小于1。恩诺沙星的检出率为53%，检出率偏高。每日摄入量的平均值和最大值为0.043 μg·（kg bw）-1和1.96 μg·（kg bw）-1，小于GB 31650—2019中制定的ADI，IFS也小于1。说明咸阳市居民淡水鱼类膳食中磺胺类和恩诺沙星的暴露量总体安全，即使偶尔单次淡水鱼的摄入量有所增加，仍属于安全范围。

喹诺酮类药物是浓度依赖性抗生素，恩诺沙星和环丙沙星由于很好的吸收率和稳定性，其停药期较长。而养殖户为了治疗水生动物的疾病、促进鱼的日增量和饲料转化率滥用兽药，未达到休药期提前售卖，导致个别样品超标的现象存在。这些兽药会通过食物链进入人体，对人体健康产生危害，增加人体耐药性和抗药性。为保证饮食安全，建议人们选购饲养周期短、体内有毒有害物质蓄积少的鱼类；此外，要加强养殖户规范合理使用兽药的意识，监管部门及时监督追溯。

参考文献

[1]余杰，唐勇，周书来，等.猪肉中几种磺胺类药物测定的探讨和改进[J].食品工业，2022，43（4）：147-151.

[2]张石云，宋超，陈家长.喹诺酮类抗生素在水产养殖中应用的研究进展[J].江苏农业科学，2019，47（3）：32-36.

[3]汪萍，罗杰鸿.高效液相色谱串联质谱法同时测定猪肉中9种磺胺类药物残留[J].应用化工，2018，47（10）：2292-2295.

[4]中华人民共和国农业农村部，国家卫生健康委员会，国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量：GB 31650—2019[S].北京：中国标准出版社，2019．

[5]国家食品安全风险评估中心.食品安全风险评估数据需求及采集要求[EB/OL].（2013-12-16）[2023-03-18].https：//www.cfsa.net.cn/Article/News_List.aspx？channelcode=0BF7C4EABE99AB17785E8C097FEFB9C0C989A3242E08B589.

[6]方兰云，潘胜东，陆蓓蓓，等.2018-2020年宁波市动物源性食品中喹诺酮和四环素类兽药残留污染状况及暴露评估[J].卫生研究，2022，51（1）：113-114.

[7]中国营养学会.中国居民膳食指南（2022版）[M].北京：人民卫生出版社，2022.

作者简介：刘卫娟（1988—），女，陕西咸阳人，硕士，工程师。研究方向：质量分析与检验。